布洛芬異構體在大鼠體內的藥代動力學研究

曾文學，周春陽，何 林

(1.川北醫(yī)學院藥學院，四川 南充 637100；2.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院，四川 成都 610072)

布洛芬異構體在大鼠體內的藥代動力學研究

曾文學1，周春陽1，何 林2

(1.川北醫(yī)學院藥學院，四川 南充 637100；2.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院，四川 成都 610072)

目的研究布洛芬異構體在大鼠體內的藥代動力學特征。方法將9只SD大鼠簡單隨機化分為低、中、高劑量3組，每組3只，分別灌胃給予布洛芬消旋液13.6、27.0、54.5 mg/kg。建立高效液相色譜法，分別測定左旋和右旋布洛芬的血藥濃度，計算藥代動力學參數。結果左旋布洛芬低、中、高劑量組的藥代動力學參數峰濃度Cmax分別為(15.75±3.07)、(15.73±4.47)、(53.75±10.83) μg/ml，曲線下表面積AUC0-t分別為(15.23±2.15)、(18.23±2.54)、(57.58±5.94) μg/(ml·h)，清除率CLz 分別為(0.86±0.11)、(1.39±0.12)、(0.88±0.10)L/(kg· h)；右旋布洛芬低、中、高劑量組的藥代動力學參數Cmax分別為(29.69±2.55)、(39.63±2.50)、(83.32±9.27) μg/mL，AUC0-t分別為(96.17±13.42)、(117.90±18.19)、(259.35±52.24) μg/(ml·h)、CLz分別為(0.11±0.03)、(0.19±0.05)、(0.16±0.03)L/(kg· h)。結論布洛芬的左旋體和右旋體都符合線性藥代動力學特征。

布洛芬；藥代動力學；手性藥物

手性藥物(chiral drug)，是指藥物分子結構中引入手性中心后，得到的一對互為實物與鏡像的對映異構體。手性藥物進入體內后，它的兩個對映異構體通常會表現(xiàn)出不同的生物活性，一個異構體可能是有效的，而另一個異構體可能是無效甚至是有害的。手性制藥就是利用這種原理，開發(fā)出藥效高、副作用小的藥物。在臨床治療方面，服用對映體純的手性藥物不僅可以排除由于無效(不良)對映體所引起的毒副作用，還能減少藥劑量和人體對無效對映體的代謝負擔，對藥物動力學及劑量有更好的控制，提高藥物的專一性。布洛芬是一個選擇性抑制環(huán)氧化酶-2的非甾體抗炎藥[1]，在臨床上廣泛用于解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎。在治療關節(jié)炎方面也有良好的作用[2]。布洛芬具有對映異構體結構，就消旋布洛芬而言，其體內過程呈線性動力學特征[3]，但其左旋體和右旋體在體內的藥理活性、代謝過程存在顯著差異[4]。由于目前對于是否存在開發(fā)右旋布洛芬的必要性存在爭議，本研究試圖從藥動學、藥效學及不良反應等方面進行探究。因體內的輔酶A硫酯和甲基丙二酰輔酶A的消旋酶可將左旋布洛芬單向轉化為右旋布洛芬等因素存在，而且右旋又是優(yōu)勢構型[5]，因此有必要研究進入在體內后左旋和右旋布洛芬藥代動力學特征。本研究通過大鼠灌胃給予三個劑量的消旋布洛芬，用建立的HPLC法測定體內左旋和右旋布洛芬血藥濃度，并在此基礎上分別考察左旋與右旋布洛芬的體內藥代動力學特征，為手性藥物的開發(fā)和臨床用藥提供依據。

1 材料與方法

1.1實驗動物健康SD大鼠，體重(180～220)g，購于成都達碩生物科技有限公司。9只SD雄性大鼠簡單隨機化分為低、中、高劑量3組，每組3只。飼養(yǎng)溫度：22～25 ℃，相對濕度：40～70%。

1.2試劑布洛芬(含量：99.9% 批號：11043231，山東新華制藥股份有限公司)；右旋布洛芬(含量：100.2%，批號：C102-1310023 M，湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司)；左旋布洛芬(含量：99.8%，批號：R131108，成都苑東藥業(yè)有限公司)；水楊酸(內標，批號：1503023，華陽市錦前程藥業(yè)有限公司)；布洛芬混懸液(規(guī)格：2 g/100 ml，批號：151019140，上海強生制藥有限公司)；正己烷、異丙醇、三氟乙酸均為色譜純。鹽酸、乙醚均為分析純?？勺C號：SCXK(川)2008-24。Waters2690高效液相色譜儀(美國Waters)。

1.2測定條件與樣品處理

1.2.1色譜 條件色譜柱為CHIRALCEL OD-H (4.6 mm×250 mm，5 μm) 流動相為正己烷-異丙醇-三氟乙酸=100∶1.8∶0.1；流速為1 ml/min；柱溫為30 ℃；進樣量為20 μl。

1.2.2血漿樣品處理 取血漿樣品100 μl加入內標100 μg/ml水楊酸20 μl和甲醇20 μl，渦旋10 s，加入4 mol/ml HCL 100 μl，渦旋30 s。再加入提取劑乙醚3 ml 渦旋2 min，以3500 r/min 離心10 min，取上層有機相，40 ℃水浴空氣流吹干后加入流動相100 μl復溶，渦旋1 min，以 3500 r/min離心3 min，取上清液20 μl。

1.3給藥方法與樣品采集將9只大鼠隨機分為3組，每組3只。實驗前禁食12 h，不禁水。分別灌胃給予布洛芬混懸劑低、中、高三個劑量組，劑量分別為13.6、27.0、54.5 mg/kg。三組大鼠均于給藥前(0 h)和給藥后 0.083、0.167、0.333、0.5、0.667、1、2、4、5、6 h頸動脈采血，分離血漿，-20 ℃保存待測。

1.4方法學考察

1.4.1專屬性 在上述色譜條件下，血漿內源性物質不干擾左旋布洛芬、右旋布洛芬和內標水楊酸的測定。藥物峰與內標峰分離良好，保留時間分別為16.59、18.81和24.05 min，符合生物樣品的測定要求，色譜圖見圖1。

圖1 色譜圖 a：標準品；b：空白血漿；c：空白加內標；d：樣品血漿 1.左旋布洛芬 2.右旋布洛芬 3.內標

1.4.2標準曲線與定量下限 取大鼠空白血漿100 μl加入左旋和右旋布洛芬系列標準溶液20 μl得到左旋布洛芬和右旋布洛芬濃度為0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、50 μg/ml的血漿樣品按“1.2.2”項下處理。分別以左旋布洛芬和右旋布洛芬濃度為橫坐標，待測物與內標峰面積比為縱坐標，用加權最小二乘法(W=1/χ2)進行線性回歸，得左旋布洛芬標準曲線方程為Y=0.2664X-0.0221(r=0.9996)，右旋布洛芬的標準曲線方程為Y=0.2569X-0.0193(r=0.9992)，左旋布洛芬和右旋布洛芬分別在0.3125～50 μg/ml內線性良好，定量下限均為0.3125 μg/ml。

1.4.3精密度和準確度 取大鼠空白血漿，精密配制低、中、高濃度分別為0.3125、5、50 μg/ml的質控樣品，按“1.2.2”項下操作，每個濃度平行6份樣本分析，連續(xù)測定3天，計算精密度和準確度，結果見表1。

1.4.4提取回收率 取大鼠空白血漿，精密配制低、中、高濃度分別為0.3125、5、50 μg/ml的質控樣品，按“1.2.2”項下操作，另取與質控樣品同濃度同體積的標液揮干，加同體積流動相配制相應濃度的標準溶液，進樣，記錄其峰面積，兩者的比值即為提取回收率，見表1。

表1 左旋布洛芬、右旋布洛芬精密度與回收率(n=6)

1.4.5穩(wěn)定性 取大鼠空白血漿，配制低、中、高濃度分別為0.3125、5、50 μg/ml的質控樣品，按“血漿樣品處理”項下操作，左旋布洛芬于-20 ℃保存到第14天的測定值與第0天的測定值相比，偏差分別為4.89%、4.28%、2.60%；第14天測定值的相對標準偏差RSD分別為4.27%、2.36%、1.61%；右旋布洛芬于-20 ℃保存到第14天的測定值與第0天的測定值相比，偏差分別為4.83%、4.43%、1.90%；第14天測定值的RSD分別為4.36%、2.25%、1.92%；表明血漿中布洛芬的左旋體和右旋體在上述條件下穩(wěn)定性良好，滿足實驗要求。低、中、高三個濃度的左旋血漿樣品凍融3次后測定值與未凍融測定值相比，偏差分別為7.30%、1.45%、2.38%；凍融3次后測定值的相對標準偏差RSD分別為4.16%、4.19%、4.52%；右旋布洛芬血漿樣品凍融3次后測定值與未凍融測定值相比，偏差分別為2.06%、5.94%、6.58%；凍融3次后測定值的RSD分別為3.80%、2.00%、3.36%；說明血漿樣品凍融3次內穩(wěn)定性良好。

1.4.6稀釋可靠性 制備左/右旋布洛芬濃度為80 μg/ml和100 μg/ml的標準血漿樣品，用空白血漿稀釋1倍后進行測定，考察稀釋效應：結果顯示，稀釋1倍后測定結果乘以稀釋倍數所得計算值，與標識濃度相比，左旋布洛芬的精密度相對標準偏差RSD分別為3.15%、2.63%。右旋布洛芬的精密度相對標準偏差RSD分別為3.85%、2.67%。表明對血漿樣品進行稀釋后分析，校正計算的結果能夠準確反映超出曲線范圍的藥物濃度。

1.5統(tǒng)計學方法采用DAS 2.1.1軟件計算藥動學參數，采用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計學分析，結果以均值±標準差表示，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計。P< 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1血藥濃度-時間曲線大鼠灌胃分別給予左旋及右旋布洛芬低、中、高三個劑量后體內濃度平均藥-時曲線，見圖2。

圖2 不同劑量布洛芬大鼠體內濃度平均藥-時曲線 (n=3) a：左旋布洛芬；b：右旋布洛芬

2.2藥代動力學參數大鼠灌胃分別給予左旋及右旋布洛芬13.6、27.0、54.5 mg/kg低、中、高三個劑量后的主要藥動學參數見表2。右旋布洛芬的t1/2、Tmax較左旋布洛芬長，其Cmax、AUC均遠遠大于左旋布洛芬的Cmax和AUC。

表2 左旋布洛芬和右旋布洛芬的主要藥動學參數(n = 3)

3 討論

由于手性化合物理化性質幾乎完全相同，所以對其分離難度也較大。但隨著現(xiàn)代分析技術的不斷進步，已經可以對手性異構體進行分離分析[6]。這使的對手性藥物的立體選擇性藥物代謝動力學的研究成為可能，對深入研究手性藥物的藥理和毒理作用具有重大意義[7]。之前文獻報道過布洛芬異構體分別的體內血藥濃度研究[8]，但沒有對布洛芬的左旋體和右旋體分別進行藥代動力學特征的研究。本文首次分別對左旋和右旋布洛芬3個劑量組的主要藥動學參數Cmax、AUC0-∞及AUC0-t與劑量進行線性回歸，得到左旋布洛芬主要藥動學參數的回歸方程分別為Cmax= 0.9965X-3.179，R2= 0.8965；AUC0-∞= 1.1919 X-5.2243，R2= 0.9359；AUC0-t= 1.094 X-4.3405，R2=0.9321；右旋布洛芬主要藥動學參數的回歸方程分別為Cmax= 1.3525 X +8.006，R2= 0.9771；AUC0-∞= 5.9887 X +20.069，R2= 0.9459；AUC0-t= 4.1612 X +25.895，R2= 0.9589；左旋和右旋布洛芬的t1/2在不同劑量組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)。綜上，左旋和右旋布洛芬大鼠體內過程均具有一定的線性動力學特征。

比較兩種異構體三個劑量組在體內的主要藥動學參數，可以得到如下結果：右旋布洛芬的達峰時間較左旋布洛芬長，其Cmax、AUC均遠遠大于左旋布洛芬的Cmax和AUC；同時，右旋布洛芬半衰期較左旋布洛芬長，結果可重復。表明右旋布洛芬在體內的吸收較左旋布洛芬長，消除更慢，說明其被生物體吸收更完全。從臨床需要持續(xù)發(fā)揮降溫作用的效果來講，右旋布洛芬具有開發(fā)利用的價值。至于藥效學與不良反應的研究結果，將另文討論。

關于內標的選擇，曾先后選擇吲哚美辛、酮洛芬[9]，但由于吲哚美辛的其出峰時間與右旋布洛芬的出峰時間相重疊，而酮洛芬自身出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象，分析其原因可能是因為酮洛芬也具有對映體的結構，通過手性柱而得到分離。因此，最后選擇的水楊酸為內標，藥物峰與內標峰分離良好，符合生物樣品的測定要求。

關于血漿樣品處理，曾采用環(huán)己烷、正己烷與正己烷-異丙醇(95：5)等不同溶劑萃取[10]，但因內標水楊酸的萃取回收率不穩(wěn)定，而改為乙醚，即可滿足試驗要求。

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Pharmacokineticsofchiralibuprofeninrats

ZENGWen-xue1，ZHOUChun-yang1，HELin2

(1.NorthSichuanMedicalCollege，Nanchong637100，Sichuan，China；2.SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople’sHospital，Chengdu610072，China)

HELin

ObjectiveTo study the pharmacokinetic characteristics of chiral ibuprofen in rats.MethodsNine SD rats were randomly divided into three groups with low，middle and high dose，3 in each group.The animals

gavages of 13.6，27 and 54.5 mg/kg ibuprofen suspension，respectively.The concentrations of S-and R-ibuprofen were determined by an established HPLC method and their pharmacokinetic parameters were calculated.ResultsThe pharmacokinetic parameters of R-ibuprofen in the three groups were as follow： Cmax=(15.23 ± 2.15)，(18.23 ± 2.54)and(57.58 ± 5.94) μg/ml，respectively；AUC0-t=(15.23 ± 2.15)，(18.23 ± 2.54)and(57.58 ± 5.94)L/(kg·h)，respectively and CLz =(0.86 ± 0.11)，(1.39 ± 0.12)and(0.88 ± 0.10)L/(kg·h)，respectively.The pharmacokinetic parameters of S-ibuprofen were as follow： Cmax=(29.69 ± 2.55)，(39.63 ± 2.50)and (83.32 ± 9.27) μg/mL，respectively；AUC0-t=(96.17 ± 13.42)，(117.90 ± 18.19)and(259.35±52.24)L/(kg·h)，respectively and CLz =(0.11 ± 0.03)，(0.19 ± 0.05)and (0.16 ± 0.03)L/(kg· h)，respectively.ConclusionThere are somewhat linear characteristics of the pharmacokinetic parameters of Cmax，AUC0-tand AUC0-∞for both R-ibuprofen and S-ibuprofen in rats.

Ibuprofen；Pharmacokinetic；Chiral drug

何 林

R91

A

1672-6170(2017)05-0023-04

2017-01-09；

2017-05-31)