一株雛鵝大腸桿菌的分離鑒定及其藥敏試驗(yàn)

童秋廷

摘要：鵝大腸桿菌病（Goose E.cofi disease，GED）是一種細(xì)菌性急性傳染病，嚴(yán)重危害養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展。本文就以感染鵝大腸桿菌病的某鵝場(chǎng)為實(shí)例，簡(jiǎn)單闡述該疾病的診斷和治療措施。

關(guān)鍵詞：鵝大腸桿菌；鵝業(yè)；診斷；治療

鵝大腸桿菌?。℅oose E.coli disease，GED）是由鵝致病性大腸埃希氏桿菌所引起的一種局部或全身性感染的細(xì)菌性急性傳染病，是當(dāng)前危害養(yǎng)鵝業(yè)的主要疫病之一。鵝致病性大腸埃希氏桿菌可感染各個(gè)階段的鵝，但14日齡以內(nèi)的雛鵝最為易感。臨床上該病可引起急性敗血癥、腹膜炎、纖維性心包炎、腫頭綜合癥及肝周炎等病癥，病死率較高，雛鵝死亡率可高達(dá)90%以上，同時(shí)由于抗生素類藥物的濫用而導(dǎo)致的耐藥菌株的出現(xiàn)進(jìn)一步加大了鵝大腸桿菌病的防治難度，近些年我國(guó)鵝大腸桿菌病逐年上升，部分地區(qū)該病流行形勢(shì)已十分嚴(yán)峻，嚴(yán)重阻礙了我國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)的健康快速發(fā)展。2016年7月-8月間，本地區(qū)某鵝場(chǎng)數(shù)百只雛鵝出現(xiàn)精神沉郁、拉稀及大量快速死亡等臨床癥狀。本試驗(yàn)對(duì)該鵝場(chǎng)送檢的發(fā)病瀕死雛鵝進(jìn)行了病原菌的分離和鑒定，依據(jù)臨床癥狀、剖檢及分離鑒定，結(jié)果表明該分離株與大腸埃希氏桿菌相符，故將該分離株鑒定為鵝大腸埃希氏菌，并根據(jù)該分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果，建議該鵝場(chǎng)選擇高敏藥物開(kāi)展積極治療，用藥后鵝病死率逐漸降低，疫情得到了有效控制。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1病料 病料來(lái)自本地區(qū)某鵝場(chǎng)瀕死發(fā)病雛鵝，剖檢后無(wú)菌采集有典型病變的組織和心包積液等，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2培養(yǎng)基及染色液 麥康凱培養(yǎng)基、馬丁肉湯培養(yǎng)基和普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等；革蘭氏染色液。

1.1.3生化鑒定管及藥敏片 生化微量反應(yīng)管主要包括糖發(fā)酵試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、VP試驗(yàn)、枸櫞酸鹽還原試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)等；16種常規(guī)藥物的藥敏片。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌的分離及鏡檢 無(wú)菌條件下用接種環(huán)取少量病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24h，觀察菌落的生長(zhǎng)情況。挑取紅色單個(gè)菌落接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24h，挑取單菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.2.2生化試驗(yàn) 將分離菌株的純培養(yǎng)物進(jìn)行乳糖、葡萄糖、麥芽糖和甘露醇等糖發(fā)酵試驗(yàn)，37℃恒溫培養(yǎng)24h觀察結(jié)果，同時(shí)將分離菌進(jìn)行靛基質(zhì)試驗(yàn)、VP試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、枸櫞酸鹽還原試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)和MR試驗(yàn)等生化鑒定，分別接種到相應(yīng)的微量發(fā)酵管中，37℃恒溫培養(yǎng)48～72h觀察結(jié)果。

1.2.3藥敏試驗(yàn) 將分離菌株采用藥敏紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選取磷霉素、氟苯尼考、頭孢噻肟、青霉素、慶大霉素、丁胺卡那、紅霉素、先鋒霉素、四環(huán)素、妥布霉素、恩諾沙星、利福平、菌必治、阿米卡星、環(huán)丙沙星和阿莫西林等16種常用抗菌藥物，以期為本次鵝大腸桿菌病的防治提供科學(xué)的用藥參考。無(wú)菌環(huán)境下用接種環(huán)挑取純化好的分離菌，然后重復(fù)來(lái)回劃線于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，接著用無(wú)菌鑷子將各種藥敏紙片等均勻貼于涂好菌的培養(yǎng)基表面。16個(gè)藥敏紙片分別貼于2個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，每個(gè)培養(yǎng)基上有8種藥敏紙片。將平板倒置于37℃溫箱中培養(yǎng)18～24h，測(cè)量抑菌圈直徑并進(jìn)行藥物敏感程度的判定。

2結(jié)果與分析

2.1分離鑒定結(jié)果

麥康凱瓊脂平板上菌落形態(tài)為圓形磚紅色，隆起，邊緣光滑濕潤(rùn)；在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上菌落形態(tài)為呈圓形灰白色，隆起，邊緣光滑整齊；革蘭氏染色鏡檢結(jié)果與大腸桿菌染色特性相符，即該分離菌株也是兩端鈍圓的革蘭氏陰性中等大小的桿菌。

2.2生化鑒定結(jié)果

糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果顯示該分離菌株能夠發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇；靛基質(zhì)試驗(yàn)和MR試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性；硫化氫試驗(yàn)、VP試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)及枸櫞酸鹽還原試驗(yàn)結(jié)果呈陰性。根據(jù)第八版《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，該分離菌株也符合大腸桿菌特性。

2.3藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)結(jié)果顯示該分離菌對(duì)磷霉素、氟苯尼考、丁胺卡那和頭孢噻肟4種抗菌藥物為高度敏感；對(duì)慶大霉素、妥布霉素、菌必治和阿米卡星4種藥物為中度敏感；對(duì)青霉素、紅霉素、先鋒霉素、四環(huán)素、恩諾沙星、利福平、環(huán)丙沙星和阿莫西林為低度敏感或耐藥。

3診斷及治療措施

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)發(fā)病鵝群選用高敏藥物氟苯尼考，然后按照一定比例添入飲水中進(jìn)行治療，并注意補(bǔ)充VC，連用5～7d。同時(shí)建議及時(shí)隔離發(fā)病鵝，對(duì)未發(fā)病鵝群使用大腸桿菌多價(jià)疫苗進(jìn)行緊急接種。加強(qiáng)鵝場(chǎng)環(huán)境及食槽水槽等設(shè)施的消毒工作，每天進(jìn)行徹底消毒1次，連續(xù)5d。加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，保持鵝舍清潔衛(wèi)生和通風(fēng)。該鵝場(chǎng)積極開(kāi)展治療和預(yù)防等措施后，疫情得到了有效控制，病死率明顯下降，無(wú)新發(fā)病例和死亡現(xiàn)象，鵝群精神狀況好轉(zhuǎn)，食欲逐漸恢復(fù)正常。

4小結(jié)

鵝大腸桿菌病是一種常見(jiàn)的細(xì)菌性傳染病，鵝場(chǎng)飼養(yǎng)管理不合理是該病的主要原因之一。目前一些鵝場(chǎng)尤其是種鵝場(chǎng)大腸桿菌病較為嚴(yán)重，使其徹底凈化存在一定難度。根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、病料剖檢和分離菌特性等綜合判斷，該養(yǎng)鵝場(chǎng)雛鵝為鵝大腸桿菌病，首選氟苯尼考進(jìn)行有效治療。此次鵝大腸桿菌疫情的發(fā)生原因，分析可能是該鵝場(chǎng)飼養(yǎng)密度過(guò)大，鵝舍衛(wèi)生不達(dá)標(biāo)，定期消毒工作不到位，使得飼養(yǎng)環(huán)境中帶有致病菌和鵝群長(zhǎng)期帶菌，當(dāng)鵝群在應(yīng)激等可引起動(dòng)物機(jī)體抵抗力降低的不良情況下，進(jìn)而誘發(fā)大腸桿菌病。同時(shí)該鵝場(chǎng)在日常藥物預(yù)防過(guò)程中存在超劑量用藥、頻繁換藥等濫用抗菌藥物的現(xiàn)象，使得該鵝場(chǎng)耐藥性問(wèn)題也比較突出。多價(jià)大腸桿菌疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防接種是預(yù)防鵝大腸桿菌病的主要措施，但在日常飼養(yǎng)過(guò)程中還應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，強(qiáng)化飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生清潔，定期徹底消毒，一旦發(fā)病，切忌盲目用藥，應(yīng)采用合理選藥、聯(lián)合用藥及輪換用藥的用藥模式；最好選用高敏藥物開(kāi)展及時(shí)的治療。endprint