• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    大腸桿菌噬菌體的研究進(jìn)展

    2015-09-10 20:52吳偉勝李玉保王守榮等
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年8期
    關(guān)鍵詞:大腸桿菌噬菌體研究進(jìn)展

    吳偉勝+李玉保+王守榮等

    摘要: 大腸桿菌病為畜牧養(yǎng)殖業(yè)常見疾病之一,目前臨床上主要依賴于抗生素進(jìn)行控制。隨著大腸桿菌耐藥性增強(qiáng)以及人們對食品安全意識(shí)的提高,急需尋找安全、高效的抗生素替代品。噬菌體是能夠感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒總稱,具有巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值。對近幾年國內(nèi)外有關(guān)大腸桿菌噬菌體的分布、分離純化方法、保存方法、形態(tài)、pH值穩(wěn)定性、溫度穩(wěn)定性、分子生物學(xué)以及應(yīng)用方面作了簡要概述,并對以后的科研和應(yīng)用進(jìn)行了思考和展望。

    關(guān)鍵詞: 大腸桿菌;噬菌體;研究進(jìn)展

    中圖分類號(hào):S852.61+2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A[HK]

    文章編號(hào):1002-1302(2015)08-0008-03

    近年來,由于畜牧養(yǎng)殖業(yè)大量使用抗生素,導(dǎo)致病原微生物的耐藥性升高 [1],同時(shí),抗生素的使用對食品安全構(gòu)成威脅。噬菌體作為一類能夠感染和裂解大腸桿菌等微生物的病毒,具有宿主專一、不產(chǎn)生耐藥性 [2]、使用安全 [3-4]等優(yōu)勢,在美國已應(yīng)用于兒童腹瀉疾病的治療 [5]。因此,噬菌體有望在防控畜牧業(yè)腸道性疾病中替代抗生素。本文對近幾年國內(nèi)外關(guān)于大腸桿菌噬菌體的分離和保存方法、生物學(xué)特性等進(jìn)行綜述,希望能夠?qū)Υ竽c桿菌噬菌體更深入的研究和應(yīng)用提供思路和方法。

    1 大腸桿菌噬菌體的分布

    目前研究發(fā)現(xiàn)的病毒種類數(shù)量龐大,其中大部分是噬菌體 [6]。大腸桿菌噬菌體在我們生活的周圍環(huán)境中普遍存在。到目前為止,學(xué)者們已經(jīng)從不同的樣品中分離出來多種大腸桿菌噬菌體,并對所分離的噬菌體進(jìn)行了分類和命名。在養(yǎng)殖場的雞糞 [7-8]和污水中 [9],以不同的大腸桿菌為宿主菌分離到不同種類的大腸桿菌噬菌體;在養(yǎng)豬場的糞便中,以產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K88 為宿主菌分離并純化了1株噬菌體PK88-4 [10];在城市的污水中,以腸出血性大腸桿菌O157 ∶ H7為宿主菌分離出裂性噬菌體 [11]。此外,在醫(yī)院的污水中,用大腸桿菌E1~ E17共17種細(xì)菌做指示菌分離出1種廣譜噬菌體IME11 [12]。

    2 大腸桿菌噬菌體的分離純化方法

    對于噬菌體的分離純化,大致可以分為采樣、富集、分離、純化4個(gè)步驟。每個(gè)步驟又包含1種或多種不同的方法,可以根據(jù)自身的試驗(yàn)條件和試驗(yàn)狀況將不同方法組合,進(jìn)而得到最佳的分離純化方法。

    2.1 采樣

    采樣大致可以分為直接法、間接法和誘導(dǎo)法 [13]3種。直接法是指直接從對象菌生活的生物體上采集樣本的方法。李灝等 [14]、Connerton [15]都采用直接法從發(fā)病雞的腸道中采樣并分別分離出大腸桿菌噬菌體和空腸彎曲桿菌噬菌體。間接法是指根據(jù)對象菌的特性,從相應(yīng)的非生物壞境中采集樣本的方法。如從養(yǎng)雞場的污水、糞便和土壤中采樣進(jìn)而分離噬菌體 [8-9,16-17]。誘導(dǎo)法是指用對象菌去感染生物體進(jìn)而在生物體或其生活環(huán)境中采樣的方法。郭海萍等用痢疾志賀氏菌感染小鼠,采取小鼠的糞便進(jìn)而分離得到相應(yīng)噬菌體。

    2.2 富集

    富集也稱增殖,即將對象菌懸液與樣品液共同培養(yǎng),增加樣品液中噬菌體的含量,富集之后的樣品液更易分離出噬菌體。郭秋菊等從生活污水中采樣分離噬菌體,進(jìn)行了富集和不富集的對照試驗(yàn),結(jié)果顯示,富集之后的樣品很容易檢測到噬菌體,而不經(jīng)富集的樣品未檢測到噬菌體 [19]。雖然不經(jīng)富集的樣品中未檢測到噬菌體,但并不表示樣品中不含噬菌體。

    2.3 分離

    分離方法可以分為雙層瓊脂平板法、瓊脂平板涂布法、瓊脂平板傾注法3種 [13]。各種方法有自己的優(yōu)缺點(diǎn),學(xué)者們通常根據(jù)自己的試驗(yàn)條件和操作習(xí)慣進(jìn)行選擇。

    2.4 純化

    純化可以分為液體純化法和平板純化法 [13]。液體純化法中,用無菌槍頭或牙簽挑單個(gè)噬菌斑,然后接入含對象菌的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行適溫培養(yǎng),再經(jīng)過濾除菌即得到純化噬菌體 [20]。平板純化法中,也是用無菌槍頭或牙簽挑單個(gè)噬菌斑于緩沖液進(jìn)行洗脫,洗脫液經(jīng)適當(dāng)稀釋后再用雙層瓊脂平板法、瓊脂平板涂布法或瓊脂平板傾注法進(jìn)行培養(yǎng),如此操作 3~5次,即可得到純化噬菌體 [10,19]。

    3 大腸桿菌噬菌體的保存方法

    在對噬菌體的保存方法上,研究學(xué)者們嘗試過很多種方法,不同的保存方法對噬菌體活性的保持影響很大。

    陳萍等取3組500 μL噬菌體裂解液:第一組加入了 100 μL 氯仿,第二組加入500 μL LB液體培養(yǎng)基,第三組加入CaCl2和MgCl2至終濃度10 mmol/L、0. 1%明膠, 4 ℃ 保存1個(gè)月,結(jié)果顯示第三組噬菌體的活性很少降低,效價(jià)最高 [21]。

    有很多關(guān)于-18 ℃保存噬菌體的研究。陳海陽將1株廣譜大腸桿菌噬菌體EX01裂解液放于-18 ℃低溫保存,每隔一周測定其效價(jià),結(jié)果顯示噬菌體EX01在35 d時(shí)仍具有較高的效價(jià),56 d時(shí)仍有感染性,63 d時(shí)感染性消失 [13]。郭秋菊等對比了在-18 ℃保存已純化的噬菌體平板或噬菌體懸液的2種方法。結(jié)果顯示,2種方法都能保存1個(gè)月以上,但平板保存法優(yōu)于噬菌體懸液保存法 [19]。

    另外報(bào)道顯示,T4-Like大腸桿菌噬菌體在10 mmol/L的鎂離子中,30 ℃保存超過1個(gè)月,效價(jià)都沒有降低 [22]。

    4 大腸桿菌噬菌體的形態(tài)

    噬菌體個(gè)體微小,不具有細(xì)胞的完整結(jié)構(gòu),只含有單一核酸。噬菌體按蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)可以分為無尾部的二十面體、有尾部的二十面體和線狀體3種。無尾部的噬菌體外表由蛋白外殼組成,核酸被包裹在內(nèi)部。有尾部的噬菌體除了頭部外,還有尾部和基部:尾部由1個(gè)中空的針狀結(jié)構(gòu)及外鞘組成,基部由尾絲和尾針組成。線狀體噬菌體沒有明顯的頭部結(jié)構(gòu),而是由殼粒組成的盤旋狀結(jié)構(gòu)。

    已知的噬菌體大多都是有尾部的二十面體。許多研究人員分別對從養(yǎng)殖場糞便中、河水中和污水中分離出的噬菌體進(jìn)行了電鏡拍照,照片顯示噬菌體都由頭部和尾部組成,且頭部呈正多面體狀,直徑45~95 nm,尾部粗長、含有尾鞘,長100~120 nm [7,10-11,23-24]。

    此外,郭秋菊等從生活污水中分離了3種類型的噬菌體,經(jīng)電鏡拍照顯示:一種類型的噬菌體尾部不能收縮,頭部為二十面體,直徑110~120 nm,尾長220~230 nm,尾寬13~15 nm,沒有尾鞘、基板、尾丁、尾絲;一種類型的噬菌體尾部可以收縮,頭部為三十面體,直徑70~110 nm,尾長120~130 nm,尾寬18~22 nm,有尾鞘、基板、尾丁和尾絲結(jié)構(gòu);一種類型為短尾噬菌體,頭部直徑約20 nm,尾長2~3 nm [19]。

    5 大腸桿菌噬菌體穩(wěn)定性

    5.1 pH值穩(wěn)定性

    噬菌體生長和其他微生物一樣,除了其他必要的生長條件外,還需要有適合其生長的pH值。在其他生長條件相同的情況下,pH值不同對噬菌體生長的影響也不同。何覓之將Bp9B1226噬菌體純培養(yǎng)液分別加入不同pH值(4、5、6、7、8、9、10、11)的LB液體培養(yǎng)基中,放于37 ℃恒溫水浴24小時(shí),用雙層平板法測定噬菌體效價(jià),結(jié)果顯示Bp9B1226噬菌體在pH值=6~9時(shí),噬菌體效價(jià)指數(shù)無明顯變化,當(dāng)pH值<5或pH值>10時(shí),噬菌體效價(jià)指數(shù)明顯下降 [25]。另外,代保英對大腸桿菌噬菌體BpD的pH值的穩(wěn)定性也做了類似的試驗(yàn),結(jié)果顯示:在pH值=5~9時(shí),噬菌體BpD活性較高,尤其在pH值=7~8時(shí),活性最高;在pH值<5或pH值>9時(shí),活性明顯下降 [26]。由此看出,大腸桿菌噬菌體對pH值的適應(yīng)范圍較廣。

    5.2 溫度穩(wěn)定性

    溫度對噬菌體的感染力有很大影響,找到噬菌體保持感染力的溫度范圍,將會(huì)對進(jìn)行噬菌體更深入的研究與應(yīng)用起到關(guān)鍵作用。張培東等對大腸桿菌噬菌體Bp6的熱穩(wěn)定性做了測定,他們將具有一定效價(jià)的噬菌體Bp6懸液分別經(jīng)40、50、60、70、80、90 ℃水浴30 min和1 h,隨即將懸液冰浴冷卻測其效價(jià),結(jié)果顯示噬菌體Bp6在40 ℃下作用30 min和 1 h 活性基本不變,50 ℃和60 ℃下作用 30 min 和1 h仍有較高活性,70 ℃下作用30 min和1 h基本失去活性,80 ℃和90 ℃下作用30 min和1 h完全失去活性 [7]。何覓之 [25]和代保英 [26]也分別對相應(yīng)的大腸桿菌噬菌體做了類似試驗(yàn),結(jié)果顯示,噬菌體對溫度的穩(wěn)定性比較高,但長時(shí)間處于70 ℃以上高溫,噬菌體的活性會(huì)迅速降低以至失去。

    6 大腸桿菌噬菌體分子生物學(xué)

    噬菌體所含的核酸可以分為4種:單鏈RNA(ssRNA)、雙鏈RNA(dsRNA)、單鏈DNA(ssDNA)和雙鏈DNA(dsDNA)。

    在近幾年的研究中發(fā)現(xiàn),多數(shù)大腸桿菌噬菌體的遺傳物質(zhì)為DNA。尹雅菲等對分離出的1種寬譜噬菌體IME11做了遺傳物質(zhì)的鑒定,他們分別用DNaseⅠ和RNaseA 處理噬菌體IME11的遺傳物質(zhì),證明噬菌體IME11的遺傳物質(zhì)為DNA,并用限制性內(nèi)切酶處理其遺傳物質(zhì),證明其遺傳物質(zhì)為dsDNA [12]。同時(shí),王冉等對分離出的1株噬菌體PK88-4也做了基因組分析及酶切鑒定,證明噬菌體PK88-4的遺傳物質(zhì)為dsDNA,基因組大小約為60 kb [10]。

    此外,有些關(guān)于大腸桿菌噬菌體的研究顯示,其遺傳物質(zhì)為RNA。徐焰等對1株分離自醫(yī)院污水的寬宿主譜大腸桿菌噬菌體和1株單一宿主譜噬菌體f2進(jìn)行了遺傳物質(zhì)測定,結(jié)果顯示,寬宿主譜大腸埃希菌噬菌體和f2 噬菌體均為 6 000 bp 左右的單鏈RNA [27]。

    7 大腸桿菌噬菌體的噬菌譜

    根據(jù)噬菌體的噬菌譜不同,可以大致將噬菌體分為寬宿主譜噬菌體和專一宿主噬菌體。

    寬宿主譜噬菌體是指能夠裂解多種宿主菌的噬菌體。徐焰等從醫(yī)院污水中分離出1株大腸桿菌噬菌體,經(jīng)宿主范圍測定,發(fā)現(xiàn)該噬菌體可以裂解5株大腸桿菌,所以可以確定該噬菌體為大腸桿菌寬宿主譜噬菌體 [28]。此外,王禮偉等 [9]和杜崇濤等 [11]也分別從養(yǎng)雞場污水和城市污水中分離出了大腸桿菌寬宿主譜噬菌體。

    專一宿主噬菌體是指只能夠裂解專一宿主菌的噬菌體。因其具有嚴(yán)格的宿主專一性,在細(xì)菌的檢測、細(xì)菌分型以及特異性裂解方面都有很強(qiáng)的優(yōu)勢 [29]。

    8 大腸桿菌噬菌體的安全性

    [JP3]和抗生素相比,噬菌體不易造成細(xì)菌的抗性。相關(guān)性研究表明,細(xì)菌對噬菌體產(chǎn)生抗性的突變頻率為10 -7,產(chǎn)生抗性的幾率很小 [30],而且噬菌體也可以為適應(yīng)宿主菌產(chǎn)生適當(dāng)?shù)淖儺?[2]。

    噬菌體在清除宿主菌的同時(shí),也不會(huì)影響動(dòng)物體內(nèi)周圍的正常菌群。Chibani-Chennoufi等用4種大腸桿菌噬菌體飼喂小鼠,結(jié)果顯示噬菌體幾乎對正常菌群沒有影響 [31]。Bruttin等讓15個(gè)志愿者服用T4噬菌體,受試者均無不良反應(yīng),且沒有影響腸道內(nèi)正常菌群 [3]。

    9 大腸桿菌噬菌體的應(yīng)用

    噬菌體生物制劑在治療疾病中有很多的優(yōu)勢:噬菌體的特異性強(qiáng),能專一地裂解宿主菌,且不會(huì)破壞一些正常菌群;噬菌體的增殖周期比較短,產(chǎn)生子代噬菌體的數(shù)量大,對疾病的治療會(huì)更加快速有效;在噬菌體將病原菌裂解之后,噬菌體會(huì)隨著病原菌的清除而自動(dòng)滅亡,不會(huì)殘留在動(dòng)物體內(nèi) [32]。Tanji等用3株廣譜噬菌體做成混合制劑,用于裂解體外培養(yǎng)的E. coli O157:H7菌,結(jié)果顯示噬菌體混合制劑成功裂解了E. coli O157:H7 菌,同時(shí)又把混合制劑飼喂被E. coli O157:H7 感染的小鼠,小鼠腸道的E. coli O157:H7菌也被完全裂解 [33]。Smith等用噬菌體Φ9882治療經(jīng)大腸埃希菌感染的小鼠,結(jié)果小鼠全部存活,而用生理鹽水的對照組小鼠全部死亡 [34]。Smith等用噬菌體B85/1、B85/2成功治愈了小牛大腸埃希菌引起的腹瀉 [35]。

    10 展望

    在抗生素使用泛濫的時(shí)代,耐藥菌株增長的速度也越來越快。噬菌體作為一種生物制劑,無疑會(huì)在畜禽疾病的防治上起到很好的作用。到目前為止,全國各地的科研人員和技術(shù)人員在大腸桿菌噬菌體方面做了大量的工作,并取得了可喜的成果。但是,噬菌體在臨床上的應(yīng)用還有很漫長的科研之路。開發(fā)能對應(yīng)相關(guān)疾病的噬菌體試劑或混合制劑,在某些情況下避免生物體內(nèi)的非特異性免疫反應(yīng),這些都是擺在我們面前的難題。同時(shí),由于噬菌體對宿主的高度特異性,尋找寬宿主譜噬菌體,研究噬菌體的溶壁酶都是我們努力的方向。相信在廣大科研技術(shù)工作人員的共同努力下,噬菌體一定能在畜禽疾病防治方面起到重要的作用。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 鄒 玲,唐 棟,劉文華,等. 雞致病性大腸桿菌噬菌體的分離[J]. 中國畜牧獸醫(yī),2007,34(3):103-104.

    [2]王 盛,童貽剛. 噬菌體治療研究進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)通報(bào),2009,36(7):1019-1024.

    [3]Bruttin A,Brüssow H. Human volunteers receiving Escherichia coli phage T4 orally:a safety test of phage therapy[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy,2005,49(7):2874-2878.

    [4]Borysowski J,Górski A. Is phage therapy acceptable in the immunocompromised host?[J]. International Journal of Infectious Diseases,2008,12(5):466-471.

    [5]dHerelle F. Bacteriophage as a treatment in acute medical and surgical infections[J]. Bulletin of the New York Academy of Medicine,1931,7(5):329-348.

    [6]Breitbart M,Rohwer F. Here a virus,there a virus,everywhere the same virus?[J]. Trends in Microbiology,2005,13(6):278-284.

    [7]張培東,孫 巖,任慧英,等. 大腸桿菌噬菌體的分離及其生物學(xué)特性[J]. 中國獸醫(yī)雜志,2008,44(4):10-12.

    [8]李 冰,唐 峰. 雞大腸桿菌噬菌體分離及裂解性試驗(yàn)[J]. 中國家禽,2011,33(14):63-64.

    [9][JP2]王禮偉,梁 晏,屈勇剛,等. 一株雞源致病性大腸桿菌噬菌體的分離及其生物學(xué)特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,30(2):455-457.

    [10] 王 冉,韓 晗,張 輝,等. 大腸桿菌K88噬菌體的分離鑒定及其生物學(xué)特性[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào),2012,27(4):163-167.

    [11]杜崇濤,王文東,劉 軍,等. 腸出血性大腸桿菌O157:H7噬菌體的分離純化[J]. 吉林畜牧獸醫(yī),2008,29(4):6-8.

    [12]尹雅菲,張 樂,慶 宏,等. 新廣譜大腸桿菌噬菌體IME11的分離及鑒定[J]. 生物醫(yī)學(xué)工程與臨床,2013,17(5):483-486.

    [13]陳海陽. 大腸桿菌噬菌體的分離純化及其在海水養(yǎng)殖中的應(yīng)用[D]. 廈門:廈門大學(xué),2013:4-5.

    [14]李 灝,謝慧君,孔 健,等. 畜禽腸道致病菌噬菌體的生物學(xué)特性研究[J]. 微生物學(xué)通報(bào),2004,31(2):10-13.

    [15]Connerton P. Natural campylobacter control with bacteriphage[J]. World Poultry,2006,26(6):25-26.

    [16]趙 燕,任紅衛(wèi),孔 健,等. 噬菌體生態(tài)防治效果試驗(yàn)初報(bào)[J]. 中國獸醫(yī)雜志,2005,41(3):18-20.

    [17]Huff W E,Rath N C,Balog J M,et al. Alternatives to antibiotics:utilization of bacteriophage to treat colibacillosis and prevent foodborne pathogens[J]. Poultry Science,2005,84:655-659.

    [18]郭海萍,陳振輝,黃艷梅,等. 污水中腸道桿菌噬菌體的分離及其生物學(xué)活性研究[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,27(10):1545-1546.

    [19]郭秋菊,滕井華,許榮均,等. 大腸桿菌噬菌體的分離、純化及其特性研究[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,47(增刊2):273-277.

    [20]錢存柔,黃儀秀,林稚蘭,等. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程[M]. 北京:北京大學(xué)出版社,1999:31-35.

    [21]陳 萍,沈明浩,王 平. 出血性大腸桿菌噬菌體933W的分離鑒定和保存[J]. 中國獸藥雜志,2007,41(6):19-21.

    [22]Bourdin G,Schmitt B,Marvin Guy L,et al. Amplification and purification of T4-like Escherichia coli phages for phage therapy:from laboratory to pilot scale[J]. Applied and Environmental Microbiology,2014,80(4):1469-1476.

    [23]趙貴明,仉慶文,姚李四,等. 阪崎腸桿菌噬菌體的分離及其生物學(xué)特性[J]. 微生物學(xué)報(bào),2008,48(10):1373-1377.

    [24]劉霄飛,任慧英,劉文華,等. 大腸桿菌噬菌體Bp7裂解性能分析[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2010,26(9):18-21.

    [25]何覓之. 大腸桿菌K88、K99廣譜噬菌體的分離與生物學(xué)特性鑒定[D]. 武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2012:25-26.

    [26]代保英. 大腸桿菌K88噬菌體的分離、分類初步鑒定和生物學(xué)特性的測定[D]. 揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2009:44-45.

    [27]徐 焰,彭道榮,熊鴻燕,等. 一株寬宿主譜大腸埃希菌噬菌體的RNA比較分析及其環(huán)境微生物殺滅效應(yīng)觀察[J]. 中華流行病學(xué)雜志,2005,26(5):356-360.

    [28][JP3]徐 焰,熊鴻燕,宋建勇,等. 1株寬宿主譜大腸桿菌噬菌體的生物[JP2]學(xué)特性觀察[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,25(23):2106-2108.

    [29]秦天呈,姚 彬,王 文,等. 噬菌體治療細(xì)菌感染的研究進(jìn)展[J]. 四川生理科學(xué)雜志,2012,34(2):85-87.

    [30]Carlton R M. Phage therapy:past history and future prospects[J]. Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis,1999,47(5):267-274.

    [31]Chibani-Chennoufi S,Sidoti J,Bruttin A,et al. In vitro and in vivo bacteriolytic activities of Escherichia coli phages:implications for phage therapy[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy,2004,48(7):2558-2569.

    [FL)]

    [KH*4D]

    [HT8.]

    [32] Miedzybrodzki R,F(xiàn)ortuna W,Weber-Dabrowska B,et al. Phage therapy of staphylococcal infections (including MRSA) may be less expensive than antibiotic treatment[J]. Postepy Hig Med Dosw,2007,61:461-465.

    [33]Tanji Y,Shimada T,F(xiàn)ukudomi H,et al. Therapeutic use of phage cocktail for controlling Escherichia coli O157:H7 in gastrointestinal tract of mice[J]. Journal of Bioscience and Bioengineering,2005,100(3):280-287.

    [34][JP3]Smith H W,Huggins M B. Successful treatment of experimental Escherichia coli infections in mice using phage:its general superiority over antibiotics[J]. Journal of General Microbiology,1982,128(2):307-318.

    [35]Smith H W,Huggins M B,Shaw K M. The control of experimental Escherichia coli diarrhoea in calves by means of bacteriophages[J]. Journal of General Microbiology,1987,133(5):1111-1126.

    猜你喜歡
    大腸桿菌噬菌體研究進(jìn)展
    不同富集培養(yǎng)方法對噬菌體PEf771的滴度影響
    MiRNA-145在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中的研究進(jìn)展
    高效裂解多重耐藥金黃色葡萄球菌的噬菌體分離及裂解酶的制備
    離子束拋光研究進(jìn)展
    獨(dú)腳金的研究進(jìn)展
    基于樹枝狀分子及功能化金納米粒子的電化學(xué)免疫傳感器檢測污泥中大腸桿菌
    副溶血弧菌噬菌體微膠囊的制備及在餌料中的應(yīng)用
    噬菌體治療鮑曼不動(dòng)桿菌感染的綜述
    EGFR核轉(zhuǎn)位與DNA損傷修復(fù)研究進(jìn)展
    国产精品美女特级片免费视频播放器 | 免费看十八禁软件| 操出白浆在线播放| 久久影院123| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久久久久国产电影| 久久久精品免费免费高清| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久精品亚洲av国产电影网| av一本久久久久| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 午夜视频精品福利| 亚洲第一青青草原| 亚洲av日韩在线播放| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲国产看品久久| 亚洲九九香蕉| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产av国产精品国产| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产日韩欧美在线精品| 丝袜美腿诱惑在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日本黄色视频三级网站网址 | 欧美在线一区亚洲| 女人精品久久久久毛片| 精品高清国产在线一区| 午夜视频精品福利| 成年人免费黄色播放视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产人伦9x9x在线观看| 91精品国产国语对白视频| 岛国在线观看网站| 99国产精品99久久久久| 精品人妻熟女毛片av久久网站| av欧美777| 免费黄频网站在线观看国产| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产日韩欧美在线精品| 午夜福利,免费看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久热这里只有精品99| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产看品久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 成人手机av| 国产av又大| 97在线人人人人妻| 欧美黑人精品巨大| 亚洲中文av在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 69av精品久久久久久 | 精品第一国产精品| 男女高潮啪啪啪动态图| 一本大道久久a久久精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 女性生殖器流出的白浆| 免费观看av网站的网址| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 俄罗斯特黄特色一大片| 午夜福利免费观看在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 久9热在线精品视频| 三级毛片av免费| 欧美另类亚洲清纯唯美| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美乱码精品一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 久久久久久人人人人人| 丁香欧美五月| 日本黄色日本黄色录像| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲五月色婷婷综合| 国产淫语在线视频| 电影成人av| 欧美精品av麻豆av| 亚洲熟女毛片儿| 国产一卡二卡三卡精品| 国产精品偷伦视频观看了| 黄色怎么调成土黄色| 蜜桃国产av成人99| 性高湖久久久久久久久免费观看| 首页视频小说图片口味搜索| 黄色视频在线播放观看不卡| 99re6热这里在线精品视频| 久久午夜亚洲精品久久| 怎么达到女性高潮| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产一区二区激情短视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 午夜日韩欧美国产| 国产精品影院久久| 天天添夜夜摸| 2018国产大陆天天弄谢| 久热爱精品视频在线9| 一进一出好大好爽视频| 久久性视频一级片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 丝瓜视频免费看黄片| 国产男女超爽视频在线观看| av网站在线播放免费| 曰老女人黄片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 制服诱惑二区| 91九色精品人成在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 男女免费视频国产| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 中文亚洲av片在线观看爽 | 两性夫妻黄色片| 久久青草综合色| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 黄色丝袜av网址大全| 国产亚洲一区二区精品| 女人久久www免费人成看片| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产在视频线精品| 午夜福利欧美成人| 丝袜人妻中文字幕| 啦啦啦在线免费观看视频4| 嫩草影视91久久| 男女午夜视频在线观看| 色94色欧美一区二区| 欧美黄色淫秽网站| www日本在线高清视频| 亚洲国产看品久久| 国产黄频视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 在线观看一区二区三区激情| 中文欧美无线码| 91精品国产国语对白视频| 久久久国产欧美日韩av| 免费看十八禁软件| 日日爽夜夜爽网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美久久黑人一区二区| 飞空精品影院首页| 国产精品av久久久久免费| 欧美成人免费av一区二区三区 | 国产99久久九九免费精品| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产精品av久久久久免费| 人成视频在线观看免费观看| a在线观看视频网站| 欧美黄色淫秽网站| 9色porny在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久久久网色| 亚洲 国产 在线| 国产伦理片在线播放av一区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久香蕉激情| 伦理电影免费视频| 黑人操中国人逼视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 99精品欧美一区二区三区四区| 丝袜人妻中文字幕| 美女福利国产在线| 国产xxxxx性猛交| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产成人免费观看mmmm| 欧美日韩精品网址| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 午夜久久久在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 婷婷丁香在线五月| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲综合色网址| 欧美日韩黄片免| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久影院123| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 午夜91福利影院| 国产高清激情床上av| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美性长视频在线观看| 亚洲av美国av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| tube8黄色片| 国产精品偷伦视频观看了| 咕卡用的链子| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美 日韩 精品 国产| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久热在线av| 国产高清激情床上av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲色图av天堂| 在线天堂中文资源库| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 中文亚洲av片在线观看爽 | 老司机午夜十八禁免费视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产亚洲精品久久久久5区| 精品久久蜜臀av无| 电影成人av| 多毛熟女@视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产精品久久久久久精品古装| videos熟女内射| 久久国产精品大桥未久av| 夜夜夜夜夜久久久久| 一区二区三区国产精品乱码| 国产男靠女视频免费网站| 天天添夜夜摸| 一级片'在线观看视频| 国产视频一区二区在线看| 久久久国产欧美日韩av| 丝袜美腿诱惑在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久精品区二区三区| 老司机影院毛片| 国产精品 欧美亚洲| 999精品在线视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲中文av在线| 日本wwww免费看| 久久 成人 亚洲| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲精华国产精华精| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 女警被强在线播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产精品亚洲一级av第二区| 999久久久精品免费观看国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产97色在线日韩免费| 成人精品一区二区免费| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 满18在线观看网站| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 曰老女人黄片| h视频一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 一区二区三区激情视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 黑人操中国人逼视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 一本色道久久久久久精品综合| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 香蕉久久夜色| 国产成人精品在线电影| 国产一区二区 视频在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产黄频视频在线观看| 曰老女人黄片| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美在线一区亚洲| 色综合婷婷激情| 精品乱码久久久久久99久播| 久久久久精品国产欧美久久久| 成人国产一区最新在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产亚洲精品一区二区www | 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美精品一区二区免费开放| 黄色视频在线播放观看不卡| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲午夜理论影院| 亚洲久久久国产精品| 国产精品 欧美亚洲| 色在线成人网| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品国产区一区二| 这个男人来自地球电影免费观看| www日本在线高清视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美一级毛片孕妇| 新久久久久国产一级毛片| 国产av又大| 麻豆成人av在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 一区二区av电影网| 亚洲成人免费电影在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 丰满少妇做爰视频| 成人免费观看视频高清| 黄片播放在线免费| 久久久精品免费免费高清| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 成人国产一区最新在线观看| 视频区图区小说| 日韩中文字幕欧美一区二区| 又大又爽又粗| 麻豆乱淫一区二区| 欧美精品一区二区大全| 一本综合久久免费| 国产午夜精品久久久久久| 国产一区二区 视频在线| 精品人妻在线不人妻| 欧美成人免费av一区二区三区 | 国产不卡av网站在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频 | 丁香欧美五月| av电影中文网址| 激情在线观看视频在线高清 | 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产成人影院久久av| 国产男女内射视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久天堂一区二区三区四区| 日韩大码丰满熟妇| 国产人伦9x9x在线观看| 99国产精品一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 日韩欧美免费精品| 精品欧美一区二区三区在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩欧美一区视频在线观看| 一级片免费观看大全| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产午夜精品久久久久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 高清视频免费观看一区二区| 9色porny在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 亚洲情色 制服丝袜| 国产片内射在线| 亚洲av成人一区二区三| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩大片免费观看网站| 日韩免费高清中文字幕av| 国产男靠女视频免费网站| 满18在线观看网站| 免费av中文字幕在线| 天堂8中文在线网| 12—13女人毛片做爰片一| 黄色视频,在线免费观看| 69精品国产乱码久久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 天天影视国产精品| tocl精华| 一区二区三区乱码不卡18| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av成人一区二区三| 极品教师在线免费播放| 丝袜美足系列| 久久中文字幕一级| 老司机深夜福利视频在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 丰满少妇做爰视频| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲专区字幕在线| 91av网站免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 免费观看av网站的网址| 757午夜福利合集在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 9191精品国产免费久久| 老司机影院毛片| 精品久久久精品久久久| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品国产色婷婷电影| 三上悠亚av全集在线观看| 国产精品 国内视频| 日韩欧美免费精品| a在线观看视频网站| 我要看黄色一级片免费的| 欧美激情 高清一区二区三区| www.熟女人妻精品国产| 丝袜喷水一区| 亚洲免费av在线视频| 12—13女人毛片做爰片一| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 高清欧美精品videossex| 五月开心婷婷网| av一本久久久久| 丁香欧美五月| 亚洲伊人久久精品综合| 婷婷成人精品国产| 欧美精品一区二区免费开放| 97人妻天天添夜夜摸| 人成视频在线观看免费观看| www日本在线高清视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久中文字幕人妻熟女| 美女福利国产在线| 热99久久久久精品小说推荐| 国产精品 欧美亚洲| 日韩视频在线欧美| 一区二区av电影网| 丝瓜视频免费看黄片| 美女主播在线视频| 免费在线观看影片大全网站| 超色免费av| 老司机在亚洲福利影院| 叶爱在线成人免费视频播放| 真人做人爱边吃奶动态| 99国产精品免费福利视频| 免费av中文字幕在线| 一区福利在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 91成年电影在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 日韩欧美三级三区| 国产男女内射视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 操出白浆在线播放| 亚洲精品国产区一区二| 国产黄频视频在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 高清黄色对白视频在线免费看| 精品久久久精品久久久| 国产午夜精品久久久久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 一区二区日韩欧美中文字幕| 日韩大片免费观看网站| 国产精品影院久久| av国产精品久久久久影院| 欧美日韩黄片免| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品久久久精品久久久| 啦啦啦 在线观看视频| 91大片在线观看| 99久久人妻综合| 十八禁人妻一区二区| 97人妻天天添夜夜摸| 男女之事视频高清在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品二区激情视频| 黑人猛操日本美女一级片| 精品亚洲成国产av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 十八禁高潮呻吟视频| 一级片'在线观看视频| 18禁国产床啪视频网站| 在线观看免费高清a一片| 国产伦人伦偷精品视频| 日韩一区二区三区影片| 黄色片一级片一级黄色片| 新久久久久国产一级毛片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 999精品在线视频| 亚洲av电影在线进入| 99riav亚洲国产免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 两个人看的免费小视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲精品乱久久久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 久久这里只有精品19| 国产精品亚洲一级av第二区| 中文欧美无线码| 国产一区二区三区视频了| 久久香蕉激情| 亚洲 国产 在线| bbb黄色大片| www.自偷自拍.com| 两人在一起打扑克的视频| 老熟女久久久| 国产成人免费观看mmmm| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 国产欧美亚洲国产| 脱女人内裤的视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 天堂8中文在线网| 成年人免费黄色播放视频| 国产av国产精品国产| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 午夜福利视频精品| 成人免费观看视频高清| 精品少妇内射三级| 一个人免费在线观看的高清视频| netflix在线观看网站| 国产一区二区激情短视频| 亚洲午夜理论影院| 久久国产精品大桥未久av| 一区二区三区乱码不卡18| 免费观看人在逋| 国产av国产精品国产| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国精品久久久久久国模美| 日本黄色日本黄色录像| 精品国内亚洲2022精品成人 | 精品一区二区三卡| 色综合欧美亚洲国产小说| 午夜福利欧美成人| 午夜久久久在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 性少妇av在线| 色在线成人网| 成人三级做爰电影| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩欧美一区视频在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| kizo精华| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲中文av在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久中文字幕人妻熟女| 精品久久久精品久久久| 国产免费福利视频在线观看| 不卡av一区二区三区| 亚洲av日韩在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 久久精品91无色码中文字幕| 水蜜桃什么品种好| 亚洲一码二码三码区别大吗| 曰老女人黄片| 久久久久国内视频| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲黑人精品在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲欧美激情在线| 日韩有码中文字幕| 极品少妇高潮喷水抽搐| 午夜激情久久久久久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品第一国产精品| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 大码成人一级视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产成人欧美在线观看 | 日韩欧美一区视频在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 日韩三级视频一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 一夜夜www| 手机成人av网站| 十八禁人妻一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 中文字幕人妻熟女乱码| 日韩中文字幕欧美一区二区| 夫妻午夜视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 777米奇影视久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| av国产精品久久久久影院| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲av日韩在线播放| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 91国产中文字幕| 亚洲全国av大片| 正在播放国产对白刺激| 大陆偷拍与自拍| 亚洲三区欧美一区| 在线av久久热| 欧美激情 高清一区二区三区| av不卡在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产淫语在线视频| 亚洲av片天天在线观看| 久久性视频一级片| 国产又色又爽无遮挡免费看| 大片免费播放器 马上看| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲美女黄片视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产欧美日韩一区二区精品| 精品人妻在线不人妻| 一区二区三区乱码不卡18| 成人黄色视频免费在线看| 久久狼人影院| netflix在线观看网站| 制服诱惑二区| 国产高清激情床上av| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 香蕉国产在线看| 久久亚洲精品不卡| 国产亚洲精品一区二区www | 美女福利国产在线| 国产精品偷伦视频观看了| 久久狼人影院| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲五月婷婷丁香| 在线观看一区二区三区激情| 国产成人免费无遮挡视频| 嫁个100分男人电影在线观看| tube8黄色片| 国产免费视频播放在线视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 午夜福利欧美成人| 咕卡用的链子| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频|