人工培植竹蓀與野生竹蓀抗氧化活性比較研究

王霞，吳丹，袁旭寒

摘要 [目的]采用傳統(tǒng)煎煮方法對人工培植竹蓀與野生竹蓀的水溶性成分進(jìn)行提取，并研究其抗氧化活性，以及兩者抗氧化活性的差異，為人工培植竹蓀品質(zhì)評價提供一定的參考。[方法]采用維生素C為對照品，利用DPPH自由基、·OH法測定竹蓀傳統(tǒng)水煎物的抗氧化活性，以及總還原能力。[結(jié)果]野生竹蓀水煎物和人工培植竹蓀水煎物均有一定的抗氧化活性，但均比維生素C弱，且研究產(chǎn)地的人工培植竹蓀與野生竹蓀的抗氧化能力沒有顯著性差異。[結(jié)論]僅從抗氧化能力考慮，人工培植竹蓀與野生竹蓀水煎煮提取物沒有顯著性差異，可考慮用人工培植竹蓀替換野生竹蓀。

關(guān)鍵詞 人工培植竹蓀；野生竹蓀；傳統(tǒng)水煎物；抗氧化活性

中圖分類號 S646.8 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）06-0005-03

Study on Antioxidant Activity of Wild and Cultivated Dictyophora indusiata

WANG Xia， WU Dan，YUAN Xuhan （Guizhou City Vocational College， Guiyang， Guizhou 550023）

Abstract [Objective] The research aimed to extract the water soluble components in cultivated and wild Dictyophora indusiata through decocting extraction，and analyze the antioxidant activity as well as its difference because of the different cultivating ways.This provides a referent standard for the artificial cultivated Dictyophora indusiata.[Method]Taking vitamin C as the reference substance，this study applied DPPH and ·OH to examine the antioxidant activity by traditional decocting，and determined the total reduction capacity.[Result]Both wild and cultivated Dictyophora indusiata had certain antioxidant activity， but both were weaker than Vitamin C， and the antioxidant capacity of wild and cultivated Dictyophora indusiata were not significantly different.[Conclusion]There is no significant difference between the cultivated and wild Dictyophora indusiata if only considering the antioxidant activity extracted by tradintional decocting way.The cultivated Dictyophora indusiata can be a replace of the wild Dictyophora indusiata.

Key words Artificial cultivation Dictyophora indusiata；Wild Dictyophora indusiata；Traditional decocting；Antioxidant activity

作者簡介 王霞（1976—），女，貴州織金人，工程師，碩士，從事中藥與中成藥研究。

收稿日期 2017-11-22 竹蓀（Dictyophora indusiata）別名竹笙、竹參，為鬼筆科屬真菌，是寄生在枯竹根部的一種隱花菌類，形狀略似網(wǎng)狀干白蛇皮，它有深綠色的菌帽，雪白色圓柱狀的菌柄，粉紅色的蛋形菌托，在菌柄尖端有一圍傘狀清潔白色的網(wǎng)裙從菌蓋向下撒開，被人們稱為“雪裙仙子”“山珍之花”“真菌之花”“菌中皇后”，是一種名貴的食用菌，具有滋養(yǎng)強(qiáng)壯、益氣補(bǔ)腦、寧神健體、美容養(yǎng)顏等效果，自古就被列為“草八珍”之一，產(chǎn)于福建、四川、云南、貴州等少數(shù)山區(qū)的竹林中。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，竹蓀中含有能抑制腫瘤的成分[1]；也有報道指出，竹蓀中除富含蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素，還含有豐富的多糖，堪稱難得的營養(yǎng)佳品[2]。隨著現(xiàn)代人們生活水平的不斷提高，保健意識與日俱增，如何健康生活、抗拒疾病、抵抗衰老等成為人們追求的方向，食品保健提上日程，不少研究者把目光轉(zhuǎn)向食藥領(lǐng)域。這十幾年來，隨著人們的需求增加，野生竹蓀的數(shù)量大幅度減少，已經(jīng)無法滿足于市場供求。對此，人們開始利用科技手段，進(jìn)行了大量的人工培植，但產(chǎn)品的品質(zhì)研究卻幾乎為空缺。

目前竹蓀的研究多集中于對其抗菌作用的評價[3-4]以及多糖抗氧化作用的評價方面[5]，而對于傳統(tǒng)水煎煮成分抗氧化作用研究的報道卻甚少。但是人們食用竹蓀的方法卻多以傳統(tǒng)水煎煮方式進(jìn)行烹飪，故筆者采用傳統(tǒng)水煎煮提取成分為研究對象，對竹蓀抗氧化活性進(jìn)行研究，并對比研究人工培植竹蓀與野生竹蓀傳統(tǒng)水煎提取物抗氧化性方面的差異，為人工培植竹蓀品質(zhì)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥。維生素C（貴州西冠科學(xué)器材有限公司，批號20170115001）。人工培植竹蓀與野生竹蓀均購于貴州省織金本地農(nóng)貿(mào)市場，經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)實驗室王小麗教授鑒定，為鬼筆科竹蓀屬植物長裙竹蓀（Dictyophora indusiata）。

1.1.2 試劑。DPPH（三馬孫生物科技有限公司，批號20170011001）；氨基丁三醇、乙醇、雙氧水（30%）、鹽酸、硫酸亞鐵、鐵氰化鈉、三氯化鐵、三氯乙酸、鄰二氮菲、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉（AR，貴州中興試劑有限公司），試驗用水為蒸餾水。

1.1.3 主要儀器。Agilent Cary300（北京貿(mào)易科學(xué)儀器有限公司）；梅特勒MS205DU十萬分之一電子分析天平（貴州安科科技有限公司）；800型高速離心機(jī)（貴州西冠科學(xué)器材有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 維生素C對照溶液的制備。稱取維生素C對照品0.300 0 g，于100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解，并定容至刻度，搖勻即得到3 g/L的對照溶液，避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 竹蓀水煎提取物的制備。分別將人工培植竹蓀和野生竹蓀烘干粉碎過20目篩，各精確稱取3.000 0 g竹蓀粗粉末于500 mL燒杯中，加入30倍蒸餾水浸泡10 min后，置于可調(diào)溫電爐上煎煮1 h（待水沸騰后調(diào)節(jié)電爐使其保持微沸狀態(tài)），濾過，濾液濃縮干燥后，用蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中定容至刻度，搖勻即得含竹蓀3 g/L的供試品溶液，置于4 ℃冰箱備用。

1.2.3 DPPH的制備。準(zhǔn)確稱取DPPH試劑10 mg，用無水乙醇溶解，并定量轉(zhuǎn)入10 mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，取1 mL至100 mL容量瓶中，搖勻即得濃度為0.025 mmol/L 的DPPH貯備液，置于4 ℃冰箱冷藏備用。

1.2.4 測定波長選擇。分別將DPPH儲備液、樣品溶液進(jìn)行全波掃描，圖譜顯示DPPH在517 nm處有最大吸收，而樣品在此波長處無吸收，故將517 nm作為檢測波長。

1.2.5 DPPH自由基清除試驗。按照表1的試驗方法進(jìn)行加樣，加入不同體積（0.3、0.6、1.0、1.4、1.8、2.1、2.4 mL）的人工培植竹蓀水煎提取液（Sample 1），于室溫下避光反應(yīng)30 min，測定517 nm下的吸光度（A）。另取野生竹蓀水煎提取液（Sample 2），同法處理檢測，計算清除率，以同濃度的維生素C同法試驗為參照。

記錄測定結(jié)果，按以下公式計算DPPH清除率：

清除率=（A3-A1）-（A4-A2）A3-A1×100%

式中，A1為空白組吸光度，A2為樣參組吸光度，A3為模型組吸光度，A4為樣品組吸光度。

1.2.6 ·OH的清除試驗。根據(jù)羥基自由基形成的基本理論[5]，采用Fenton反應(yīng)，其機(jī)理為：

Fe2++H2O2→Fe3++·OH+OH-

Fe2+·OH→Fe3++OH-

以上反應(yīng)體系中產(chǎn)生了·OH，·OH可使體系中的絡(luò)合物Fe2+-鄰二氮菲中Fe2+被氧化，形成高價態(tài)的Fe3+-鄰二氮菲，致使體系的顏色變淺，進(jìn)而導(dǎo)致在536 nm處的最大吸收峰消失。如果在加入H2O2之前，就加入羥基自由基清除劑，則Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥基自由基被清除或部分清除，氧化過程將會受到限制，536 nm波長的吸收強(qiáng)度會發(fā)生相應(yīng)的變化，故該試驗可通過測定536 nm波長處的吸光度檢查受試樣品的抗氧化能力[6]。按照表2所示加入試驗，并分別加入不同體積（0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 mL）的樣品液1（Sample 1）、樣品液2（Sample 2），將各反應(yīng)管搖勻后，置于恒溫水浴中，于37 ℃下保溫50 min，取樣品按照《中國藥典》一部附錄紫外分光光度法，在536 nm波長處測定吸光度A，其中對照1為未損傷組，對照2 為損傷組，試驗以維生素C同法試驗數(shù)據(jù)為參照。

按下式計算羥基自由基清除率，并比較Sample 1、Sample 2對·OH的清除率。

清除率=（A4-A3）-（A2-A1）A0-A1×100%

式中，A0為對照1的吸光度，A1為空白吸光度，A2為對照2吸光度，A3為樣參組吸光度，A4為樣品組吸光度。

1.2.7 還原能力的測定及比較。采用普魯士藍(lán)法[7]，分別取不同體積（0.3、0.6、1.0、1.4、1.8、2.1、2.4 mL）的Sample 1和Sample 2于離心管中，加入2.5 mL pH 6.6的磷酸鹽緩沖溶液、2.5 mL 1.0%的鐵氫化鉀溶液，混勻后于45 ℃水浴保溫30 min，加入2.5 mL 10%的三氯化乙酸溶液，振搖混勻后，于3 500 r/min離心5 min，取上清液5 mL，加入5 mL蒸餾水和1 mL 0.1%的三氯化鐵溶液，搖勻后反應(yīng)15 min，采用紫外-可見分光光度法，在700 nm波長處測定吸光度，并以相同濃度的維生素C水溶液作為對照，平衡測定3次計算結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工培育竹蓀與野生竹蓀水煎煮物對DPPH自由基的清除作用 根據(jù)“1.2.5”試驗測得的各設(shè)計組的吸光度，計算出Sample 1、Sample 2及維生素C對DPPH自由基 的清除率，結(jié)果見圖1。由圖1可知，在該試驗選擇的體積范圍內(nèi)，所選產(chǎn)地野生竹蓀和人工培植竹蓀的傳統(tǒng)水煎煮提取物對DPPH自由基均具有一定程度的清除作用，并且野生竹蓀和人工培植竹蓀傳統(tǒng)水煎煮提取物在抗氧化活性方面沒有表現(xiàn)出顯著性差異，但兩者對DPPH自由基的清除能力均不及相同條件下等濃度的維生素C。

2.2 人工培育竹蓀與野生竹蓀水煎煮物對·OH的清除能力 根據(jù)“1.2.6”試驗測定的各設(shè)計組的吸光度，計算出Sample 1、Sample 2及維生素C對·OH的清除率，結(jié)果見圖2。由圖2可知，在該試驗選擇的體積范圍內(nèi)，野生竹蓀和人工培植竹蓀的傳統(tǒng)水煎煮提取物對·OH均具有一定程度的清除作用，并且野生竹蓀和人工培植竹蓀傳統(tǒng)水煎煮提取物在抗氧化活性方面未表現(xiàn)出顯著性的差異，但是與同條件下等濃度的維生素C抗氧化活性相比較，兩者在抗氧化活性方面不及維生素C。單就對·OH及DPPH自由基的清除率而言，兩者對DPPH自由基的清除作用明顯強(qiáng)與對·OH的清除作用。

2.3 人工培植竹蓀與野生竹蓀水煎煮提取物總還原能力評價 根據(jù)“1.2.7”的方法進(jìn)行試驗，以維生素C為對照，吸光度為評價指標(biāo)，對野生竹蓀和人工培植竹蓀的總還原能力進(jìn)行評價，測定結(jié)果見圖3。由圖3可知，人工培植竹蓀和野生

竹蓀在總還原能力方面，雖然仍然不及同濃度的維生素C，但仍表現(xiàn)出比較強(qiáng)的還原能力，并且兩者沒有表現(xiàn)出顯著性的差異，抗氧化能力相當(dāng)。

3 結(jié)論與討論

文獻(xiàn)報道[8]，竹蓀水提物在體外具有抗氧化活性。該試驗采用傳統(tǒng)水煎煮法對人工培植竹蓀和野生竹蓀進(jìn)行提取，就提取物進(jìn)行抗氧化活性研究，通過對DPPH自由基及·OH的清除率比較，評價人工培植竹蓀和野生竹蓀傳統(tǒng)水煎物的抗氧化活性；同時，還對兩者的總還原能力進(jìn)行了測定并評價，并將各項測定指標(biāo)與相同濃度維生素C進(jìn)行比較。結(jié)果表明，所選擇產(chǎn)地的人工培植竹蓀和野生竹蓀傳統(tǒng)水煎提取物在一定濃度范圍內(nèi)對DPPH自由基具有一定程度的清除能力，但不及相同濃度的維生素C；對·OH的清除有一定效果，但相比對DPPH自由基的清除較弱；人工培植竹蓀與野生竹蓀水煎提取物的總還原能力雖不及相同濃度的維生素C，但仍表現(xiàn)出很強(qiáng)的總還原能力，不失為藥食一體的優(yōu)良食材之一。

竹蓀作為一種高營養(yǎng)的真菌類食材，有著豐富的營養(yǎng)價值，也是現(xiàn)代人們在追尋的藥食一體食材之一。按照傳統(tǒng)烹飪方法——水煎煮法提取，兩者提取物具有一定程度的抗氧化活性，并且無顯著性差異。因此可有以下推斷：①經(jīng)常食用竹蓀可起到抗氧化、抗衰老、養(yǎng)顏等作用。②由于該試驗所選擇產(chǎn)地的人工培植竹蓀與野生竹蓀在抗氧化活性方面沒有顯著性的差異，針對目前野生資源嚴(yán)重不足，而人們的需要又與日俱增的實際情況，可考慮用人工培植竹蓀代替野生竹蓀，但仍需要進(jìn)一步研究人工培植竹蓀的產(chǎn)地、氣候以及栽培技術(shù)等對品質(zhì)的影響，同時也應(yīng)進(jìn)行多方面的研究，綜合評價人工培植竹蓀替代野生竹蓀的可能性。

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