陰道分泌物五聯(lián)檢試劑盒臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)

莫宗平

摘要：目的 評(píng)價(jià)碩世陰道炎五聯(lián)檢試劑盒的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 收集169 例婦科門診患者陰道分泌物標(biāo)本同時(shí)用陰道炎五聯(lián)檢試劑盒與顯微鏡鏡檢，用Kappa檢驗(yàn)比較兩種方法的一致性。結(jié)果 五聯(lián)檢試劑盒與鏡檢結(jié)果比較：過氧化氫與細(xì)菌性陰道?。˙V）與鏡檢一致性良好，κ分別為0.61、0.74，總符合率分別為89.90%、92.90%；白細(xì)胞酯酶兩方法一致性中等，κ=0.58，總符合率為78.70%；真菌兩方法一致性差，κ=0.21，總符合率為68.00%，假陽性率為30.50%，假陰性率為39.30%；169例樣本中鏡檢出滴蟲1例，而五聯(lián)檢試劑盒未檢出。結(jié)論 陰道炎五聯(lián)檢試劑盒檢測真菌、滴蟲結(jié)果假陰性、假陽性率較高，需顯微鏡鏡檢確認(rèn)；白細(xì)胞酯酶與鏡檢一直性中等，需結(jié)合鏡檢；過氧化氫和BV與鏡檢一致性較好，可以滿足基層醫(yī)院臨床使用要求。

關(guān)鍵詞：陰道分泌物；過氧化氫；白細(xì)胞酯酶；真菌；細(xì)菌性陰道病

中圖分類號(hào)：R711.31；R446.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）18-0067-03

Abstract：Objective To evaluate the clinical application value of the master vaginitis five inspection kit.Methods 169 cases of gynecological patients with vaginitis vaginal secretion and five inspection kit with microscopy，consistent with Kappa test to compare the two methods.Results Five inspection kit and microscopic examination results：Hydrogen peroxide and bacterial vaginosis（BV）and microscopic consistency is good，κ were 0.61，0.74，the total coincidence rate were 89.90%，92.90%；leukocyte esterase two method medium consistency，κ=0.58，the total coincidence rate was 78.70%；Fungi two methods of poor consistency，κ=0.21，the total coincidence rate was 68.00%，the false positive rate was 30.50%，the false negative rate was 39.30%；A total of 1 case of trichomoniasis was detected in 169 samples，while the five test kit was not detected.Conclusion The five inspection kit for detection of fungal vaginitis，trichomonas and false negative results，high false positive rate，need microscope to confirm；Leukocyte esterase and microscopic examination are always moderate，and need to be combined with microscopic examination.The consistency of hydrogen peroxide and BV is better than that of microscopic examination，which can meet the requirements of clinical application in primary hospitals.

Key words：Vaginal secretions；Hydrogen peroxide；Leukocyte esterase；Fungi；Bacterial vaginosis

陰道分泌物常規(guī)檢測（俗稱“白帶常規(guī)”）是婦科門診檢查中應(yīng)用最普遍的一項(xiàng)，是評(píng)判女性是否患有陰道炎癥的重要診斷依據(jù)。傳統(tǒng)的檢測手段為濕片顯微鏡檢法，主要檢測項(xiàng)目包括上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、乳酸桿菌數(shù)量、查找真菌、滴蟲及線索細(xì)胞。該方法簡單直接、特異性高，也一直被作為金標(biāo)準(zhǔn)來推崇，但因是手工操作與人工判讀結(jié)果，對(duì)人員的技術(shù)要求高，可能存在不同人員在結(jié)果判讀上的差異，且隨著人們對(duì)健康關(guān)注度的提高，目前各大醫(yī)院的婦科門診患者越來越多，因手工操作繁瑣不利于檢測報(bào)告的及時(shí)發(fā)放。近幾年來，應(yīng)用干化學(xué)酶法聯(lián)合檢測白帶中的過氧化氫（H2O2）、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶活性及pH值來分別對(duì)應(yīng)白帶中的乳酸桿菌數(shù)量及功能、白細(xì)胞、細(xì)菌性陰道病（BV）、霉菌及滴蟲感染已逐漸成為白帶檢測中的熱點(diǎn)。本文旨在比較干化學(xué)酶法聯(lián)合檢測試劑盒中的這幾項(xiàng)檢測指標(biāo)與顯微鏡鏡檢的一致性，為實(shí)驗(yàn)室正確的應(yīng)用該檢測試劑盒提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料

收集本院2016年7月婦科門診主訴白帶增多、有異味、外陰瘙癢為主的患者分泌物169份，分泌物均用無菌棉試子取于陰道后穹窿。

1.2試劑

陰道炎五聯(lián)檢試劑及儀器由碩世生物科技有限公司提供。革蘭染液由珠海貝索公司提供。

1.3方法

取陰道后穹窿分泌物，分別用濕片顯微鏡常規(guī)鏡檢和陰道分泌物五聯(lián)檢試劑進(jìn)行檢測，同時(shí)涂一張干片革蘭染色進(jìn)行乳酸桿菌檢測。五聯(lián)檢檢測項(xiàng)目包括過氧化氫、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶及pH。endprint

1.3.1五聯(lián)檢結(jié)果的判斷 過氧化氫孔不顯色提示陰道菌群失調(diào)結(jié)果判斷（+），對(duì)應(yīng)鏡檢結(jié)果為乳酸桿菌異常（+）；白細(xì)胞酯酶（+），對(duì)應(yīng)鏡檢白細(xì)胞（+）；唾液酸苷酶（+），對(duì)應(yīng)鏡檢線索細(xì)胞（+）；乙酰氨基葡萄糖苷酶（+）且pH≥4.8對(duì)應(yīng)鏡檢查見滴蟲；乙酰氨基葡萄糖苷酶（+）且pH≤4.6對(duì)應(yīng)鏡檢查見真菌。

1.3.2顯微鏡結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn) 參照判斷標(biāo)準(zhǔn)，乳酸桿菌以查見≥6個(gè)/HP革蘭陽性長桿菌判為正常及鏡檢（-），<6個(gè)/HP判為異常鏡檢（+）；白細(xì)胞以≤15個(gè)/HP判為（-），≥15個(gè)/HP判為（+）， BV以查見線索細(xì)胞≥20%/HP判為（+），< 20%/HP判為（-）；真菌和滴蟲以濕片高倍鏡下查見判為（+），未查見判為（-）[1]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行？字2檢驗(yàn)及U檢驗(yàn)，比較兩方法的陽性及陰性率。Kappa（常寫成κ）值評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng) κ>0.80，說明兩方法一致性優(yōu)，0.60<κ≤0.80，說明一致性良好； 0.40<κ≤0.60說明一致性中等；若κ≤0.40，說明一致性差。U值95%標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分位數(shù)為1.96，U>1.96，則 P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

2.1過氧化氫檢測結(jié)果

169例樣本中五聯(lián)檢陽性147例，陽性率87.00%；鏡檢陽性140例，陽性率82.80%，兩方法陽性符合率96.40%，陰性符合率58.60%，診斷總符合率為89.90%，κ=0.61，U=6.79，P<0.05，兩方法一致性良好，見表1。

2.2細(xì)菌性陰道?。˙V）檢測結(jié)果

169例樣本中五聯(lián)檢陽性31例，陽性率18.30%，顯微鏡檢查見線索細(xì)胞25例，陽性率14.80%，兩方法陽性符合率為88.00%，陰性符合率為93.80%，診斷總符合率為92.90%；κ=0.74，U=10.42，P<0.05，兩法一致性良好，見表2。

2.3白細(xì)胞酯酶檢測結(jié)果

169例標(biāo)本中五聯(lián)檢白細(xì)胞酯酶陽性結(jié)果75例，陽性率44.40%，顯微鏡檢陽性結(jié)果95例，陽性率56.20%。兩方法陽性符合率為70.50%，陰性符合率89.20%，診斷總符合率為78.70%，κ=0.58，U=5.58，P<0.05，兩方法的一致性中等，見表3。

2.4真菌檢測結(jié)果

在169例樣本中五聯(lián)檢真菌陽性60例，陽性率35.50%，顯微鏡檢陽性28例，陽性率16.60%；兩方法陽性符合率為60.70%，陰性符合率為69.50%，總符合率為68.00%；κ=0.21，U=2.36，P<0.05，兩法一致性差；假陽性率為30.50%，假陰性率為39.30%，見表4。

2.5滴蟲檢測結(jié)果

169例樣本中五聯(lián)檢滴蟲陽性14例，陽性率8.28%，鏡檢陽性1例，陽性率0.60%，總符合率91.10%；假陽性8.33%，見表5。

3討論

陰道分泌物檢查是評(píng)價(jià)女性是否患有陰道炎的最常用的檢測方法，傳統(tǒng)檢測方法為濕片顯微鏡直接鏡檢，通過觀察分泌物中的上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、桿菌、線索細(xì)胞數(shù)量以及查看是否有真菌、滴蟲等來判斷陰道炎的程度及類型，診斷的特異性較高，但對(duì)檢驗(yàn)技術(shù)人員的要求較高，不能自動(dòng)化。碩世生物將過氧化氫、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶（BV）、乙酰氨基葡萄糖苷酶、pH值整合在同一試劑板條上，通過與碩士生物的陰道炎五聯(lián)檢儀器配套使用，只需簡單的向標(biāo)本內(nèi)加入稀釋液，儀器可自動(dòng)完成后續(xù)的加樣、結(jié)果判讀與數(shù)據(jù)上傳LIS，完成了多項(xiàng)目的同時(shí)檢測與自動(dòng)化。

女性陰道是一個(gè)復(fù)雜的微生態(tài)體系，正常育齡女性陰道內(nèi)有超過200種微生物，其中以乳酸桿菌為主占95%，其余5%是條件致病菌及過路菌；陰道乳酸桿菌分為產(chǎn)H2O2和不產(chǎn)H2O2兩類，產(chǎn)H2O2乳桿菌在健康女性陰道內(nèi)大量存在。H2O2是細(xì)菌間發(fā)生拮抗作用的自凈物質(zhì)，產(chǎn)H2O2乳桿菌的缺乏將誘發(fā)致病菌的過度生長，陰道內(nèi)微生態(tài)平衡被打破，導(dǎo)致陰道菌群失調(diào)，極易引起陰道感染性疾病。陰道分泌物五聯(lián)檢試劑盒將檢測H2O2活力用于評(píng)價(jià)陰道內(nèi)乳酸桿菌的多少，間接反應(yīng)陰道微生態(tài)是否平衡，本研究通過與鏡檢比較，兩方法一致性良好，診斷總符合率為89.9%。對(duì)于H2O2與鏡檢乳酸桿菌的數(shù)量的相關(guān)性問題，不同的研究者或使用不同廠家的試劑得到的結(jié)果存在一定的差異。冷嬌[1]等通過對(duì)908例婦科門診患者陰道分泌物應(yīng)用顯微鏡鏡檢與珠海麗拓五聯(lián)檢儀器及試劑進(jìn)行臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)五聯(lián)檢通過檢測H2O2來間接反映乳酸桿菌濃度，其結(jié)果與顯微鏡鏡檢一致性良好、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。章靜[2]對(duì)334例、溫立娟[3]對(duì)982例婦科門診患者陰道分泌物應(yīng)用鄭州安圖祿科的五聯(lián)檢試劑與鏡檢法比較，發(fā)現(xiàn)五聯(lián)檢試劑結(jié)果與顯微鏡鏡檢比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，五聯(lián)檢檢出率低于鏡檢法，分析原因可能與部分乳酸桿菌不產(chǎn)H2O2以及部分患者存在菌群正常而功能下降有關(guān)。乳酸桿菌功能試驗(yàn)與鏡檢比較不同的試劑廠家得到不同的結(jié)論，所以建議在試劑應(yīng)用前均應(yīng)做性能評(píng)價(jià)。

白細(xì)胞酯酶為白細(xì)胞中的中性粒細(xì)胞釋放的酶，在健康狀態(tài)下含量極低，當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥時(shí)，白細(xì)胞在炎性病灶聚集并大量釋放白細(xì)胞酯酶，因此檢測白細(xì)胞酯酶可反映陰道炎癥的程度。碩士五聯(lián)檢試劑盒通過檢測吞噬了足量細(xì)菌并被細(xì)菌產(chǎn)生的毒素分解后才釋放出來的存在于粒細(xì)胞內(nèi)的白細(xì)胞酯酶活性（即處于戰(zhàn)斗狀態(tài)的白細(xì)胞）來反映陰道炎癥的程度；傳統(tǒng)的濕片法顯微鏡檢陰道分泌物主要通過觀察每個(gè)高倍鏡視野下白細(xì)胞的數(shù)量來判斷炎癥的程度。通過該試劑盒與顯微鏡檢法比較，發(fā)現(xiàn)兩方法的一致性中等，診斷總符合率為78.70%。分析原因可能為兩方法檢測原理不同所致?；阽R檢法與五聯(lián)檢中的白細(xì)胞酯酶存在差異，筆者認(rèn)為應(yīng)對(duì)每一份標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行鏡檢與五聯(lián)檢以達(dá)到相互取長補(bǔ)短，減少漏檢。endprint

目前白帶中真菌和滴蟲的主要檢測手段為直接涂片鏡檢。顯微鏡檢對(duì)人員經(jīng)驗(yàn)要求高，且因冬季氣溫較低影響滴蟲活動(dòng)以及部分真菌形態(tài)不典型易造成漏檢。乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）為白色念珠菌、光滑念珠菌和滴蟲分泌的特異性酶，正常陰道分泌物不含此酶，只有在此類病原菌感染時(shí)才能檢測到此酶的存在。正常陰道分泌物pH值為3.8～4.5，念珠菌性陰道炎的分泌物pH值不>4.6，而滴蟲性陰道炎分泌物的pH值>4.8。因此通過NAG結(jié)合pH值能將二者區(qū)分開來[4-5]。五聯(lián)檢試劑盒應(yīng)用此原理，當(dāng)檢測結(jié)果NAG（+）且pH≥4.8判斷為滴蟲感染（TV）， NAG（+）且pH≤4.6判斷為真菌感染（VVC）。通過顯微鏡檢與五聯(lián)檢比較發(fā)現(xiàn)：兩法檢測真菌一致性差，κ=0.21，假陽性率為30.50%，假陰性率為39.30%，在檢測滴蟲上鏡檢發(fā)現(xiàn)1例滴蟲，而五聯(lián)檢試劑未檢測。分析原因?yàn)镹AG檢測真菌和滴蟲目前存在兩個(gè)問題：①真菌性陰道炎的病原體中僅白色念珠菌和光滑念珠菌有NAG，而熱帶念珠菌和克柔念珠菌則無該酶，唐振華[6]等對(duì)96例真菌性陰道炎患者陰道分泌物行真菌鑒定發(fā)現(xiàn)臨床分離菌中白色念珠菌與光滑念珠菌共占88.6%、其余11.4%為不產(chǎn)NAG的真菌。臧嘉[7]等對(duì)婦科陰道分泌物中的631例真菌進(jìn)行了鑒定，發(fā)現(xiàn)以白色假絲酵母菌最為多見，占陽性標(biāo)本的82.09%，其次是光滑假絲酵母菌占12.36%，其余占5.55%。陳小紅[8]等對(duì)婦科陰道分泌物中分離出的124例真菌性陰道炎樣本進(jìn)行了真菌鑒定，發(fā)現(xiàn)白色念珠菌與光滑念珠菌共占91.05%，其余占8.95%。因此，以NAG診斷真菌性陰道炎原理上存在部分真菌不能檢出的缺陷。②理論上滴蟲和真菌通過pH值能把兩者區(qū)分開來，但在實(shí)際操作中，由于加樣未加到、標(biāo)本渾濁、帶血標(biāo)本等因素常導(dǎo)致儀器pH檢測結(jié)果與實(shí)際有較大偏差，可能會(huì)出現(xiàn)無法準(zhǔn)確區(qū)分滴蟲與真菌的情況，從而造成NAG結(jié)果與鏡檢結(jié)果一致性差，所以綜上筆者認(rèn)為無論是NAG陰性還是陽性樣本，均應(yīng)進(jìn)行鏡檢。

細(xì)菌性陰道?。╞acterial vaginosis，BV）診斷是按世界衛(wèi)生組織推薦的Amsel法，查找線索細(xì)胞則是診斷BV的最具特征性的指標(biāo)，但由于操作復(fù)雜，主觀性強(qiáng)，陽性標(biāo)準(zhǔn)難以統(tǒng)一，所以應(yīng)用于常規(guī)診斷存在一定的困難。BV致病菌加德納菌、游動(dòng)彎曲桿菌等可產(chǎn)生大量唾液酸苷酶，較正常人高出100～1000倍。報(bào)道唾液酸苷酶試驗(yàn)診斷BV與Amsel金標(biāo)準(zhǔn)有很好的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)在BV檢測上兩方法的一致性良好，κ=0.74，診斷總符合率為92.90%。

綜上所述，該廠家五聯(lián)檢試劑盒中的BV及H2O2與鏡檢一致性良好，白細(xì)胞酯酶與與鏡檢白細(xì)胞一致性中等；霉菌、滴蟲與鏡檢的符合程度低、一致性差，存在較高的假陰性與假陽性。在滴蟲、霉菌、白細(xì)胞項(xiàng)目上不能替代顯微鏡檢。

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編輯/成森endprint