青島地區(qū)雞源大腸桿菌耐藥性檢測

方杰　李昕

摘要 從青島平度、即墨、萊西3個地區(qū)的多家養(yǎng)殖場中分離了雞源大腸桿菌89株，并進(jìn)行了鑒定及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果表明，所調(diào)查地區(qū)雞源大腸桿菌耐藥性較嚴(yán)重，對 恩諾沙星、氨芐西林耐藥最為普遍，其次是氟苯尼考、慶大霉素與環(huán)丙沙星。同時發(fā)現(xiàn)，調(diào)查地區(qū)大腸桿菌耐藥譜廣且多重耐藥性嚴(yán)重。

關(guān)鍵詞 大腸桿菌；雞；耐藥性；山東青島

中圖分類號 S852.61；R378.2+1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）21-0244-01

Abstract 89 strains of chicken-derived Escherichia coli were isolated from several farms in Qingdao（Pingdu，Jimo，Laixi），and identification and drug sensitivty test were carried out.The results showed that the Escherichia coli resistance of chickens in the investigation area was serious，and the resistance to enrofloxacin and ampicillin was the most common，followed by florfenicol，gentamicin and ciprofloxacin. At the same time，it was found that Escherichia coli in the investigation area had wide resistance spectrum，and the multi-drug resistance was serious.

Key words Escherichia coli；chicken；drug resistance；Qingdao Shandong

抗生素的發(fā)現(xiàn)為人類對抗細(xì)菌感染性疾病提供了非常有利的保障，也逐漸成為了治療細(xì)菌相關(guān)疾病的首選藥物。但是，隨著抗生素的大量使用，細(xì)菌對抗生素的耐受能力也在逐漸增強(qiáng)。近年來，據(jù)相關(guān)報(bào)導(dǎo)，部分地區(qū)甚至出現(xiàn)了超強(qiáng)耐藥的“超級細(xì)菌”。因此，對細(xì)菌的耐藥性研究已經(jīng)成了目前最為緊迫的任務(wù)，也是困擾我國畜牧獸醫(yī)業(yè)發(fā)展的重要難題[1]。

大腸桿菌感染是目前集約化雞場常見的臨床疾病之一，在各地區(qū)、各養(yǎng)殖場的發(fā)生概率均較高[2]。同時，大腸桿菌的血清型較多、分布廣泛并且具有很強(qiáng)的地域特征，加之大腸桿菌病具有發(fā)病率高、繼發(fā)性強(qiáng)等特點(diǎn)，已經(jīng)使其成為威脅養(yǎng)雞業(yè)的一種重要疾病[3]。為了調(diào)查山東省青島地區(qū)雞源性大腸桿菌的耐藥性及耐藥特點(diǎn)，本研究在青島萊西、平度、即墨3個地區(qū)針對2015—2016年肉雞糞便中分離的大腸桿菌進(jìn)行了7種臨床常用抗生素的藥敏測試，分析青島市不同地區(qū)雞源性大腸桿菌的耐藥流行病學(xué)，為抗菌藥物的選擇和使用提供依據(jù)和保障。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試劑及器材。培養(yǎng)基（麥康凱瓊脂、MHA瓊脂、MHB肉湯），購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司；乙醇、甘油、PBS等，購自國藥集團(tuán)；氨芐西林可溶性粉、鹽酸環(huán)丙沙星可溶性粉、硫酸慶大霉素可溶性粉、氟苯尼考可溶性粉、硫酸新霉素可溶性粉、鹽酸多黏菌素可溶性粉、鹽酸恩諾沙星可溶性粉，購自青島天元普康生物技術(shù)有限公司。細(xì)菌/藥敏分析儀（XK，四川科儀誠科技有限公司）。

1.1.2 菌株。大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（E.coli ATCC 25922）由本試驗(yàn)保存，采集于青島平度、即墨、萊西不同養(yǎng)殖場的大腸桿菌89株。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)菌的分離鑒定。采用無菌棉拭子于雞直腸中蘸取采樣，帶回實(shí)驗(yàn)室后，接種麥康凱瓊脂平板，于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～20 h，同時觀察菌落的生長情況。挑選白色、勻潤光滑、邊緣整齊的單菌落挑起，然后制備菌液用于藥敏檢測。

1.2.2 藥敏試驗(yàn)。①藥物質(zhì)控：參考CLSI標(biāo)準(zhǔn)藥敏方法（CLSI4th2013）指控范圍，用E.coli ATCC 25922通過微量肉湯稀釋法在96孔板上進(jìn)行質(zhì)控。②藥敏試驗(yàn)采用細(xì)菌/藥敏分析儀，按照操作說明進(jìn)行操作。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的分離鑒定

通過分離鑒定，采自青島萊西、平度、即墨等3個地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)雞場及養(yǎng)殖專業(yè)戶的病料共147份，經(jīng)分離鑒定后得到致病性大腸桿菌菌株89株。

2.2 耐藥性檢測

通過試驗(yàn)檢測雞大腸桿菌對7種常見抗菌藥的抗藥性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所取樣的雞大腸桿菌均對所檢抗菌藥物產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。其中，對恩諾沙星、氨芐西林的耐藥性最高，其次為氟苯尼考、慶大霉素與環(huán)丙沙星。所調(diào)查雞大腸桿菌耐藥性最低的是硫酸新霉素與多黏菌素（表1）。

2.3 多重耐藥性與交叉耐藥性分析

檢測發(fā)現(xiàn)，在3個地區(qū)所檢的89株菌株中，對≥3種抗菌藥物產(chǎn)生抗藥性的有48株，多重抗藥率高達(dá)53.9%（表2）。15.7%的菌株對≥5種抗菌藥有耐藥性，38.2%的菌株對3～4種抗菌藥有耐藥性。其中，屬于喹諾酮類的環(huán)丙沙星耐藥性最為普遍。所檢測菌株對氨基糖苷類的慶大霉素及黏菌素類的多黏菌素敏感性最高。

3 結(jié)論與討論

大腸桿菌感染會導(dǎo)致雞精神不振、采食下降、呼吸困難、消瘦等臨床癥狀，并可引起關(guān)節(jié)炎、氣囊炎、腦炎甚至敗血癥等多種疾病，嚴(yán)重的還可導(dǎo)致雞胚死亡，降低孵化率等[4]。隨著我國養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模化、工廠化、集約化的發(fā)展，抗生素的無限制使用，導(dǎo)致各種混合感染頻發(fā)，同時繼發(fā)感染大腸桿菌的概率也越來越高。大腸桿菌感染已經(jīng)成為了雞細(xì)菌性感染疾病之首[5]。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，青島3個地區(qū)（即墨、平度、萊西）雞源大腸桿菌對環(huán)丙沙星、氟苯尼考的抗藥性較高，細(xì)菌之間的差異較小，多重抗藥性的現(xiàn)象也比較突出。因此，養(yǎng)殖企業(yè)在臨床選擇抗菌藥時最好做藥敏檢測，根據(jù)檢測結(jié)果再合理地根據(jù)自身養(yǎng)殖場特點(diǎn)選擇抗菌藥物。

目前，我國大部分地區(qū)禽源大腸桿菌都存在嚴(yán)重的多重耐藥現(xiàn)象。在本次調(diào)查中，調(diào)查地區(qū)雞大腸桿菌多重耐藥和交叉耐藥的現(xiàn)象比較嚴(yán)重且耐藥譜較廣，多重耐藥率達(dá)到53.9%。多重耐藥性問題嚴(yán)重可能與以下幾個因素有關(guān)：一是抗生素的無限制使用，及選藥、用藥時沒有按照合理的程序規(guī)則[6]；二是目前市場上的獸用藥質(zhì)量良莠不齊，存在人為添加抗生素的現(xiàn)象；三是為了適應(yīng)抗菌藥物的作用，細(xì)菌本身也在不斷地發(fā)生變異。因此，在臨床用藥上應(yīng)合理選擇藥物，不能濫用且長時間低劑量使用抗生素。

總之，不同地區(qū)的雞源大腸桿菌的耐藥性存在較大差異，各地區(qū)都有相應(yīng)的耐藥譜，各地區(qū)甚至各養(yǎng)殖場應(yīng)該根據(jù)自身耐藥譜合理地選擇抗菌藥。在使用時應(yīng)該注意不同抗生素的輪換使用，盡量少用耐藥性高的抗菌藥。同時，注意養(yǎng)殖場衛(wèi)生條件，改善飼養(yǎng)管理模式，盡量減少禽類疾病的發(fā)生。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 李楠.養(yǎng)殖場空氣中細(xì)菌分布及耐藥性研究[D].北京：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所，2011.

[2] 王紅寧.禽呼吸道系統(tǒng)疾病[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[3] 邢艷蘋，王瑜，楊峰，等.動物源性大腸桿菌耐藥性分析[J].吉林畜牧獸醫(yī)，2010，31（11）：7-10.

[4] KAPER J B，NATARO J P，MOBLEY H I.Pathogenic Escherichia coli[J].Nat Rev Microbiol，2004，2（2）：123-140.

[5] 劉遠(yuǎn)飛，曹翠萍，寧海強(qiáng)，等.山東省雞大腸桿菌血清型分布及耐藥性分析[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2008，29（1）：88-90.

[6] 宿志民.泰安地區(qū)雞源大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.endprint