• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    廣西柳樹(shù)桑寄生內(nèi)生真菌的分離鑒定與抗腫瘤活性菌株篩選

    2017-05-30 02:57:26龔斌巫鑫韋婷廖日權(quán)蘇本偉宋靜靜江國(guó)煥朱開(kāi)昕
    廣西植物 2017年5期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)生真菌抗腫瘤桑寄生

    龔斌 巫鑫 韋婷 廖日權(quán) 蘇本偉 宋靜靜 江國(guó)煥 朱開(kāi)昕

    摘要: 該研究從廣西欽州市采集健康的柳樹(shù)桑寄生的根、莖和葉中分離并純化內(nèi)生真菌,對(duì)真菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定,提取內(nèi)生真菌的DNA,采用真菌ITS序列對(duì)內(nèi)生真菌進(jìn)行分子鑒定。利用A549和H460細(xì)胞作為抗腫瘤活性指示細(xì)胞,采用MTT法測(cè)定真菌乙酸乙酯提取物的抗腫瘤活性。經(jīng)過(guò)初步分離分析,從柳樹(shù)桑寄生中純化出27株內(nèi)生真菌,經(jīng)鑒定它們分別屬于7個(gè)目9個(gè)屬15個(gè)種。擬盤(pán)多毛孢屬和間座殼屬為優(yōu)勢(shì)屬,其中擬盤(pán)多毛孢屬全部定植于寄生根;其次為新殼梭孢屬、擬莖點(diǎn)霉屬和球座菌屬,各分離到3株;其他包括青霉屬、鐮刀菌屬、炭疽菌屬和派倫霉屬,各分離到1株??鼓[瘤活性研究表明,有一株與Pestalotiopsis protearum的ITS序列相似性達(dá)100%的擬盤(pán)多毛孢屬菌株Gen24表現(xiàn)有抑制腫瘤細(xì)胞A549和H460生長(zhǎng)的特性,在真菌乙酸乙酯浸提物濃度為800 μg·mL1時(shí),對(duì)A549細(xì)胞的抑制率達(dá)到了56.92%,對(duì)H460細(xì)胞的抑制率達(dá)到了70.11%。該研究結(jié)果表明廣西柳樹(shù)桑寄生內(nèi)生真菌較豐富,在寄主中的分布表現(xiàn)了一定的組織特異性,而且還存在一些具有抗腫瘤活性的菌株及其活性物質(zhì)可供進(jìn)一步深入研究。

    關(guān)鍵詞: 柳樹(shù), 桑寄生, 內(nèi)生真菌, 擬盤(pán)多毛孢菌, 抗腫瘤

    中圖分類(lèi)號(hào): Q946

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A

    文章編號(hào): 10003142(2017)05063408

    Abstract: Taxilli herba, the branches with leaves of T. chinensis (DC.) Danser, is a traditionally used Chinese medicine. T. herba has been used to cure powerless bones and tendons, cancer, virus infection, rheumatic arthralgia and so on. However, the endophytic fungi of T. herba has never been studied previously. In this article, the diversity of endophytic fungi in T. herba from Salix babylonica and their antitumor activity were researched. Endophytic fungi were isolated and purified from healthy stems, leaves and roots of Taxilli herba from Salix babylonica in Qinzhou and Guangxi, China. They were identified by morphological characterization firstly, and then the DNA of endophytes was extracted and subjected to ITS sequence analysis. The antitumor activity of ethyl acetate extracts from eight endophytic fungi was tested by MTT method using cancer cell A549 and H460. After preliminary separation, 27 strains of endophytes were isolated from Taxilli herba, and they belong to seven orders, nine genera and fifteen species respectively. Two strains, jin2 and jin30, share sequence max identity of ≤97% with available ITS sequences in NCBI database, and they formed a independent clade in Phylogenetic tree of ITSrDNA sequences of existing fungi. Therefore, jin2 and jin30 maybe identified as novel species. Pestalotiopsis and Diaporthe were the preponderant genera [accounting for colonization frequencies (CF) 25.9% for each], and all the strains of Pestalotiopsis were isolated from roots. The isolating frequency of Neofusicoccum, Phomopsis and Guignardia were fewer, with three strains for each respectively. Other rare isolated fungi were Penicillium, Fusarium, Colletotrichum and Peyronellaea, with one strain for each. Tissue specificity of endophytes was also observed. For example, Penicillium sp. and Fusarium sp. colonized roots exclusively, Diaporthe arecae, Colletotrichum sp. can only colonized stems, and Guignardia sp. and Peyronellaea sp. only colonized leaves. The antitumor activity showed that one strain, which most related to Pestalotiopsis protearum with ITS sequence similarity at 100%, inhibited the growth of A549 and H460. The ethyl acetate extracts from fungus Gen24 inhibited the growth of A549 and H460 cell at concentration of 800 μg·mL1, with the inhibiting rate to A549 reached 56.92%, and the inhibiting rate to H460 reached 70.11%. Our research showed the diversity of endophytes from Taxilli herba, and the antitumor endophytes and compounds can be further studied.

    Key words: Salix babylonica, Taxilli Herba, endophytic fungi, Pestalotiopsis, antitumor

    桑寄生藥材為桑寄生科鈍果寄生屬?gòu)V寄生(Taxillus chinensis)的干燥帶葉莖枝,為中國(guó)傳統(tǒng)藥材,有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎元的功能(中國(guó)藥典,2010)。桑寄生具有廣寄性特點(diǎn),可寄生150多種植物(朱開(kāi)昕等,2010),其中柳樹(shù)是其常見(jiàn)寄主之一。最近對(duì)不同寄主的桑寄生研究發(fā)現(xiàn),紅花桑寄生總黃酮提取物有抗白血病功效(肖義軍等,2008),從桑寄生中提取的槲皮素 、槲皮苷有抗病毒功效(Choi et al, 2009),而柳樹(shù)寄主的桑寄生能累積寄主的水楊苷成分(Lu et al, 2012),增強(qiáng)其祛風(fēng)濕功效等,這使桑寄生受到越來(lái)越多的關(guān)注。

    植物內(nèi)生真菌是指在某一時(shí)期生活在健康植物體內(nèi)但對(duì)寄主植物組織并不引起明顯侵染的真菌。目前研究過(guò)的植物中均發(fā)現(xiàn)有植物內(nèi)生菌的存在,根據(jù)專(zhuān)家保守估計(jì),自然界的內(nèi)生真菌物種至少有150萬(wàn)種(Hawksworth, 1991)。然而,已被人類(lèi)描述的內(nèi)生真菌不到 7 萬(wàn)種(Zhang et al, 2015; Rodriguez et al, 2009; Xie et al, 2016)。Stierle et al(1993)首次在Science雜志報(bào)道從短葉紅豆杉(Taxus breviflia)中分離得到一株能合成抗癌物質(zhì)紫杉醇的內(nèi)生真菌,藥用植物內(nèi)生真菌的研究成為一個(gè)研究熱點(diǎn)。內(nèi)生菌不僅具有潛在的工業(yè)化應(yīng)用價(jià)值,而且也可能對(duì)藥用植物藥效的產(chǎn)生具有重要作用,如Yuan et al(2016)發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌孔孢霉菌株(Gilmaniella sp. AL12)可以促進(jìn)蒼術(shù)中類(lèi)倍半萜化合物的積累,Zhou et al(2015)報(bào)道蒼術(shù)中內(nèi)生細(xì)菌可以激發(fā)活性氧基團(tuán),從而增加類(lèi)倍半萜化合物的含量和多樣性(Zhou et al, 2015)。

    桑寄生在不同的寄主具有不同的藥用價(jià)值,那么以不同植物為寄主的桑寄生其內(nèi)生真菌種群如何,這些內(nèi)生真菌是否也具有一定藥效,與桑寄生的藥效有何聯(lián)系?弄清楚這些問(wèn)題有利于我們探討桑寄生內(nèi)生真菌對(duì)其藥效產(chǎn)生的影響,具有較重要的理論研究意義。本研究以欽州市采集的柳樹(shù)桑寄生植物為材料,對(duì)其內(nèi)生真菌進(jìn)行分離鑒定,并對(duì)其抗腫瘤活性菌株進(jìn)行篩選,為進(jìn)一步探明桑寄生植物內(nèi)生真菌資源多樣性及藥用價(jià)值提供理論依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1 材料

    采集位于廣西欽州市市內(nèi)、欽州港區(qū)、欽北郊區(qū)人工種植的柳樹(shù)上生長(zhǎng)的桑寄生,采集地直線距離5 km以上,共采集10株柳樹(shù)桑寄生的根、莖、葉,經(jīng)過(guò)欽州市中醫(yī)院中醫(yī)藥研究所有關(guān)專(zhuān)家的鑒定,為桑寄生科鈍果寄生屬?gòu)V寄生。

    PDA(Potato Dextrose Agar)培養(yǎng)基:取去皮馬鈴薯200 g,加適量水煮沸20~30 min,2層紗布過(guò)濾獲得濾液,加入葡萄糖20 g和瓊脂15 g,補(bǔ)加純化水到1 000 mL,分裝三角瓶120 ℃滅菌30 min。

    1.2 柳樹(shù)寄生內(nèi)生真菌的分離純化

    將柳樹(shù)寄生樣品的根、莖、葉用自來(lái)水沖洗掉泥土,然后在無(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行嚴(yán)格的表面消毒程序:依次浸泡在75%酒精0.5 min,3%~5%有效氯的次氯酸鈉溶液3 min,75%的酒精0.5 min,然后再用無(wú)菌水沖洗3遍,在超凈操作臺(tái)中晾干,備用。將晾干后的樣品,在超凈臺(tái)中將其剪成約0.5 cm × 0.5 cm 左右小塊。將剪成的小塊鋪于PDA平板上。28 ℃倒置培養(yǎng)2~3周。平板需每天檢查真菌的生長(zhǎng)情況。一旦發(fā)現(xiàn)有菌絲從組織小塊長(zhǎng)出,挑出菌絲尖端,馬上將其轉(zhuǎn)接到另一新的平板上,經(jīng)幾次純化后接種于PDA斜面,并保存于本實(shí)驗(yàn)室4~8 ℃冰箱。

    1.3 菌株的形態(tài)學(xué)鑒定

    在各菌株生長(zhǎng)的最佳時(shí)期,初步觀察菌落的形態(tài)、顏色、大小、生長(zhǎng)情況、菌落、菌絲體和孢子的形態(tài)特征,對(duì)照《真菌鑒定手冊(cè)》進(jìn)行初步鑒定(魏景超等,1979)。

    1.4 內(nèi)生真菌DNA的提取

    將分離得到的內(nèi)生真菌接種斜面培養(yǎng)基,經(jīng)活化后分別接種至5 mL不加瓊脂的PDA培養(yǎng)基中,28 ℃搖床上以150 r·min1 的轉(zhuǎn)速培養(yǎng)6~7 d,12 000 r·min1離心5 min,取200 mg 濕的培養(yǎng)菌絲,加入液氮研磨菌體至勻漿狀,采用真菌DNA提取試劑盒(美國(guó),omega)提取真菌的總DNA,具體過(guò)程按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

    1.5 內(nèi)生真菌ITS rRNA 序列分析

    使用通用引物ITS1/ITS4(ITS1:CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA;ITS4:TCCTCCGCTTATTGATATGC)擴(kuò)增真菌ITS序列(Takamatsu et al, 2001),PCR產(chǎn)物直接送南京金斯瑞生物技術(shù)服務(wù)有限公司完成。采用Blastn程序?qū)y(cè)序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性檢索。調(diào)出與該序列相似性較高的核酸序列,采用Mega 5.0軟件包進(jìn)行多重序列匹配排列和聚類(lèi)分析,形成一個(gè)多重序列匹配排列陣。采用鄰接法(Neighbor Joining Method)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

    1.6 抗腫瘤活性檢測(cè)

    將真菌接種到200 mL液體PDA培養(yǎng)基中,28 ℃ 150 r·min1 條件下進(jìn)行震蕩培養(yǎng)7~10 d,將得到的菌絲體和發(fā)酵液進(jìn)行干燥,干燥的菌絲體和發(fā)酵液稱(chēng)重后用乙酸乙酯進(jìn)行浸提以獲得浸提液。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549和H460細(xì)胞,采用RPMI 1640培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度到104 個(gè)·mL1,每孔100 μL加到96孔板中,置于37 ℃ 5%濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,吸出培養(yǎng)基,加入不同濃度的真菌提取液的細(xì)胞培養(yǎng)基,提取物濃度依次為800、200、50 μg·mL1;陽(yáng)性對(duì)照組加入25、6.25、1.5和0.4 μmol·L1的阿霉素;陰性對(duì)照組為每孔加入與提取物同體積乙酸乙酯的細(xì)胞培養(yǎng)基100 μL,每個(gè)濃度做3個(gè)復(fù)孔,同時(shí)做三塊板。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后用MTT法進(jìn)行細(xì)胞染色,在490 nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔吸光度值,并計(jì)算出細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。

    2結(jié)果與分析

    2.1 寄主為柳樹(shù)的桑寄生內(nèi)生真菌的分離

    從寄主為柳樹(shù)的桑寄生根、莖、葉表面消毒組織塊(根組織塊247,葉組織274,莖組織221)分離純化到27株內(nèi)生真菌,這27株菌有的在PDA培養(yǎng)基上能夠產(chǎn)孢,有的需要特殊條件誘導(dǎo)產(chǎn)孢。根據(jù)菌株的菌落(圖1)、菌絲體和孢子的形態(tài)特征,對(duì)照《真菌鑒定手冊(cè)》進(jìn)行初步鑒定,這27株菌屬于9個(gè)屬,其中根部分離到5個(gè)屬共13株菌,占分離總量的48.15%;莖部分離到4個(gè)屬共8株菌,占分離總量的29.63%;葉中分離到4個(gè)屬共6株菌,占分離總量的22.22%(表1)。

    2.2 內(nèi)生真菌的分子生物學(xué)鑒定

    采用 ITS 特異性引物對(duì)27株內(nèi)生真菌DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對(duì)得到的序列進(jìn)行Blastn分析,結(jié)果表明所有的27株內(nèi)生真菌都屬于子囊菌門(mén),分屬于7個(gè)目9個(gè)屬;27株菌種有26株與已有的真菌ITS序列相似性在96%以上,另外有一株jin2與GenBank中已有的序列相似對(duì)最高的只有93%,暫時(shí)定名為Diaporthe sp.(表 2)。

    基于以柳樹(shù)為寄主的桑寄生分離的27株內(nèi)生真菌的ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)(圖 2),結(jié)果表明27株菌屬于8個(gè)分支(bootstrap值為100%),jin22、gen17、gen27、jin32、gen30、ye11、jin33、jin35、ye6都屬于間座殼目Diaporthales,與Diaporthe arecae、D. per

    seae、D. pascoei、D.phaseolorum、Phomopsis liquidambari構(gòu)成一個(gè)支持率為100%的分支;gen2屬于肉座菌目Hypocreales,與Fusarium decemcellulare在一個(gè)分支(支持率為100%);gen6、gen15、gen16、gen4、gen14、gen24、gen26都屬于炭角菌目Xylariales,與Pestalotiopsis neglecta、P. disseminata、P. heterocornis、P. microspora等菌株構(gòu)成一個(gè)支持率為100%的分支;Gen11屬于散囊菌目Eurotiales,與Penicillium oxalicum構(gòu)成一個(gè)分支(支持率為100%);Ye2屬于格孢菌Pleosporales,與Peyronellaea glomerata聚類(lèi)在一個(gè)支持率為100%的分支;jin24、jin3、gen13、ye13、ye7、ye1對(duì)屬于葡萄座腔菌目Botryosphaeriales,其中jin24、jin3和gen13與Neofusicoccum parvum聚類(lèi)在一個(gè)分支(支持率為100%);ye13、ye7和ye1與Guignardia mangiferae和Phyllosticta capitalensis的親緣關(guān)系比較近。在所有的菌株中,從系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)看jin2和jin30形成了一個(gè)獨(dú)立的分支,分類(lèi)地位還不能確定,可能是新種,這有待進(jìn)一步研究。

    2.3 內(nèi)生真菌在寄主為柳樹(shù)的桑寄生組織中的分布

    在所有分離到的菌株中,擬盤(pán)多毛孢屬(Pestalotiopsis)和間座殼屬(Diaporthe)為優(yōu)勢(shì)屬,擬盤(pán)多毛孢屬分離到7株菌,分離率為25.9%,全部定植于以柳樹(shù)為寄主的桑寄生的寄生根;間座殼屬分離到7株,分離率為25.9%,廣泛分布于根、莖和葉組織。其次為新殼梭孢屬(Neofusicoccum)、擬莖點(diǎn)霉屬(Phomopsis)和球座菌屬(Guignardia),均分離到3株;其它包括青霉屬(Penicillium)、鐮刀菌屬(Fusarium)、炭疽菌屬(Colletotrichum)和派倫霉屬(Peyronellaea),各分離到1株(表3)。

    寄生根分離的內(nèi)生真菌還包括青霉屬、新殼梭孢屬、間座殼屬、鐮刀菌屬真菌,其中青霉屬和鐮刀菌屬為特異性寄生于根;莖部寄生的內(nèi)生真菌包括新殼梭孢屬、間座殼屬、鐮刀菌屬、炭疽菌屬和擬莖點(diǎn)霉屬, 其中間座殼屬的Diaporthe arecae和炭疽菌

    屬為莖內(nèi)專(zhuān)性寄生;葉內(nèi)寄生的真菌包括間座殼屬、擬莖點(diǎn)霉屬、球座菌屬、派倫霉屬,其中球座菌屬和派倫霉屬為葉內(nèi)專(zhuān)性寄生(表3)。

    2.4 抗腫瘤活性

    挑選擬盤(pán)多毛孢屬5個(gè)種的代表菌株,以及新殼梭孢屬、擬莖點(diǎn)霉屬、派倫霉屬共8株菌進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng),將菌絲體和發(fā)酵液在干燥箱中干燥后用乙酸乙酯進(jìn)行浸提。采用浸提物對(duì)A549和H460細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn),以 A549和H460細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率表示抗腫瘤活性的大小。結(jié)果表明在檢測(cè)的8株真菌粗提物中,有一株擬盤(pán)多毛孢屬菌株Gen24表現(xiàn)有抑制A549和H460細(xì)胞生長(zhǎng)的特性,在浸提物濃度為800 μg·mL1時(shí),對(duì)A549細(xì)胞的抑制率達(dá)到了56.92%,而對(duì)H460細(xì)胞的抑制率達(dá)到了70.11%,抗腫瘤活性明顯高于其他菌株,抑制A549細(xì)胞活性與陽(yáng)性對(duì)照阿霉素在6.25 μmol·L1時(shí)活性相當(dāng)

    (圖 3),抑制H460細(xì)胞活性與陽(yáng)性對(duì)照阿霉素在25 μmol·L1時(shí)活性相當(dāng)(圖 4),而實(shí)驗(yàn)中添加有相應(yīng)乙酸乙酯提取溶劑的細(xì)胞培養(yǎng)液陰性對(duì)照對(duì)A549細(xì)胞無(wú)抑制(結(jié)果未顯示)。

    3討論與結(jié)論

    柳樹(shù)桑寄生是一種重要的中藥材,本研究首次報(bào)道了從廣西欽州市柳樹(shù)桑寄生中分離到27株共8個(gè)屬15個(gè)種的內(nèi)生真菌,并測(cè)定了內(nèi)生真菌的抗腫瘤活性,為開(kāi)展內(nèi)生真菌在柳樹(shù)桑寄生藥用活性成分的生物合成機(jī)制等奠定了基礎(chǔ)。

    本研究發(fā)現(xiàn)在柳樹(shù)桑寄生的寄生根中分離到5個(gè)屬10個(gè)種共13株內(nèi)生真菌,分離率為48.15%,其內(nèi)生真菌分離率、多樣性和分離到的絕對(duì)數(shù)量明顯高于莖和葉,而柳樹(shù)桑寄生的寄生根對(duì)于其從宿主獲取營(yíng)養(yǎng)成分非常重要,寄生根的內(nèi)生真菌多是否意味著內(nèi)生真菌可以幫助柳樹(shù)桑寄生從宿主獲取營(yíng)養(yǎng),或者從宿主吸收次級(jí)代謝產(chǎn)物并進(jìn)行轉(zhuǎn)化,從而形成柳樹(shù)寄生的活性成分還有待進(jìn)一步研究。

    從根部分離的內(nèi)生真菌中,擬盤(pán)多毛孢屬有5個(gè)種共7株,從種類(lèi)和數(shù)量上都占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),并且是專(zhuān)性寄生于根部,這提示擬盤(pán)多毛孢可能對(duì)柳樹(shù)桑寄生吸收宿主的營(yíng)養(yǎng)或是次生代謝產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化中可能具有重要意義。從本研究中,我們得到一株具有明顯抑制腫瘤細(xì)胞A549 和H460的菌株Gen24,根據(jù)其ITS基因序列鑒定為擬盤(pán)多毛孢,與Pestalotiopsis protearum ITS序列相似性為100%。據(jù)報(bào)道,擬盤(pán)多毛孢是一種具有重要藥用價(jià)值的真菌,可以利用其提取到紫杉醇等多種藥物或前體物質(zhì)(Vennila et al, 2011; Gu et al, 2015; Xu et al, 2014),具有抗真菌(Li et al, 2008)、抗腫瘤(Liu et al, 2009)等活性。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能夠產(chǎn)生紫杉醇等抗腫瘤活性物質(zhì)的擬盤(pán)多毛孢包括Pestalotiopsis microspora (Strobel et al, 1996)、Pestalotiopsis breviseta (Kathiravan et al, 2010)、Pestalotiopsis pauciseta (Vennila et al, 2011)、Pestalotiopsis malicola (Bi et al, 2013)、Pestalotiopsis hainanensis (Gu et al, 2015)等,而有關(guān)Pestalotiopsis protearum的研究還非常少,目前未發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤活性的相關(guān)報(bào)道。

    本研究從柳樹(shù)桑寄生中分離了內(nèi)生真菌,并對(duì)內(nèi)生真菌進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,并發(fā)現(xiàn)

    了一株具有抗腫瘤活性的內(nèi)生真菌菌株,在后續(xù)研究中我們將研究?jī)?nèi)生真菌的活性物質(zhì),并探討其在柳樹(shù)桑寄生次生代謝物轉(zhuǎn)化中的意義。

    參考文獻(xiàn):

    BI J, JI Y, PAN J, et al, 2013. A new taxolproducing fungus (Pestalotiopsis malicola) and evidence for taxol as a transient product in the culture [J]. Afr J Biotechnol, 10(34): 6647-6654.

    Chinese Pharmacopoeia Commission, 2010. Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China(Vol. I) [S]. The medicine science and technology press of China: 280. [國(guó)家藥典委員會(huì)編, 2010. 中華人民共國(guó)藥典(一部) [S].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社: 280.]

    CHOI HJ, SONG JH,PARK KS, et al, 2009. Inhibitory effects of quercetin 3rhamnoside on influenza A virus replication [J]. Eur J Pharm Sci, 37(3): 329-333.

    GU Y, WANG Y, MA X, et al, 2015. Greater taxol yield of fungus Pestalotiopsis hainanensis from dermatitic scurf of the giant panda (Ailuropoda melanoleuca) [J]. Appl Biochem Biotechnol, 175(1): 155-165.

    HAWKSWORTH DL, 1991. The fungal dimension of biodiversity: magnitude, significance, and conservation [J]. Mycol Res, 95(6): 641-655.

    KATHIRAVAN G, RAMAN VS, 2010. In vitro TAXOL production, by Pestalotiopsis brevisetaa first report [J]. Fitoterapia, 81(6): 557-564.

    LI E, JIANG L, GUO L, et al, 2008. Pestalachlorides AC, antifungal metabolites from the plant endophytic fungus Pestalotiopsis adusta [J]. Bioorg Med Chem, 16(17): 7894-7899.

    LIU L, LI Y, LIU S, et al, 2009. Chloropestolide A, an antitumor metabolite with an unprecedented spiroketal skeleton from Pestalotiopsis fici [J]. Org Lett, 11(13): 2836-2839.

    LU D, SU BW, LI YH, et al, 2012. Study on salicin content correlation between Taxilli herba and their willow host plants [J]. J Med Plants Res, 6(12): 2474-2477.

    RODRIGUEZ RJ, WHITE JF, AMOLD AE, et al, 2009. Fungal endophytes: diversity and functional roles [J]. New Phytol, 182(2): 314-330.

    STIERLE A, STROBEL G, STIERLE D, 1993. Taxol and taxane production by Taxomyces andreanae, an endophytic fungus of Pacific yew [J]. Science, 260(5105): 214-216.

    STROBEL G, YANG X, SEARS J, et al, 1996. Taxol from Pestalotiopsis microspora, an endophytic fungus of Taxus wallachiana [J]. Microbiology, 142(2): 435-440.

    TAKAMATSU S, KANO Y, 2001. PCR primers useful for nucleotide sequencing of rDNA of the powdery mildew fungi [J]. Mycoscience, 42(1): 135-139.

    VENNILA R, MUTHUMARY J, 2011. Taxol from Pestalotiopsis pauciseta VM1, an endophytic fungus of Tabebuia pentaphylla [J]. Biomed Prevent Nutr, 1(1): 103-108.

    WEI JC, 1979. Fungal identification manual [M]. Shanghai: Shanghai Scientific and Technical Publishers. [魏景超, 1979. 真菌鑒定手冊(cè) [M]. 上海: 上??茖W(xué)技術(shù)出版社.]

    XIAO YJ, CHEN YZ, CHEN BH, et al, 2008. Study on cytotoxic activities on human leukemia cell line HL60 by flavonoids extracts of Scurrula parasitica from four different host trees [J]. Chin J Chin Mat Med, 33(4): 427-432. [肖義軍, 陳元仲, 陳炳華, 等, 2008. 不同寄主紅花桑寄生總黃酮提取物抗白血病細(xì)胞株 HL60 的研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 33(4): 427-432.]

    XIE XG, HUANG CY, FU WQ, et al, 2016. Potential of endophytic fungus Phomopsis liquidambari for transformation and degradation of recalcitrant pollutant sinapic acid [J]. Fungal Biol, 120(3): 402-413.

    XU J, YANG X, LIN Q, 2014. Chemistry and biology of Pestalotiopsisderived natural products [J]. Fungal Divers, 66(1): 37-68.

    YUAN J, ZHOU JY, LI X, et al, 2016. The primary mechanism of endophytic fungus Gilmaniella sp. AL12 promotion of plant growth and sesquiterpenoid accumulation in Atractylodes lancea [J]. Plant Cell Tiss Org Cult (PCTOC), 125(3): 571-584.

    ZHANG T, YAO YF, 2015. Endophytic fungal communities associated with vascular plants in the high arctic aone are highly diverse and hostplant specific [J]. PLoS ONE, 10(6): e0130051. doi:10.1371/journal.pone.0130051.

    ZHOU JY, YUAN J, LI X, et al, 2015. Endophytic bacteriumtriggered reactive oxygen species directly increase oxygenous sesquiterpenoid content and diversity in Atractylodes lancea [J]. Appl Environ Microbiol, 82(5): 1 577-1 585.

    ZHU KX, LU D, PEI HH, et al, 2010. The distribution and host of Taxilli herba in Guangxi [J]. Guangxi J Trad Chin Med, 33(2):59-61. [朱開(kāi)昕,盧棟,裴河歡,等, 2010.桑寄生在廣西的分布及其寄主狀況調(diào)查 [J]. 廣西中醫(yī)藥, 33(2):59-61.]

    猜你喜歡
    內(nèi)生真菌抗腫瘤桑寄生
    半寄生植物連載·一桑寄生
    人與自然(2019年6期)2019-07-24 13:43:02
    不同寄主桑寄生藥材對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠降壓作用的影響
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:32
    黃草烏根部?jī)?nèi)生真菌的分離與鑒定
    基于RGD序列的以整合素αvβ3為靶點(diǎn)的抗腫瘤研究進(jìn)展
    內(nèi)生真菌在中藥現(xiàn)代化中的作用
    菜豆植物凝集素對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用
    鴉膽子油劑型研究進(jìn)展
    科技視界(2016年23期)2016-11-04 23:09:15
    大蒜素臨床藥理作用的研究進(jìn)展
    茶樹(shù)內(nèi)生真菌研究進(jìn)展
    披針葉黃華中2株蠕形分生孢子內(nèi)生真菌的鑒定
    国产高清视频在线播放一区| 99久久综合精品五月天人人| 99久久99久久久精品蜜桃| 99re在线观看精品视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲片人在线观看| 久9热在线精品视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 久久人人精品亚洲av| 午夜精品久久久久久毛片777| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜免费观看网址| 国产精品久久久久久久电影 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 很黄的视频免费| 亚洲av电影在线进入| 午夜免费成人在线视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久香蕉激情| 久久久国产精品麻豆| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产成+人综合+亚洲专区| 老司机午夜十八禁免费视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 婷婷精品国产亚洲av| 国产精品国产高清国产av| 九九热线精品视视频播放| 一级a爱片免费观看的视频| av免费在线观看网站| 国产精品电影一区二区三区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲黑人精品在线| 日韩三级视频一区二区三区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产片内射在线| 国产麻豆成人av免费视频| 日本 欧美在线| 香蕉av资源在线| 12—13女人毛片做爰片一| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩三级视频一区二区三区| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美中文日本在线观看视频| 三级毛片av免费| 国产探花在线观看一区二区| 欧美成人午夜精品| 国产午夜精品久久久久久| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲熟妇熟女久久| 日韩欧美在线二视频| 日本免费a在线| 在线观看www视频免费| 色综合欧美亚洲国产小说| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品98久久久久久宅男小说| 校园春色视频在线观看| 国产精华一区二区三区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲中文字幕日韩| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 久久亚洲真实| 国产欧美日韩一区二区三| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费观看精品视频网站| 国产单亲对白刺激| 这个男人来自地球电影免费观看| 淫秽高清视频在线观看| 国产不卡一卡二| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 少妇被粗大的猛进出69影院| 中文亚洲av片在线观看爽| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 精品一区二区三区av网在线观看| av福利片在线| 麻豆av在线久日| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产一区二区在线av高清观看| 婷婷六月久久综合丁香| 日本免费一区二区三区高清不卡| 757午夜福利合集在线观看| 丁香六月欧美| 欧美久久黑人一区二区| 99热这里只有精品一区 | 99久久综合精品五月天人人| 久久亚洲真实| 狠狠狠狠99中文字幕| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美黑人欧美精品刺激| 婷婷六月久久综合丁香| 啦啦啦免费观看视频1| 日本五十路高清| 亚洲全国av大片| 好男人电影高清在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 一区二区三区高清视频在线| 日韩欧美在线二视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 嫩草影院精品99| 成人三级做爰电影| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| www.www免费av| 欧美日韩乱码在线| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲人与动物交配视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 可以在线观看毛片的网站| 国产黄片美女视频| 香蕉国产在线看| 亚洲av电影在线进入| www.999成人在线观看| 两个人免费观看高清视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 999久久久国产精品视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 午夜激情av网站| 亚洲专区字幕在线| 日韩欧美在线乱码| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 老司机午夜福利在线观看视频| 后天国语完整版免费观看| 禁无遮挡网站| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲成人国产一区在线观看| 久久这里只有精品中国| 在线视频色国产色| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产三级中文精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 12—13女人毛片做爰片一| 成人特级黄色片久久久久久久| 激情在线观看视频在线高清| 搞女人的毛片| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产免费男女视频| 成人永久免费在线观看视频| 99热这里只有是精品50| 高清在线国产一区| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产成人欧美在线观看| 成年免费大片在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 久久香蕉激情| 桃红色精品国产亚洲av| 好男人在线观看高清免费视频| 青草久久国产| videosex国产| 黄片小视频在线播放| 无遮挡黄片免费观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 999久久久精品免费观看国产| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 午夜激情av网站| 久热爱精品视频在线9| 精品福利观看| 全区人妻精品视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜两性在线视频| 国产精品国产高清国产av| av免费在线观看网站| 国产亚洲精品av在线| 亚洲午夜理论影院| 国产亚洲精品av在线| 怎么达到女性高潮| 久久久精品大字幕| 成人精品一区二区免费| 成人精品一区二区免费| 国产1区2区3区精品| 黄色毛片三级朝国网站| 精品久久久久久久久久免费视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 成人18禁在线播放| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲成人久久爱视频| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜福利在线观看吧| 国产高清有码在线观看视频 | 大型av网站在线播放| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲成人久久爱视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| cao死你这个sao货| 国产精品av久久久久免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 极品教师在线免费播放| 日韩欧美免费精品| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 黄片小视频在线播放| 欧美黑人精品巨大| 十八禁网站免费在线| av有码第一页| 国产精品爽爽va在线观看网站| av在线天堂中文字幕| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美日韩乱码在线| 日韩高清综合在线| 老司机靠b影院| 色哟哟哟哟哟哟| 91字幕亚洲| 国产精品影院久久| 午夜a级毛片| 亚洲,欧美精品.| 亚洲av美国av| 亚洲18禁久久av| 久久久久久久午夜电影| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 俄罗斯特黄特色一大片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 青草久久国产| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲精品国产一区二区精华液| 欧美大码av| 国产激情欧美一区二区| 欧美乱色亚洲激情| 中文亚洲av片在线观看爽| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产一区在线观看成人免费| 在线永久观看黄色视频| 国产91精品成人一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 床上黄色一级片| 嫩草影院精品99| 一个人免费在线观看电影 | 深夜精品福利| 国产高清视频在线观看网站| 九色成人免费人妻av| 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜福利在线观看吧| 在线观看日韩欧美| 女人被狂操c到高潮| 成人18禁在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲国产欧美网| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲欧美日韩东京热| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 午夜视频精品福利| av中文乱码字幕在线| 亚洲国产精品999在线| 丰满的人妻完整版| 国产三级黄色录像| 亚洲av熟女| 1024手机看黄色片| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲av成人精品一区久久| 黑人操中国人逼视频| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲成人久久性| 老司机在亚洲福利影院| 久久香蕉精品热| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产爱豆传媒在线观看 | 一a级毛片在线观看| 久久精品人妻少妇| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 长腿黑丝高跟| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久久久国内视频| 免费在线观看成人毛片| 日本一本二区三区精品| 超碰成人久久| 成人av一区二区三区在线看| 丁香欧美五月| 亚洲熟妇熟女久久| 我要搜黄色片| 好男人在线观看高清免费视频| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲 欧美一区二区三区| 搞女人的毛片| 国产精品亚洲一级av第二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 午夜免费观看网址| 国产亚洲欧美在线一区二区| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲一区二区三区色噜噜| 最好的美女福利视频网| 久久久国产欧美日韩av| 变态另类丝袜制服| 色播亚洲综合网| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美极品一区二区三区四区| 麻豆一二三区av精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 美女午夜性视频免费| 久久久久久国产a免费观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 怎么达到女性高潮| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线a可以看的网站| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产黄色小视频在线观看| bbb黄色大片| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产伦在线观看视频一区| 久久精品91蜜桃| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 婷婷亚洲欧美| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产成人av激情在线播放| 婷婷丁香在线五月| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲欧美激情综合另类| 两性夫妻黄色片| 又大又爽又粗| 欧美日韩乱码在线| 黄色视频不卡| 亚洲自拍偷在线| 精品免费久久久久久久清纯| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久性视频一级片| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久久国产成人免费| 亚洲av成人av| 丰满的人妻完整版| 国产精品一及| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久久国产成人精品二区| 一级毛片精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 我要搜黄色片| 热99re8久久精品国产| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 在线a可以看的网站| 久久这里只有精品中国| 欧美在线一区亚洲| www国产在线视频色| 9191精品国产免费久久| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品,欧美在线| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产成人欧美在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品一及| 日本 欧美在线| 欧美极品一区二区三区四区| 特级一级黄色大片| 久久久久久九九精品二区国产 | 免费在线观看黄色视频的| 中文在线观看免费www的网站 | АⅤ资源中文在线天堂| 毛片女人毛片| 国产精品永久免费网站| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 少妇粗大呻吟视频| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一本精品99久久精品77| 国内精品一区二区在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产午夜精品论理片| 午夜福利高清视频| 午夜免费观看网址| 人成视频在线观看免费观看| 欧美3d第一页| 看黄色毛片网站| 日韩精品青青久久久久久| 国产av不卡久久| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 两个人的视频大全免费| 日本黄大片高清| 香蕉av资源在线| 1024视频免费在线观看| e午夜精品久久久久久久| 久久久精品大字幕| 熟女电影av网| 日本 av在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 久9热在线精品视频| 色尼玛亚洲综合影院| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 啦啦啦免费观看视频1| 国产一区在线观看成人免费| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日韩高清综合在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 免费搜索国产男女视频| 亚洲精华国产精华精| 日本一二三区视频观看| 午夜免费激情av| 精品欧美国产一区二区三| tocl精华| 免费在线观看成人毛片| 99久久综合精品五月天人人| 成人三级做爰电影| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美大码av| 欧美久久黑人一区二区| 国产成+人综合+亚洲专区| 最好的美女福利视频网| 久久中文字幕人妻熟女| 性欧美人与动物交配| 成人永久免费在线观看视频| 国产野战对白在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美色视频一区免费| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 黄色视频,在线免费观看| 性欧美人与动物交配| 色老头精品视频在线观看| av欧美777| 中国美女看黄片| 两个人看的免费小视频| 成人特级黄色片久久久久久久| АⅤ资源中文在线天堂| 国产真实乱freesex| 国产熟女xx| 国产主播在线观看一区二区| 一本久久中文字幕| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品影院久久| 男女之事视频高清在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日韩中文字幕欧美一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久精品成人免费网站| xxx96com| 最好的美女福利视频网| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲国产欧美网| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 俺也久久电影网| a在线观看视频网站| 日韩大尺度精品在线看网址| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品久久视频播放| 伦理电影免费视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 九色成人免费人妻av| 欧美3d第一页| 国产精品98久久久久久宅男小说| 18禁国产床啪视频网站| 99热6这里只有精品| 色老头精品视频在线观看| 国产成年人精品一区二区| 桃色一区二区三区在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 免费观看精品视频网站| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 香蕉丝袜av| 久久国产精品人妻蜜桃| 日韩免费av在线播放| 欧美在线一区亚洲| 一级毛片精品| 男人舔女人下体高潮全视频| 最近在线观看免费完整版| 特级一级黄色大片| 99热只有精品国产| 女人被狂操c到高潮| 妹子高潮喷水视频| 亚洲七黄色美女视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩欧美精品v在线| 一级作爱视频免费观看| 不卡av一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲黑人精品在线| 国产激情欧美一区二区| 婷婷六月久久综合丁香| 无人区码免费观看不卡| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品日产1卡2卡| 少妇粗大呻吟视频| 老鸭窝网址在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产高清激情床上av| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 午夜福利免费观看在线| 精品久久久久久成人av| 久久欧美精品欧美久久欧美| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产精品一及| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 美女大奶头视频| 精品无人区乱码1区二区| 香蕉久久夜色| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 成人亚洲精品av一区二区| 大型黄色视频在线免费观看| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久香蕉精品热| 男女之事视频高清在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| aaaaa片日本免费| 亚洲精品在线美女| 人成视频在线观看免费观看| 看片在线看免费视频| 99热只有精品国产| 久久久久国产一级毛片高清牌| 波多野结衣高清无吗| 国产成人影院久久av| 欧美乱色亚洲激情| 久久久久久久午夜电影| 最新美女视频免费是黄的| 男女下面进入的视频免费午夜| 在线观看免费午夜福利视频| 全区人妻精品视频| 国产黄色小视频在线观看| 久久久久久久久中文| 在线免费观看的www视频| 亚洲avbb在线观看| 波多野结衣高清无吗| 日本一二三区视频观看| 白带黄色成豆腐渣| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久国产精品影院| 国产精品精品国产色婷婷| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 美女午夜性视频免费| aaaaa片日本免费| 12—13女人毛片做爰片一| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 手机成人av网站| 国产黄色小视频在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 精品国产美女av久久久久小说| 校园春色视频在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 黄片大片在线免费观看| 日韩精品中文字幕看吧| 国产黄a三级三级三级人| 日本三级黄在线观看| av国产免费在线观看| 国产区一区二久久| 午夜福利高清视频| 三级毛片av免费| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产黄a三级三级三级人| 一级毛片女人18水好多| 久久天堂一区二区三区四区| 国产高清videossex| av欧美777| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品久久久av美女十八| 两人在一起打扑克的视频| 最好的美女福利视频网| 国产区一区二久久| 神马国产精品三级电影在线观看 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 丁香六月欧美| 久久精品综合一区二区三区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲,欧美精品.| 日本一本二区三区精品| 在线永久观看黄色视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 村上凉子中文字幕在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 久99久视频精品免费| 97碰自拍视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲真实伦在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 少妇粗大呻吟视频| 欧美色视频一区免费| 老熟妇仑乱视频hdxx| 在线观看免费午夜福利视频| 大型黄色视频在线免费观看| 一进一出抽搐动态|