布魯氏菌病PCR檢測試劑盒的篩選

謝建華　周莉　汪子淳

摘要：為了及時(shí)、準(zhǔn)確地診斷布魯氏菌病，避免誤診和從業(yè)人員感染而造成重大經(jīng)濟(jì)損失，對3個(gè)不同廠家（分別以A、B、C代替）生產(chǎn)的布魯氏菌熒光PCR檢測試劑盒和1個(gè)布魯氏菌PCR檢測試劑盒進(jìn)行了試驗(yàn)對比。從試劑盒的簡便性、反應(yīng)時(shí)間、靈敏性、價(jià)格等方面進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果B公司的試劑盒相對優(yōu)于其他幾個(gè)公司的試劑盒。

關(guān)鍵詞：布魯氏菌??；PCR檢測；試劑盒；篩選

中圖分類號：S855.9+9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2018）04-0007-02

布魯氏菌是一種胞內(nèi)寄生的病原菌，對人和哺乳動物具有高度感染性和致病性，我國將該病列為二類動物疫病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界每年因布魯氏菌病（簡稱布?。┰斐傻慕?jīng)濟(jì)損失近30億美元，對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展構(gòu)成重大威脅[1，2]。目前，布魯氏菌的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法是布魯氏菌的分離鑒定，對條件要求較高，容易造成人員感染和環(huán)境污染等影響，使得難以推廣。而布魯氏菌PCR檢測法，可以事先對樣品進(jìn)行滅活處理，從而降低布魯氏菌感染和擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。筆者通過對3個(gè)廠家布魯氏菌熒光PCR檢測試劑盒和1個(gè)布魯氏菌普通PCR試劑盒進(jìn)行試驗(yàn)，旨在為布病診斷篩選出最佳的檢測試劑盒。

1 材料與方法

1.1 材料

布魯氏菌疫苗株：S2株金宇保靈、M5株新疆天康、A19株中牧實(shí)業(yè)，布魯氏菌熒光PCR試劑盒（A、B和C廠家），布魯氏菌PCR試劑盒（D廠家），核酸提取試劑盒（武漢科前）。

1.2 方法

參照核酸提取試劑盒說明書提取疫苗株S2、M5、A19的核酸DNA并做10-3到10-7稀釋，按照布魯氏菌熒光PCR試劑盒和普通PCR試劑盒說明書內(nèi)容進(jìn)行檢測判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 熒光PCR檢測結(jié)果

布魯氏菌熒光PCR檢測結(jié)果見表1。由表1可知，B試劑盒在3個(gè)疫苗株的10-6倍稀釋時(shí)出現(xiàn)陰性。

2.2 普通PCR檢測結(jié)果

如圖1、圖2所示，株S2和M5株經(jīng)10倍稀釋后到10-6梯度均擴(kuò)增出223 bp目的條帶； A19株到10-5梯度擴(kuò)增出目的條帶（圖3）。

2.3 評分和靈敏性檢測

2.3.1 簡便性 簡便性總共4分，陰陽性對照不用提取核酸的得2分，不需要配制反應(yīng)體系的得2分，若配制時(shí)，每個(gè)體系有2種共用試劑得1分，有2種以上共用試劑得0分。

2.3.2 反應(yīng)時(shí)間 反應(yīng)時(shí)間總共3分，不要電泳的得2分，PCR反應(yīng)時(shí)間在1.5～2.0 h得1分，反應(yīng)時(shí)間在2 h以上不得分。

2.3.3 靈敏性 靈敏性總分3分，熒光PCR根據(jù)CT值、指數(shù)增長趨勢和曲線高低進(jìn)行評比；普通PCR根據(jù)模板稀釋倍數(shù)來評比。

2.3.4 價(jià)格 價(jià)格總分2分，試劑盒價(jià)格在1 500～2 000元得2分，2 000～2 500元得1分，2 500元以上不得分。

經(jīng)過對4家公司試劑盒的比較，表明B公司試劑盒相對優(yōu)于其他幾個(gè)公司的試劑盒，因此，B公司的試劑盒是首選，詳見表2。

3 小結(jié)與討論

布魯氏菌可感染多種家畜和野生動物，主要通過動物的消化道、皮膚、黏膜、結(jié)膜等途徑傳播[3，4]。動物感染布魯氏菌后不僅影響動物繁殖能力和生產(chǎn)性能，而且還會影響畜產(chǎn)品的質(zhì)量安全。魏巍等[5]報(bào)道，全國奶牛布病陽性率由2000年的0.09%上升到2010年的0.84%。有關(guān)資料表明，綿羊患布魯氏菌病后流產(chǎn)率為57.7%，?；疾剪斒暇『罅鳟a(chǎn)率為31.2%，畜間布魯氏菌病嚴(yán)重流行時(shí)期，我國每年因流產(chǎn)損失牛犢達(dá)5萬～6萬頭，因空懷等原因少生幼畜105萬～140萬頭[4]。疫情范圍逐年擴(kuò)大，人間布病與動物布病呈正相關(guān)性[5]。尤其是從業(yè)人員，若防護(hù)措施不當(dāng)極易導(dǎo)致布病感染[6，7]。篩選出最佳試劑盒是做好實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測工作的前提，大家可以結(jié)合購買渠道、售后服務(wù)、實(shí)驗(yàn)室條件、試劑成本、操作簡便等方面來選擇考慮所購買的試劑種類。

參考文獻(xiàn)：

[1] 邱宇鶴，王 錦，何淑云.布病的流行、檢測與防治研究進(jìn)展[J].實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志，2015，7（3）：187-188.

[2] 吐爾洪·努爾，谷文喜.布魯菌病研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（7）：82-87.

[3] 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].第4版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

76-81.

[4] 李長友，李 明.動物布病防治指導(dǎo)手冊[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.134-137.

[5] 魏 巍，馬世春.人獸共患病防控系列報(bào)道（三）我國布病流行情況及防控建議[J].中國畜牧業(yè)，2013（12）：38-41.

[6] 周 莉，侯權(quán)書，黃 誠，等.布魯氏菌病的危害與個(gè)人防護(hù)[J].中國動物檢疫，2016，33（6）：52-54.

[7] 謝建華，周 莉，汪子淳，等.羊肉產(chǎn)品中的布魯氏菌污染及其風(fēng)險(xiǎn)傳遞調(diào)查[J].中國動物檢疫，2017，34（5）：31-34.