MEF 2A基因沉默對(duì)小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的影響

李松森，牛曉華，張守彥，王學(xué)慧

作者單位：1 471000 洛陽,洛陽市中心醫(yī)院心血管內(nèi)科;2 453100新鄉(xiāng),新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟?，CHD）是指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起的血管阻塞，或者冠狀動(dòng)脈（冠脈）發(fā)生功能性改變導(dǎo)致心肌缺血性壞死而引發(fā)的心臟疾病，是全球范圍內(nèi)致死和致殘率最高的疾病之一，尤其在發(fā)展中國(guó)家，CHD大大增加了社會(huì)的醫(yī)療負(fù)擔(dān)[1]。動(dòng)脈管壁發(fā)生慢性炎癥反應(yīng)以及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的破裂是CHD發(fā)生的主要病理基礎(chǔ)[2]。隨著對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化（AS）研究的深入，基因突變和基因多態(tài)性研究與AS的發(fā)病關(guān)系成為心血管疾病領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一[3]。我們認(rèn)為，從血管炎性反應(yīng)和內(nèi)皮細(xì)胞完整性相關(guān)基因入手，更有利于對(duì)AS發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制以及防治策略的探討。肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A（MEF 2A）是本世紀(jì)初最新發(fā)現(xiàn)的且受到普遍關(guān)注的AS相關(guān)基因[4]。有研究證實(shí)，MEF 2A在血管內(nèi)皮細(xì)胞上呈高表達(dá)，與維持血管內(nèi)皮功能和血管重塑密切相關(guān)，但是具體的作用機(jī)制，尤其是MEF 2A對(duì)于信號(hào)通路及細(xì)胞因子的調(diào)控作用中一直存有較大爭(zhēng)議[5]。本項(xiàng)研究通過特異性沉默小鼠MACE主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞MEF 2A基因的表達(dá)，觀察MACE細(xì)胞生物學(xué)行為的變化以及對(duì)多種細(xì)胞因子的影響，同時(shí)與ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞因子變化進(jìn)行對(duì)比，為MEF 2A作為AS的潛在治療靶點(diǎn)提供新的思路?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞及分組 ApoE-/-小鼠，8只，SPF級(jí)，雄性，20～22 g，購自維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2006-0009。飼養(yǎng)在本實(shí)驗(yàn)室SPF動(dòng)物房?jī)?nèi)，自由飲水進(jìn)食。MACE小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，購自深圳華拓生物。將細(xì)胞株接種至含有10%FBS胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分組：①M(fèi)ACE細(xì)胞空白對(duì)照組；②MACE細(xì)胞慢病毒陰性對(duì)照組（MACE-NC組）；③MEF 2A RNAi A、B、C、D組，選擇沉默率最高的靶點(diǎn)；④ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞組。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 內(nèi)皮細(xì)胞的分離和培養(yǎng) ①將小鼠頸椎脫臼處死，置于75%乙醇溶液中浸泡2 min；②將小鼠置于超凈工作臺(tái)中，采用手術(shù)刀逐層剖開小鼠胸部和腹部正中皮膚和肌肉組織，確定主動(dòng)脈；③分離主動(dòng)脈弓，并于主動(dòng)脈壁作一切口，分離動(dòng)脈被膜，完整取出胸腹腔主動(dòng)脈段，立即放入含有DMEM培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，沖洗4～5次；④采用無菌眼科剪將主動(dòng)脈盡量剪碎，將血管內(nèi)皮朝下，放入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；⑤48 h后觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)，更換細(xì)胞液，繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇 將凍存在液氮或者-80℃超低溫冰箱中的細(xì)胞凍存管取出，置于37℃恒溫水浴中1 min，離心，棄上清，加入PBS沖洗后，再次離心，棄上清；加入DMEM培養(yǎng)基，將細(xì)胞重懸，用吸管將細(xì)胞置入培養(yǎng)瓶中，加入5～7 ml新鮮培養(yǎng)液，置于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.3 細(xì)胞傳代 24～48 h更換細(xì)胞培養(yǎng)液，48 h傳代一次。用吸管棄去培養(yǎng)液，加入1 ml 0.25%胰蛋白酶，在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離程度，棄去胰蛋白酶，加入新鮮DMEM培養(yǎng)基，用吸管反復(fù)吹散貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞吹打均勻后，分裝至2～4瓶培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基，繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待用。

1.2.4 MEF 2A RNA干擾慢病毒載體的建立（1）從NCBI數(shù)據(jù)庫中查找MEF 2A的堿基序列，選擇MEF 2A基因A、B、C、D4個(gè)不同位點(diǎn)按照發(fā)夾結(jié)構(gòu)模式進(jìn)行RNAi，序列如下：①靶點(diǎn)A：5'-GCAAGCTGGAATTCTCCTTTG-3'；②靶點(diǎn)B：5'-GGGTCTTAGTATATTTCTTGG-3'；③靶點(diǎn)C：5'-GGCTCTCAGTGCGATTCTTGA-3'；④靶點(diǎn)D：5'-GCAACACTCTCCAGGATCACA-3'；⑤陰性對(duì)照：5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'。（2）RNAi構(gòu)建：①Oligo DNA退火；②酶切載體 LV3 pGLV/H1/GFP+Puro；③連接 LV3 pGLV/H1/GFP與DNA oligo片段；④轉(zhuǎn)染stb13細(xì)菌并檢測(cè)病毒滴度和DNA序列。

1.2.5 慢病毒轉(zhuǎn)染 將MACE細(xì)胞接種至6孔板中，待細(xì)胞匯合率為50%～60%時(shí)加入采用無血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋的慢病毒液（MOI=10～30）。8 h后，更換細(xì)胞培養(yǎng)液，加入含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)液。

1.2.6 提取總RNA ①將低溫保存的組織標(biāo)本取出，置于研缽中，加入液氮，迅速研磨至細(xì)粉狀；②加入1 ml預(yù)冷的Trizol，將組織標(biāo)本充分溶解后，用吸管置于預(yù)冷的EP管中，充分混合均勻，靜置5～10 min；③加200 ul氯仿，震蕩30 s，靜置5～10 min；④12 000 rpm離心，取上清；⑤加入500 μl異丙醇，震蕩30 s，靜置5～10 min；⑥12 000 rpm離心，棄上清；⑦加入1 ml 75%乙醇，震蕩30 s，12 000 rpm離心，棄上清；⑧將EP管倒置于濾紙上，將RNA充分干燥；⑨加入20 μl DEPC水溶解沉淀，分裝，置于-80℃保存?zhèn)溆?。采用凝膠電泳檢測(cè)RNA分子量；采用分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度。

1.2.7 RNA反轉(zhuǎn)錄 根據(jù)試劑盒說明書操作進(jìn)行。將cDNA保存至-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.8 實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RTPCR） 將20 μl反應(yīng)體系置于37℃恒溫水浴60 min，85℃ 5 s，加入去離子水至100 μl，各反應(yīng)孔取2 μl進(jìn)行PCR。冰浴中配制20 μl PCR反應(yīng)體系，95℃ 20 s預(yù)變性，95℃ 5 s，60℃ 30 s，循環(huán)45次。

1.2.9 蛋白免疫印跡 ①提取蛋白樣品；②蛋白樣品凝膠電泳；③轉(zhuǎn)膜；④封閉；⑤加入一抗孵育；⑥加入二抗孵育；⑦顯影；⑧采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)膜上的蛋白表達(dá)條帶，采用FluorChem FC3凝膠成像數(shù)碼分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，以積分光密度（IOD）表示灰度值。

1.3 主要試劑及儀器 （1）主要試劑：DMEM高糖細(xì)胞培養(yǎng)基和胰蛋白酶-EDTA細(xì)胞消化液（0.25%），美國(guó)GIBCO；FBS胎牛血清和鏈霉素-青霉素雙抗，美國(guó)ThermoFisher；Trizol試劑，美國(guó)Invitrogen；焦炭酸二乙酯（DEPC），美國(guó)Fluka；MEF 2A、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）及纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成并提供；DAB試劑盒，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、蛋白提取試劑盒，RNA酶抑制劑，美國(guó)Takara；ICAM-1、VCAM-1及PAI-1 ELISA試劑盒，武漢艾美捷科技有限公司；ICAM-1、VCAM-1及PAI-1抗體，美國(guó)Abcam。（2）主要儀器：HERcell1501型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo Forma；Eppendorf 5427 R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國(guó) Eppndorf；DI-CJ-2ND超凈工作臺(tái)，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；實(shí)時(shí)定量PCR儀，美國(guó)Bio-Rad；iMake多功能酶標(biāo)儀，日本Bio-Rad公司；CX41倒置光學(xué)顯微鏡和OLS4100激光共聚焦顯微鏡，日本OLYMPUS；電子分析天平，上海玉研科學(xué)儀器有限公司；Amersham電泳儀，瑞典Bioscience；恒溫水浴搖床和YCZ-40D型轉(zhuǎn)移電泳槽，北京六一儀器廠；FluorChem FC3凝膠成像數(shù)碼分析系統(tǒng)，美國(guó)ProteinSimple。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理；計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；對(duì)各組間變量行t檢驗(yàn)或方差分析；計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較采用方差分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MACE細(xì)胞和ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞MEF 2A基因的表達(dá) 經(jīng)RT-PCR方法檢測(cè)，ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞MEF 2A基因的表達(dá)水平明顯低于未經(jīng)任何處理的MACE細(xì)胞，P＜0.05（表1，圖1）。

2.2 MEF 2A 基因沉默率檢測(cè) MACE細(xì)胞轉(zhuǎn)染4 d后，通過RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，A、B、C、D4個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行RNA干擾，能明顯抑制MEF 2A基因的表達(dá)，與MACE細(xì)胞空白對(duì)照組和RNAi陰性對(duì)照組表達(dá)結(jié)果比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05。其中B位點(diǎn)基因沉默率最高（表2，圖2）。

2.3 各組細(xì)胞ICAM-l、VCAM-1和PAI-1的表達(dá)情況 經(jīng)ELISA檢測(cè)，MEF 2A B位點(diǎn)基因沉默組MACE細(xì)胞和ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)上清中，ICAM-1、VCAM-1、PAI-1的表達(dá)水平明顯升高，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05（表3）。另外，經(jīng)RT-PCR方法和western blot方法檢測(cè)，MEF 2A RNAi組MACE細(xì)胞和ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1、VCAM-1、PAI-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05（表4～5）（圖3～4）。

2.4 MEF 2A mRNA與ICAM-1、VACM-1、PAI-1 mRNA表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MEF 2A表達(dá)量與ICAM-l、VCAM-1和PAI-1的表達(dá)量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性（r＝-0.985，-0.805，-0.959，P均＜0.05）。即MEF 2A表達(dá)量越低，ICAM-l、VCAM-1和PAI-1的表達(dá)量越高（表6）。

3 討論

表1 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞MEF 2A mRNA表達(dá)情況（±s）

表1 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞MEF 2A mRNA表達(dá)情況（±s）

注：MEF 2A：肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A；β-actin：β-肌動(dòng)蛋白

mRNA MACE細(xì)胞 ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞t值 P值MEF 2A/β-actin0.87±0.120.19±0.04 13.1680.000

圖1 RT-PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞MEF 2A基因表達(dá)情況（*與MACE細(xì)胞比較，P＜0.05）

表2 RT-PCR檢測(cè)各組MACE細(xì)胞MEF 2A mRNA表達(dá)情況（±s）

表2 RT-PCR檢測(cè)各組MACE細(xì)胞MEF 2A mRNA表達(dá)情況（±s）

注：MEF 2A：肌細(xì)胞增強(qiáng)因子 2A；β-actin：β-肌動(dòng)蛋白；RNAi-A，B，C，D是基因沉默的四個(gè)靶點(diǎn)

mRNA MACE細(xì)胞空白 陰性對(duì)照 RNAi-A RNAi-B RNAi-C RNAi-D MEF 2A/β-actin0.83±0.04 0.82±0.06 0.30±0.01 0.19±0.01 0.36±0.03 0.43±0.04 t值 — 0.340 31.487 38.022 23.025 17.321 P值 — 0.741 0.000 0.000 0.000 0.000

動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和破裂造成動(dòng)脈阻塞或者管徑狹窄是引起一系列心血管疾病的病理基礎(chǔ)[6]。在正常生理情況下，內(nèi)皮細(xì)胞空間結(jié)構(gòu)完整連續(xù)，可維持血管正常的收縮、舒張平衡狀態(tài)，調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移、分化等，保證血管正常的通透性，為黏附因子抑制因子提供作用空間，形成完整的血液-動(dòng)脈屏障，避免血液中有害物質(zhì)損傷血管平滑肌細(xì)胞[7,8]。當(dāng)血管內(nèi)皮受到多種炎性因子刺激時(shí)，結(jié)構(gòu)和功能受損，導(dǎo)致脂質(zhì)大量集聚，血管通透性改變；促使血管平滑肌大量增殖，形成血栓和血小板黏附，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成[9]。

圖2 RT-PCR檢測(cè)各位點(diǎn)MEF 2A基因沉默率（*與MACE細(xì)胞空白對(duì)照組比較，P＜0.05）

盡管對(duì)于AS的臨床研究日益深入，但核因子-κB（NF-κB）仍是目前靶向治療研究中最成熟的靶點(diǎn)蛋白[10]，它可以調(diào)節(jié)多種參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子的表達(dá)過程，包括ICAM-1、VCAM-1等細(xì)胞黏附因子以及趨化因子等[11]。ICAM-1和VCAM-1都屬于免疫球蛋白超家族成員之一，是內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞表面主要的表達(dá)受體之一，當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞功能受損，ICAM-1表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致表面黏附性發(fā)生改變，促使單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞下層形成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞大量吞噬脂質(zhì)分泌細(xì)胞外基質(zhì)，形成泡沫細(xì)胞，當(dāng)泡沫細(xì)胞破裂時(shí)，易導(dǎo)致血栓生成[12]。VCAM-1是促進(jìn)白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附的重要分子，AS發(fā)生早期，白細(xì)胞黏附于動(dòng)脈硬化部位內(nèi)膜表面，通過胞間連接進(jìn)入內(nèi)膜[13]，因此，ICAM-1和VCAM-1高表達(dá)是AS發(fā)病早期的病變機(jī)制。

除此以外，PAI-1與AS的形成也密切相關(guān)。PAI-1是血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)的serpins超家族成員之一，屬于纖溶酶原激活物主要的抑制分子，可抑制纖維蛋白降解，發(fā)揮抗纖溶作用[14]。研究顯示，PAI-1不僅可促使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，還與血管平滑肌細(xì)胞增殖及微血管形成有關(guān)。探討影響ICAM-1、VCMA-1和PAI-1表達(dá)的相關(guān)基因，對(duì)于研究AS的發(fā)病機(jī)制十分重要。

表3 ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中ICAM-l、VCAM-1和PAI-1的表達(dá)情況（±s）

表3 ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中ICAM-l、VCAM-1和PAI-1的表達(dá)情況（±s）

注：ICAM-1：細(xì)胞間黏附分子-1；VCAM-1：血管細(xì)胞黏附分子-1；PAI-1：纖溶酶原激活物抑制劑-1；與空白對(duì)照組比較，aP＜0.05

細(xì)胞 組別 ICAM-1（ng/ml） VCAM-1（ng/ml） PAI-1（ng/ml）MACE細(xì)胞 空白對(duì)照 0.98±0.12 1.92±0.11 1.22±0.09陰性對(duì)照 1.02±0.17 1.98±0.16 1.19±0.10 MEF 2A RNAi 2.15±0.14a 4.76±0.23a 2.37±0.16a ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 — 2.37±0.20a 4.85±0.21a 2.41±0.18a χ2/F值 — 25.894 43.155 17.268 P值 — 0.001 0.001 0.001

表4 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞ICAM-l、VCAM-1和PAI-1 mRNA的表達(dá)情況（±s）

表4 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞ICAM-l、VCAM-1和PAI-1 mRNA的表達(dá)情況（±s）

注：ICAM-1：細(xì)胞間黏附分子-1；VCAM-1：血管細(xì)胞黏附分子-1；PAI-1：纖溶酶原激活物抑制劑-1；MEF 2A：肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A；β-actin：β-肌動(dòng)蛋白；RNAi：RNA干擾；與空白對(duì)照組比較，aP＜0.05

細(xì)胞 組別 ICAM-1/β-actin VCAM-1/β-actin PAI-1/β-actin MACE細(xì)胞 空白對(duì)照 0.68±0.03 0.74±0.04 0.57±0.03陰性對(duì)照 0.62±0.03 0.71±0.03 0.54±0.03 MEF 2A RNAi 1.17±0.06a 1.36±0.09a 0.98±0.06a ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 — 1.23±0.07a 1.39±0.07a 1.02±0.07a χ2/F值 — 5.188 6.334 5.188 P值 — 0.159 0.096 0.159

表5 Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞ICAM-l、VCAM-1和PAI-1 蛋白的表達(dá)情況（±s）

表5 Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞ICAM-l、VCAM-1和PAI-1 蛋白的表達(dá)情況（±s）

注：ICAM-1：細(xì)胞間黏附分子-1；VCAM-1：血管細(xì)胞黏附分子-1；PAI-1：纖溶酶原激活物抑制劑-1；MEF 2A：肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A；β-actin：β-肌動(dòng)蛋白；RNAi：RNA干擾；與空白對(duì)照組比較，aP＜0.05

細(xì)胞 組別 ICAM-1/β-actin VCAM-1/β-actin PAI-1/β-actin MACE細(xì)胞 空白對(duì)照 0.41±0.02 0.34±0.02 0.22±0.01陰性對(duì)照 0.44±0.03 0.35±0.02 0.21±0.01 MEF 2A RNAi 1.02±0.09a 0.76±0.03a 0.95±0.04a ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 — 0.98±0.10a 0.77±0.03a 0.92±0.05a χ2/F值 — 13.584 1.478 16.192 P值 — 0.004 0.687 0.001

圖3 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞ICAM-l、VCAM-1和PAI-1 mRNA的表達(dá)情況（*與MACE細(xì)胞空白對(duì)照組比較，P＜0.05）

圖4 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞ICAM-l、VCAM-1和PAI-1蛋白的表達(dá)情況（*與MACE細(xì)胞空白對(duì)照組比較，P＜0.05）

表6 ICAM-l、VCAM-1和PAI-1 mRNA與MEF 2A mRNA相關(guān)性分析

MEF 2A是作用于鈣離子信號(hào)通路的重要轉(zhuǎn)錄因子，通過激活內(nèi)皮細(xì)胞活性維持血管內(nèi)皮的完整性和通透性[15]。既往研究證實(shí)，MEF 2A 蛋白的表達(dá)可減少細(xì)胞的增殖和毛細(xì)血管的形成，并且通過激活下游轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控血流介導(dǎo)的內(nèi)皮完整性。本項(xiàng)研究通過采用RNA干擾技術(shù)沉默MACE細(xì)胞MEF 2A基因的表達(dá)，且與ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比，探討其作用于AS可能的機(jī)制。ApoE-/-小鼠在喂養(yǎng)普通飼料時(shí)即可自發(fā)形成動(dòng)脈粥樣硬化，是實(shí)驗(yàn)室研究AS發(fā)病機(jī)制最典型的動(dòng)物模型。結(jié)果顯示，MEF 2A基因沉默可明顯上調(diào)ICAM-1、VCMA-1和PAI-1的表達(dá)，與ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCMA-1和PAI-1的表達(dá)水平基本一致，高于MACE細(xì)胞對(duì)照組的表達(dá)，P＜0.05。提示MEF 2A在AS中低表達(dá)屬于疾病發(fā)生的早期事件，在AS發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用。與國(guó)外研究結(jié)果一致。綜上所述，MEF 2A作為一類新發(fā)現(xiàn)的維護(hù)血管內(nèi)皮穩(wěn)定性的重要生物活性物質(zhì)，與AS的形成密切相關(guān)，其可能通過負(fù)性調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCMA-1和PAI-1等黏附因子的表達(dá)，參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程，其具體機(jī)制需進(jìn)一步研究。