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    低氧微環(huán)境對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞增殖和侵襲的影響

    2018-04-04 09:18:04,,,,,
    局解手術(shù)學(xué)雜志 2018年3期
    關(guān)鍵詞:常氧細(xì)胞系低氧

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    [1.陸軍軍醫(yī)大學(xué)(第三軍醫(yī)大學(xué))第一附屬醫(yī)院老年科,重慶 400038;2.陸軍軍醫(yī)大學(xué)(第三軍醫(yī)大學(xué))第一附屬醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科,重慶 400038]

    肺癌是最常見的惡性腫瘤,也是我國高發(fā)的惡性腫瘤。在2017年出版的世界衛(wèi)生組織公布的《全球癌癥報(bào)告》中,全球范圍內(nèi)的肺癌發(fā)病率和病死率迅速增長(zhǎng),位居惡性腫瘤的首位[1]。在所有類型肺癌中非小細(xì)胞型肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)約占80%,其5年生存率僅為13%[2-3]。盡管在過去幾十年間隨著我國醫(yī)藥衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展,新輔助化療和個(gè)體化綜合治療的推廣應(yīng)用,肺癌的早期預(yù)防和治療已經(jīng)取得明顯療效,但是非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后仍然很差,仍然為最常見的和病死率最高的癌癥[4-5]。NSCLC主要致死原因之一是殘余肺癌腫瘤細(xì)胞的異常增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,因此深入研究肺癌的異常增殖和遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移的分子作用機(jī)制對(duì)于改善肺癌的臨床治療和患者預(yù)后具有重要的臨床意義。在實(shí)體瘤迅速生長(zhǎng)的過程中,短時(shí)間內(nèi)腫瘤細(xì)胞的快速增殖和腫瘤細(xì)胞周圍血管生長(zhǎng)滯后二者間形成一對(duì)矛盾體,由于無法為腫瘤細(xì)胞提供足夠的營養(yǎng)和氧氣,導(dǎo)致腫瘤局部組織中形成缺血缺氧微環(huán)境[6-8]。低氧微環(huán)境能夠進(jìn)一步對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成以及侵襲轉(zhuǎn)移等產(chǎn)生影響[9-11]。研究表明,Wnt/β-catenin信號(hào)通路與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化以及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12-13]。但有關(guān)Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)缺氧條件下的非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖活性和侵襲轉(zhuǎn)移的作用,目前尚未見報(bào)道。本研究旨在通過研究體外低氧微環(huán)境對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖和侵襲的影響,并探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路在這一過程中的可能作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所;TRIzol RNA提取試劑盒購自美國Invitrogen公司;HIF-1α及β-catenin引物均委托北京天一輝遠(yuǎn)生物科技公司設(shè)計(jì)合成;多克隆兔抗人HIF-1α及β-catenin購自美國Santa Cruz公司,單克隆兔抗人β-actin購自美國Cell Signaling Technology公司,辣根酶標(biāo)記羊抗兔IgG購自武漢博士德生物科技公司;中分子量Protein marker 購自Thermo Fisher公司;ECL 超敏化學(xué)發(fā)光試劑盒購自武漢碧云天生物科技公司;胎牛血清購自美國GIBCO公司;含酚紅RPMI-1640培養(yǎng)基購自美國HYCLONE公司;細(xì)胞裂解液(RIPA)及BCA蛋白定量試劑盒均購自武漢碧云天生物科技公司;6孔、96孔培養(yǎng)板、25 cm2塑料培養(yǎng)瓶以及24孔Transwell小室(孔徑8 μm)均購自美國Corning Costar公司;侵襲實(shí)驗(yàn)所用基質(zhì)膠(Matrigel)購自美國BD公司;Co170R-230-0200三氣細(xì)胞培養(yǎng)箱(用于模擬缺氧細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境)購自德國Eppendorf公司;倒置相差顯微鏡購自日本Olympus公司;垂直電泳槽、轉(zhuǎn)移電泳槽均購自北京六一電子儀器公司。

    1.2 方法

    1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549在細(xì)胞培養(yǎng)箱(37 ℃、5%CO2、飽和濕度條件)下用含10%小牛血清、100 u/mL青霉素、100 μg/mL慶大霉素、含酚紅RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。用0.25%胰酶消化傳代。細(xì)胞培養(yǎng)至融合70%~80%后,用無血清培養(yǎng)基饑餓過夜,再置入低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,隨后對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。常氧培養(yǎng)條件為37 ℃、5%CO2、20%O2;低氧培養(yǎng)條件為1%O2。

    1.2.2CCK-8測(cè)定不同培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)曲線取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的第3代肺癌A549細(xì)胞系常規(guī)消化后,按1×104/mL的細(xì)胞密度接種于96孔板中,每孔200 μL,并設(shè)空白孔(只加入200 μL培養(yǎng)基),共接種2塊板。分別置于低氧培養(yǎng)箱及常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng),分別于3、6、12、24 h共4個(gè)時(shí)間點(diǎn)取5個(gè)細(xì)胞孔及1個(gè)空白孔行CCK-8檢測(cè),每孔加入20 μL CCK-8試劑,孵育2 h后取出在酶標(biāo)儀450 nm處測(cè)定其吸光值(A),以時(shí)間(h)為橫坐標(biāo),A為縱坐標(biāo)繪制生長(zhǎng)曲線。

    1.2.3RNA提取和Real-time PCR檢測(cè)RT-PCR檢測(cè)Wnt/β-catenin的表達(dá),將已經(jīng)過處理的各組細(xì)胞用冰上預(yù)冷PBS洗滌3次,每孔中加入1 mL Trizol RNA提取液,按照產(chǎn)品說明書操作步驟提取細(xì)胞總RNA,紫外分光光度法測(cè)定A260/A280比值,測(cè)算RNA 濃度,重復(fù)3次。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行PCR 循環(huán)擴(kuò)增。PCR所用引物由上海擎科生物科技公司上海分公司合成,引物序列如下:β-actin上游引物5’-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3’,下游引物5’-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3’;HIF-1α上游引物5’-CGUACUGCACUCCAAAUATT’,下游引物5’-UAUUUGGAGUGCAGUAGCGTT-3’;β-catenin上游引物5’-GCTGCTGTTTTGTTCCGAATGT-3’,下游引物5’-GCCATTGGCTCTGTTCTGAAGA-3’。實(shí)時(shí)熒光定量PCR:反應(yīng)體系20 μL,mixture 10 μL,探針引物1 μL,cDNA 2 μL。反應(yīng)條件均為:95 ℃,3 min 預(yù)變性;94 ℃,30 s;48 ℃,30 s,72 ℃,1 min,擴(kuò)增35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min。PCR 產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳,凝膠圖像掃描系統(tǒng)成像并進(jìn)行灰度掃描,重復(fù)3 次。

    1.2.4Western blot檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549經(jīng)過常氧及缺氧培養(yǎng)之后,將6孔板中的貼壁細(xì)胞用冰上預(yù)冷的PBS洗滌3次后加入RIPA細(xì)胞蛋白裂解液,并使用細(xì)胞刮將細(xì)胞裂解液收集轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP管中,冰上靜置裂解30 min,隨后于12 000 rpm離心10 min,棄去細(xì)胞沉淀,取上清液-20 ℃儲(chǔ)存。采用BCA 法測(cè)定蛋白濃度,加入5×loading buffer 將蛋白混勻后,置于95 ℃金屬水浴鍋中進(jìn)行蛋白變性。配制12%SDS-PAGE,每孔加入30 μg蛋白樣品上樣,80 V電泳積聚蛋白,100 V電壓使蛋白分離并使用濕轉(zhuǎn)法電轉(zhuǎn)至PVDF膜。轉(zhuǎn)膜結(jié)束采用5%脫脂牛奶封閉1 h。用多克隆兔抗人的HIF-1α(1∶800)β-catenin、(1∶1 000)、單克隆小鼠抗人的β-actin(1∶3 000)分別與膜接觸4 ℃孵育過夜后,用TBST在脫色搖床下洗膜3次,每次5 min,在加辣根酶標(biāo)記羊抗小鼠或抗兔IgG,室溫下孵育1 h后,用TBST洗膜3次,每次5 min,加入ECL化學(xué)發(fā)光顯示劑在室溫下反應(yīng)1 min后,進(jìn)行曝光。

    1.2.5Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力實(shí)驗(yàn)前所有試劑及器材均于冰上預(yù)冷,將Transwell小室置于6孔板內(nèi),將Transwell小室內(nèi)膜均勻涂抹0.2 μg/μL的Matrigel 膠(matrigel與無血清培養(yǎng)基之比為1∶250 μL,37 ℃孵育20 min,使膠凝固,并放入培養(yǎng)箱中4 h凝固備用。次日將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期肺癌A549細(xì)胞系在無血清DMEM培養(yǎng)液饑餓培養(yǎng)24 h后,使用0.25%EDTA胰蛋白酶消化,接著無血清DMEM培養(yǎng)基懸浮成單細(xì)胞懸液,將細(xì)胞密度調(diào)整至至4×105/mL,臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力95%以上。每個(gè)侵襲小室上室中加入無血清細(xì)胞懸液200 μL,在侵襲小室的下室加入含10%小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液DMEM,每孔600 μL,分別置于常氧和低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后取出小室,用PBS分3次洗滌去除培養(yǎng)基。使用濕棉簽輕柔擦去小室上層未穿過細(xì)胞后置于4%多聚甲醛中固定20 min。隨后將小室置于室溫下晾干并進(jìn)一步使用結(jié)晶紫染色20 min。染色完后在倒置顯微鏡下觀察穿過膜的細(xì)胞數(shù),計(jì)數(shù)中間及四周5個(gè)高倍(400倍)鏡下視野細(xì)胞數(shù),計(jì)算平均數(shù)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 低氧對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖能力的影響

    非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549經(jīng)過常氧和低氧培養(yǎng)24 h后采用CCK8法進(jìn)行細(xì)胞增殖能力檢測(cè)。結(jié)果顯示:與常氧組相比,在低氧環(huán)境下培養(yǎng)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的增殖能力顯著增強(qiáng),而且隨著低氧培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)增殖效應(yīng)越顯著,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖1。

    圖1 低氧促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系的增殖

    2.2 低氧對(duì)肺癌A549細(xì)胞侵襲能力的影響

    非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549經(jīng)過常氧和低氧培養(yǎng)24 h后采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞侵襲能力進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,與常氧對(duì)照組相比,在低氧環(huán)境下培養(yǎng)24 h后的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的侵襲能力顯著增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖2。

    2.3 低氧對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響

    在常氧和低氧環(huán)境下培養(yǎng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549 24 h后,分別采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)β-catenin的mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示,與常氧組相比,低氧組A549的β-catenin mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明低氧能夠激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路(圖3)。

    2.4 靶向沉默β-catenin對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響

    轉(zhuǎn)染β-catenin特異性siRNA及β-catenin-NC于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549 48 h后,分別采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)β-catenin mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示與β-catenin NC組和空白對(duì)照組相比,β-catenin siRNA組的β-catenin明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖4。

    2.5 β-catenin siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)低氧介導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖能力

    對(duì)分別進(jìn)行常氧培養(yǎng)和低氧培養(yǎng)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549進(jìn)行細(xì)胞增殖能力檢測(cè)。CCK8結(jié)果顯示,與常氧組相比,在低氧環(huán)境下培養(yǎng)的A549細(xì)胞系隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)其增殖能力顯著增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而轉(zhuǎn)染了β-catenin siRNA的細(xì)胞其增殖能力顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖5。

    2.6 β-catenin siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)低氧介導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲能力的影響

    在Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)低氧處理24 h后,與常氧對(duì)照組相比低氧轉(zhuǎn)染NC處理組中A549細(xì)胞的侵襲能力顯著增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而轉(zhuǎn)染β-catenin siRNA組的細(xì)胞侵襲能力被顯著抑制,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖6。

    a:RT-PCR檢測(cè)HIF-1α水平;b:RT-PCR檢測(cè)β-catenin mRNA水平;c:Westtern blot檢測(cè)HIF-1α和β-catenin蛋白表達(dá)水平;d、e:Westtern blot結(jié)果定量分析*:P<0.01;#:P<0.001

    圖3低氧激活非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的Wnt/β-catenin信號(hào)通路

    a:β-catenin siRNA轉(zhuǎn)染熒光圖(× 200);b:RT-PCR檢測(cè)β-catenin mRNA表達(dá);c:Western blot檢測(cè)β-catenin 蛋白表達(dá);d:Western blot結(jié)果定量分析*:P<0.001;#:P<0.01

    圖4β-cateninsiRNA在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中有效沉默β-catenin

    圖5 β-catenin siRNA抑制低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖

    3 討論

    肺癌是目前危害人類健康最嚴(yán)重的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和病死率位居全球第一,探討其發(fā)生機(jī)制以及尋找有效的治療手段一直是受到廣泛關(guān)注的研究熱點(diǎn)之一[14-15]。在正常機(jī)體中,氧濃度的變化對(duì)組織細(xì)胞的代謝、增殖、分化具有重要的調(diào)節(jié)作用[16]。為了適應(yīng)低氧代謝應(yīng)激條件,腫瘤細(xì)胞能夠通過激活一系列信號(hào)調(diào)控機(jī)制,如促進(jìn)周邊新生血管生成、增強(qiáng)細(xì)胞新陳代謝、遷移等,促進(jìn)了細(xì)胞的異常增殖、轉(zhuǎn)移、耐藥等[17-18]。低氧環(huán)境下這一系列生物學(xué)事件的發(fā)生不僅改變了腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性,引起腫瘤細(xì)胞的基因組不穩(wěn)定性,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化甚至遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移。作為最常見的實(shí)體瘤,肺癌病灶生長(zhǎng)過程中隨著腫瘤細(xì)胞的快速異常增殖,使得局部血供無法進(jìn)一步支持腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng),不可避免地經(jīng)歷局部缺血缺氧微環(huán)境。而在這一過程中適應(yīng)環(huán)境生存下來的腫瘤細(xì)胞的增殖又會(huì)繼續(xù)加劇微環(huán)境的缺氧狀況。在這樣的缺血缺氧條件下,腫瘤細(xì)胞往往會(huì)通過自分泌或旁分泌作用改變自身周圍生存和發(fā)展的環(huán)境,促進(jìn)腫瘤繼續(xù)生長(zhǎng)和發(fā)展。腫瘤細(xì)胞本身的一些特征也會(huì)隨之改變,例如具有更強(qiáng)的局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處侵襲能力,使其更有利于脫離目前的惡劣環(huán)境,轉(zhuǎn)移到新的部位重新定植。

    Wnt/β-catenin 信號(hào)通路廣泛參與生物體內(nèi)細(xì)胞信息調(diào)控,其在細(xì)胞增殖、組織修復(fù)、胚胎發(fā)育及腫瘤(包括肺癌)的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[19]。β-catenin是細(xì)胞內(nèi)的一種多功能蛋白,其作為Wnt信號(hào)通路中的核心調(diào)控蛋白主要參與細(xì)胞之間粘附的調(diào)控。正常情況下,正常成熟的組織細(xì)胞中,胞漿內(nèi)β-catenin與細(xì)胞膜上的E-cadherin相互結(jié)合起到促進(jìn)細(xì)胞間粘附的作用。此時(shí),胞漿內(nèi)游離狀態(tài)的β-catenin濃度維持在較低水平,無法進(jìn)入胞核激活其下游靶基因。當(dāng)細(xì)胞受到各種因素的刺激,使得Wnt信號(hào)通路激活時(shí),Wnt配體與細(xì)胞膜表面的Frizzled/LRP受體結(jié)合從而磷酸化激活下游分子Dsh,使β-catenin從APC/Ax-in/GSK-3β組成的復(fù)合物中解離出來,使其在細(xì)胞內(nèi)不斷蓄積,并隨后進(jìn)入細(xì)胞核與TCF/LEF復(fù)合體結(jié)合,最終激活其下游靶基因的轉(zhuǎn)錄,從而發(fā)揮對(duì)細(xì)胞增殖、調(diào)亡、運(yùn)動(dòng)、分化等一系列生物學(xué)事件的調(diào)控[20-21]。研究表明,β-catenin與多種不同的腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),主要包括肝癌、胃癌以及肺癌等[22-24],這些研究均顯示β-catenin在這些腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)。在肝癌細(xì)胞中,Wnt/β-catenin通過增強(qiáng)低氧誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移,同時(shí)β-catenin表達(dá)水平與肝癌術(shù)后存活時(shí)間呈負(fù)相關(guān)[25-26]。在結(jié)腸癌細(xì)胞中,低氧通過激活Nur77-β-catenin環(huán)路促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲[27]。然而,目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道Wnt/β-catenin信號(hào)通路在低氧微環(huán)境下調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和侵襲能力中的調(diào)控機(jī)制。

    在本實(shí)驗(yàn)中,我們首先驗(yàn)證了體外低氧微環(huán)境對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的增殖與侵襲能力的影響。結(jié)果表明,與常氧對(duì)照組相比,A549細(xì)胞經(jīng)過低氧環(huán)境下培養(yǎng)24 h后,其增殖速率顯著高于常氧對(duì)照組,同時(shí)細(xì)胞侵襲能力的顯著增強(qiáng)。接下來我們進(jìn)一步研究低氧環(huán)境下這一現(xiàn)象的分子機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn),與常氧對(duì)照組相比,低氧環(huán)境下培養(yǎng)24 h后A549中β-catenin信號(hào)通路顯著激活,提示其可能參與低氧環(huán)境下肺癌的異常增殖和侵襲過程。為了明確Wnt/β-catenin信號(hào)通路在其中的作用機(jī)制。我們采用特異性β-catenin siRNA來阻斷其表達(dá),并進(jìn)一步檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖和侵襲的影響。研究發(fā)現(xiàn),在靶向沉默Wnt/β-catenin信號(hào)通路之后,低氧介導(dǎo)的細(xì)胞增殖和侵襲現(xiàn)象被阻斷,表明Wnt/β-catenin信號(hào)通路在這一過程中起著關(guān)鍵作用?;谝陨涎芯?,我們推測(cè)低氧通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路來調(diào)控下游靶基因轉(zhuǎn)錄激活,從而促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的異常增殖和遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移,最終促進(jìn)肺癌的發(fā)生發(fā)展。

    a:Tanswell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力(結(jié)晶紫染色 ×200);b:統(tǒng)計(jì)分析 *:P<0.001

    綜上所述,本文初步證實(shí)在肺癌A549細(xì)胞系中低氧微環(huán)境能夠通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖和遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移,這將有助于進(jìn)一步認(rèn)識(shí)肺癌的發(fā)病機(jī)制。因此,深入研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路在肺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制,通過靶向阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)分子,從而抑制腫瘤細(xì)胞的異常增殖和侵襲轉(zhuǎn)移,這將為肺癌的特異性治療提供新的思路和依據(jù),具有廣泛的臨床意義和良好的應(yīng)用前景。

    [參考文獻(xiàn)]

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