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    承德牛肝菌多糖對(duì)2型糖尿病大鼠胰腺的影響

    2018-06-05 04:09:06肖艷紅鄒怡鴿劉歡歡周曉慧
    中國(guó)老年學(xué)雜志 2018年10期
    關(guān)鍵詞:牛肝菌承德胰島

    肖艷紅 陳 龍 鄒怡鴿 劉歡歡 劉 楠 周曉慧

    (承德醫(yī)學(xué)院,河北 承德 067000)

    隨著生態(tài)環(huán)境以及人們生活方式的改變,2型糖尿病(T2DM)已成為老年人最常見的慢性疾病之一〔1〕。作為京津冀重要的食用菌輸出地,河北承德以其獨(dú)特的天然環(huán)境和地理優(yōu)勢(shì)孕育了諸多野生食藥用真菌,牛肝菌即為其一?,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)該菌所含生物堿可以治療腰腿疼痛、手足麻木、四肢抽搐與婦女白帶異常等癥狀〔2,3〕。研究表明牛肝菌生理活性多種多樣,如提高免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老等〔4~8〕。近年報(bào)道植物多糖的降血糖作用取得了一定的進(jìn)展〔9~12〕,但關(guān)于牛肝菌多糖對(duì)T2DM的影響未見報(bào)道。本研究采用高脂高糖飼喂結(jié)合鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射法成功構(gòu)建T2DM大鼠模型〔13〕,牛肝菌多糖灌胃干預(yù)后,對(duì)其降糖作用及對(duì)胰腺組織的影響進(jìn)行研究。

    1 材料與方法

    1.1動(dòng)物 健康清潔級(jí)Wistar大鼠40只,雄性,體重180~200 g,12周齡,由北京華阜康科技股份有限公司提供。動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(京)2009-0008。飼養(yǎng)于承德醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,自由攝食水,室溫20℃~22℃,自然采光,通風(fēng)良好。大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料及高脂高糖飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供,其中高脂高糖飼料的配方為:豬油10%、蛋黃粉8%、膽固醇1.5%、蔗糖20%、膽酸鈉0.1%、標(biāo)準(zhǔn)飼料60.4%。

    1.2試藥與儀器 牛肝菌由承德潤(rùn)隆食品有限公司提供,產(chǎn)于承德市平泉縣山區(qū);多糖由承德醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室制備,粉末狀4℃冰箱儲(chǔ)存;STZ(美國(guó)Sigma公司,100 mg/瓶,批號(hào)031M1287V)用時(shí)溶解于0.1 mol/L(pH=4.3)檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液中,現(xiàn)用現(xiàn)配;鹽酸二甲雙胍(中美上海施貴寶制藥有限公司,0.5 g/片,批號(hào)1311123);血糖儀及配套試紙(三諾生物傳感股份有限公司);蠟塊包埋機(jī)、Olympus顯微鏡和蠟塊切割機(jī)(德國(guó)Leica公司)。

    1.3方法

    1.3.1動(dòng)物造模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后給予高脂高糖飼料,為期3 w。后禁食12 h,一次性腹腔注射35 mg/kg STZ,72 h后檢測(cè)空腹血糖(FPG)含量。以FPG≥16.7 mmol/L為成功T2DM模型。

    1.3.2動(dòng)物分組及給藥 取40只大鼠,隨機(jī)分為正常組、模型組、牛肝菌多糖低劑量組、牛肝菌多糖高劑量組和二甲雙胍正常組,每組8只。標(biāo)準(zhǔn)飼料正常飼養(yǎng)1 w后,除正常組外其他造模;正常組繼續(xù)給予標(biāo)準(zhǔn)飼料后注射同等劑量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。72 h后經(jīng)內(nèi)眥采血,測(cè)FPG≥16.7 mmol/L為造模成功。各組分籠飼養(yǎng),正常組、模型組給予生理鹽水灌胃,牛肝菌多糖低、高劑量組給予牛肝菌多糖(0.2 g/kg、0.4 g/kg),二甲雙胍組給予二甲雙胍(0.2 g/kg),1次/d,連續(xù)給藥3 w。

    1.3.3指標(biāo)檢測(cè) 給藥前及末次給藥后2次進(jìn)行各組大鼠內(nèi)眥采血,血糖儀檢測(cè)血清葡萄糖(GLU)的含量;送承德市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)胰島素(INS)的含量。

    1.3.4制作胰腺組織HE染色切片 分別取各組大鼠胰腺固定于10%甲醛溶液固定保存。過(guò)夜后經(jīng)脫水,透明,浸蠟,包埋,切片,展片,烘片,脫蠟,染色,封片后光鏡下觀察胰腺組織的形態(tài)變化。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析及q檢驗(yàn)。

    2 結(jié) 果

    2.1牛肝菌多糖對(duì)大鼠GLU的影響 給藥前各造模組GLU均顯著高于正常組(P<0.01),且均≥16.7 mmol/L,說(shuō)明造模成功。與給藥前對(duì)比,給藥3 w后牛肝菌多糖低、高劑量組與二甲雙胍組GLU水平均明顯下降(P<0.01)。給藥3 w后,模型組GLU水平仍顯著高于正常組(P<0.01);各藥物干預(yù)組GLU水平顯著低于模型組(P<0.01);其中,牛肝菌多糖高劑量組與二甲雙胍組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    2.2牛肝菌多糖對(duì)大鼠INS水平的影響 給藥前各組INS水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),給藥后模型組INS水平與正常組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),牛肝菌多糖低、高劑量組及二甲雙胍組INS水平均較給藥前有所提高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且與模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

    表1 牛肝菌多糖對(duì)大鼠GLU水平的影響

    與正常組比較:1)P<0.01;與本組給藥前比較:2)P<0.01 ;與模型組比較:3)P<0.01

    表2 牛肝菌多糖對(duì)大鼠INS水平影響

    2.3牛肝菌多糖對(duì)大鼠胰腺組織形態(tài)的影響 正常組大鼠胰島組織中胰島數(shù)量很多,結(jié)構(gòu)完整,輪廓清晰,外形飽滿規(guī)則;模型組大鼠胰島結(jié)構(gòu)受破壞,胰島細(xì)胞明顯減少,胰島組織明顯萎縮,形態(tài)不規(guī)則,部分胰島細(xì)胞呈現(xiàn)出變性、核固縮現(xiàn)象。牛肝菌多糖低、高劑量組與二甲雙胍組胰島細(xì)胞較多,且結(jié)構(gòu)完整,形態(tài)規(guī)則,排列整齊。尤其牛肝菌多糖高劑量組與二甲雙胍組胰島組織形態(tài)基本恢復(fù)正常;牛肝菌多糖低劑量組部分恢復(fù),表明牛肝菌多糖能夠有效保護(hù)T2DM的胰島組織免受損傷,且有劑量依賴性。見圖1。

    圖1 各組胰腺組織形態(tài)學(xué)觀察(HE,×400)

    3 討 論

    T2DM的主要發(fā)病機(jī)制為INS分泌不足或INS抵抗。部分患者并非INS產(chǎn)生不足,而是由于INS的作用效果減弱所致〔14,15〕。正常人體內(nèi)INS通過(guò)受體向下游傳遞信號(hào),促進(jìn)GLU的利用并抑制其合成,從而降低GLU的含量。T2DM患者基于INS抵抗的存在,INS不能發(fā)揮正常作用,從而使GLU水平一直保持在較高狀態(tài)。本研究顯示牛肝菌多糖干預(yù)后可以明顯降低T2DM大鼠的GLU水平,高劑量組與二甲雙胍組藥效相當(dāng),T2DM基本病理特點(diǎn)為INS絕對(duì)和相對(duì)不足或外周組織對(duì)INS的敏感性下降。本文結(jié)果說(shuō)明,胰島細(xì)胞分泌INS正常,推測(cè)發(fā)生INS抵抗,即外周組織對(duì)INS敏感性降低。胰腺組織HE染色結(jié)果表明,牛肝菌多糖能有效保護(hù)胰島,減輕損傷,進(jìn)而維持胰腺組織的完整結(jié)構(gòu),有利于INS受體及其下游分子發(fā)揮作用,緩解INS抵抗帶來(lái)的病理特征。

    4 參考文獻(xiàn)

    1Haffner SM,D′Agostino R,Mykkanen L.Insulin sensitivity in subjects with type-2 diabetes 〔J〕.Diabetes Care,1999;22(4):562-8.

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    3周玲仙,殷建忠.云南野生食用牛肝菌營(yíng)養(yǎng)成分分析與評(píng)價(jià)〔J〕.食用菌學(xué)報(bào),2008;4(1):61-2.

    4王 濤,李麗娟,申元英.牛肝菌對(duì)小鼠免疫功能影響的試驗(yàn)研究〔J〕.大理學(xué)院學(xué)報(bào),2012;11(6):20-2.

    5李 娜.泰山美味牛肝菌多糖提取純化及功能研究〔J〕.中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2010;45(3):73-6.

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    8崔福順,金成學(xué),崔承弼.長(zhǎng)白山美味牛肝菌提取物清除自由基活性的研究〔J〕.食品工業(yè),2013;34(5):133-5.

    9楊鐵琦,李軍鴿,桂海瑩,等.玉竹多糖對(duì)糖尿病老年大鼠體重及血糖、血脂水平的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2015;35(18):5056-7.

    10李曉冰,裴蘭英,陳玉龍,等.山藥多糖對(duì)鏈脲菌素糖尿病大鼠糖脂代謝及氧化應(yīng)激的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2014;34(2):420-2.

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    12王源學(xué),管恩爽,張立明.二精方多糖提取物對(duì)2型糖尿病小鼠血糖、血脂的影響〔J〕.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2015;35(5):405-9.

    13肖艷紅,谷佳琦,楊曄娟,等.高脂高糖飼料聯(lián)合STZ誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠模型STZ最佳劑量探討〔J〕.承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015;32(5):376-8.

    14Davis KL,Wei W,Meyers JL,etal.Use of basal insulin and the associated clinical outcomes among elderly nursing home residents with type 2 diabetes mellitus:a retrospective chart review study 〔J〕.Clin Interventi Aging,2014;9:1815-22.

    15張 霞.2型糖尿病的臨床發(fā)病機(jī)制分析〔J〕.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013;34(18):2673-4.

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