利用室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)對(duì)HBsAg ELISA檢測(cè)試劑的技術(shù)性能評(píng)價(jià)

楊麗華，張?jiān)?，彭萍，焦芳艷

(湖南省臨床檢驗(yàn)中心，湖南省第二人民醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙416007)

·質(zhì)量控制·

利用室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)對(duì)HBsAg ELISA檢測(cè)試劑的技術(shù)性能評(píng)價(jià)

楊麗華，張?jiān)?，彭萍，焦芳艷

(湖南省臨床檢驗(yàn)中心，湖南省第二人民醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙416007)

目的評(píng)價(jià)乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑的技術(shù)性能。方法統(tǒng)計(jì)分析2011年至2015年5年間湖南省HBsAg項(xiàng)目室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）的數(shù)據(jù)，評(píng)價(jià)本省實(shí)驗(yàn)室使用的HBsAg ELISA檢測(cè)試劑的基本技術(shù)性能指標(biāo)：分析敏感性、陰性符合率、陽(yáng)性符合率、室間精密度。結(jié)果七種HBsAg ELISA檢測(cè)試劑（六種國(guó)產(chǎn)試劑，一種進(jìn)口試劑）EQA數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)總體樣本陰陽(yáng)性符合率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；0.5、0.3、0.2IU/ml三個(gè)低濃度樣本的檢測(cè)符合率無(wú)明顯差異，但這三個(gè)濃度的樣本檢測(cè)符合率高于濃度為0.1IU/ml（《中國(guó)藥典》第3部（2010版批批檢HBsAg檢測(cè)靈敏度）的樣本檢測(cè)符合率，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；進(jìn)口試劑檢測(cè)符合率明顯好于其他試劑，在濃度為0.1IU/ml的樣本時(shí)尤為明顯；各種試劑檢測(cè)的S/CO值其室間精密度值差異與《中國(guó)藥典》第3部（2010版）中對(duì)精密性的要求是CV≤15%的標(biāo)準(zhǔn)相比，只有進(jìn)口試劑E7 P＞0.05無(wú)差異；其它六種國(guó)產(chǎn)試劑與之相比較，其P＜0.05，均有顯著性差異，其數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論我省當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室使用的6種ELISA國(guó)產(chǎn)主流檢測(cè)試劑基本技術(shù)性能相近，其主要差異體現(xiàn)在濃度為0.1IU/ml附近樣本的檢出符合率和精密度。進(jìn)口HBsAg ELISA試劑各個(gè)性能指標(biāo)均優(yōu)于國(guó)產(chǎn)HBsAg ELISA試劑。

HBsAg；ELISA；室間質(zhì)量評(píng)價(jià)；技術(shù)性能

HBsAg是臨床診治乙型肝炎病毒（HBV）感染應(yīng)用最多的血清檢測(cè)標(biāo)志物，該項(xiàng)目是WHO公認(rèn)的判斷HBV感染的關(guān)鍵指標(biāo)[1]。自第一批HBsAg表面抗原檢測(cè)試劑問(wèn)世至今，隨著免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)不斷發(fā)展，微粒子酶免疫化學(xué)發(fā)光，化學(xué)發(fā)光免疫分析等逐漸更多的應(yīng)用于臨床，近5年來(lái)，更多的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)趨向于比較其它方法學(xué)優(yōu)于ELISA[2-4]，但據(jù)國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心的檢驗(yàn)質(zhì)量年度報(bào)告顯示【全國(guó)臨床檢驗(yàn)?zāi)甓荣|(zhì)量報(bào)告（2013），國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心（201404，內(nèi)部資料）】，當(dāng)前我國(guó)HBsAg檢測(cè)現(xiàn)狀為ELISA檢測(cè)仍占主流。雖然ELISA方法的臨床應(yīng)用已較為成熟，但由于ELISA方法學(xué)技術(shù)的特殊性，不同廠家試劑盒的分析性能差別不一，本文參照我國(guó)EQA相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[5，6]，利用全省HBsAg檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)分析主要不同ELISA檢測(cè)試劑的基本技術(shù)性能，給同行提供該項(xiàng)目ELISA檢測(cè)試劑的應(yīng)用參考，且對(duì)國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門評(píng)審試劑生產(chǎn)及批批檢制度有補(bǔ)充作用。

1 材料與方法

1.1 資料2011年至2015年5年間湖南省HBsAg項(xiàng)目EQA的數(shù)據(jù)。

1.2 EQA樣本購(gòu)于北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司，每支0.5ml。靶值溯源至國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委（原國(guó)家衛(wèi)生部）臨床檢驗(yàn)中心（NCCL）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，編號(hào)：GBWE090038-090042。

1.3 主要HBsAg ELISA檢測(cè)試劑全省EQA系統(tǒng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)大于10家實(shí)驗(yàn)室使用的六種國(guó)內(nèi)主流試劑及一種進(jìn)口試劑。試劑編碼為：E1，E2，E3，E4，E5，E6，E7。E7為進(jìn)口ELISA檢測(cè)試劑，其他均為國(guó)產(chǎn)ELISA檢測(cè)試劑。

1.4 數(shù)據(jù)處理用北京科臨易檢公司開(kāi)發(fā)的CLInet EQA軟件進(jìn)行EQA活動(dòng)的統(tǒng)計(jì)分析，用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各種評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBsAg EQA評(píng)價(jià)不同試劑總體差異本省臨床檢驗(yàn)中心5年組織10次HBsAg EQA，每次5個(gè)批次的標(biāo)本，共計(jì)50個(gè)批次。省內(nèi)6種國(guó)內(nèi)主流HBsAg檢測(cè)試劑及1種進(jìn)口試劑共七種檢測(cè)試劑EQA統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表1：7種HBsAg檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)指標(biāo)經(jīng)單因素方差分析，陽(yáng)性符合率檢驗(yàn)F=2.052，P=0.092，說(shuō)明七種試劑檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性符合率總體差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；陰性符合率檢驗(yàn)F=1．689，P=0．161，說(shuō)明七種試劑檢測(cè)結(jié)果陰性符合率總體差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；總符合率檢驗(yàn)F=2．496，P=0．046，說(shuō)明七種試劑檢測(cè)結(jié)果總符合率總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同試劑間陽(yáng)性符合率經(jīng)單因素方差分析兩兩比較，試劑編碼為E7的試劑檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性符合率明顯高于編碼為E1、E3、E4、E6試劑組，為（P=0．043，0．007，0．007，0．014＜0．05）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他組間兩兩對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)；試劑編碼為E5的檢測(cè)試劑陽(yáng)性符合率明顯高于試劑編碼為E2、E1、E3、E6試劑組，為(P=0．049，0．049，0．049，0．049，＜0．05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其他組間兩兩對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)；試劑E7總符合率明顯高于E1、E2、E3、E4、E6試劑組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0．023，0．033，0．003，0．005，0．005＜0．05)，其他組間兩兩對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）

2．2 HBsAg EQA低值樣本檢測(cè)合格率2011年至2015年共設(shè)計(jì)低值樣本14個(gè)批次，低值濃度設(shè)計(jì)隨每年檢測(cè)統(tǒng)計(jì)合格率逐年下降，分別為0．5、03、0．2及0．1IU/ml，各個(gè)不同濃度的實(shí)驗(yàn)室合格率見(jiàn)表2。4種低值濃度樣本檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室合格率經(jīng)單因素方差分析，合格率檢驗(yàn)F=11．319，P=0．000，說(shuō)明4種低值濃度樣本檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室合格率總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同樣本濃度及格率經(jīng)單因素方差分析兩兩比較，0．2、0．3、0．5IU/ml濃度樣本合格率明顯高于0．1IU/ml組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0．000，0．000，0．000＜0．05)；其他組間兩兩對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。

2．3統(tǒng)計(jì)七種HBsAg ELISA試劑檢測(cè)低值濃度樣本的實(shí)驗(yàn)室總合格率七種試劑檢測(cè)總合格率間經(jīng)單因素方差分析，合格率檢驗(yàn)F=1．723，P=0．130，說(shuō)明七種試劑檢測(cè)合格率總體差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同試劑間總合格率經(jīng)單因素方差分析兩兩比較，試劑編碼為E7的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)合格率明顯高于E2、E3、E5、E6試劑組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0．040，0．006，0．031，0．010＜0．05)；其他組間兩兩對(duì)比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。

2．4七種HBsAg ELISA試劑檢測(cè)CV（%）差異性比較經(jīng)單因素方差分析，F(xiàn)=10．545，P＜0．05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。七種試劑兩兩比較分析，編碼為E1，E2，E3，E4，E5，E6的試劑組兩兩之間比較P值均大于0．05，其CV差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。編碼為E7的試劑組與其他6種試劑兩兩比較，P=0．000＜0．05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。七種不同試劑與臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)精密度要求CV＜15%比較，進(jìn)行單樣本t檢驗(yàn)，除編碼為E7的試劑組外，其p值均小于0．01，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。編碼為E7的試劑組其P=0．163＞0．05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 湖南省臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室2011年至2015年HBs Ag EQA評(píng)價(jià)不同試劑符合率（%）比較（x±s）

表2 低值樣本EQA活動(dòng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)合格率（%）

表3 低值不同濃度樣本不同試劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室合格率（%）比較（x±s）

3 討論

ELISA是一種固相酶免疫檢測(cè)技術(shù)，主要用S/CO比值判斷檢測(cè)結(jié)果。該檢測(cè)方法的技術(shù)性能指標(biāo)主要包括靈敏度（陽(yáng)性符合率），特異性（陰性符合率）這兩種準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)指標(biāo)和總符合率及精密度等試驗(yàn)可靠性指標(biāo)[7]。我省臨床檢驗(yàn)中心EQA活動(dòng)所使用北京科臨易檢公司開(kāi)發(fā)的CLInet EQA軟件設(shè)計(jì)的評(píng)價(jià)功能亦是囊括上述指標(biāo)，本文將評(píng)估分析如下。

表4 七種不同試劑的EQACV值（%）差別比較

表5 七種試劑與臨床免疫定性分析質(zhì)量控制批間CV＜15%的標(biāo)準(zhǔn)差異性比較(單樣本t檢驗(yàn))

表1的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示六種國(guó)產(chǎn)試劑的檢測(cè)技術(shù)性能較好，陰陽(yáng)性符合率及實(shí)驗(yàn)室總合格率相差不大。E7為進(jìn)口試劑，其基本性能參數(shù)優(yōu)于國(guó)產(chǎn)試劑，與前些年的文獻(xiàn)描述的差異不大[8，9]，說(shuō)明國(guó)產(chǎn)HBsAg ELISA檢測(cè)試劑的總體技術(shù)性能和進(jìn)口試劑相比還有很大的進(jìn)步空間。表1的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)還說(shuō)明國(guó)產(chǎn)試劑之間的基本性能技術(shù)參數(shù)之間的差異，總體優(yōu)劣體現(xiàn)為試劑編碼E5的試劑依次優(yōu)于編碼E1，E4，E2，E3，E6的試劑。

表2的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示HBsAg ELISA檢測(cè)試劑在低濃度樣本的檢出率差別。樣本濃度為0．5IU/ml的EAQ檢測(cè)合格率其逐年升高，至2013年時(shí)其檢測(cè)率合格率基本接近100%，據(jù)此一說(shuō)明隨著當(dāng)前免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展，ELISA方法檢測(cè)試劑的分析靈敏度性能不斷提高，其次說(shuō)明在該濃度范圍內(nèi)不論國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口試劑其檢出率都優(yōu)于《中國(guó)藥典》批批檢要求[10]，基本符合臨床診斷使用。表3的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示在0．2～0．5IU/ml濃度范圍內(nèi)其試劑檢測(cè)合格率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但濃度為0．1IU/ml的樣本各種不同試劑的檢測(cè)符合率相差較大。CLInet EQA軟件統(tǒng)計(jì)顯示個(gè)別試劑在濃度為0．1IU/ml時(shí)其檢測(cè)符合率不足50%。一則說(shuō)明當(dāng)前國(guó)產(chǎn)試劑的臨界值濃度范圍在0．1IU/ml左右，與我國(guó)HB-sAg ELISA檢測(cè)試劑的批批檢標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定中的最低檢出量基本一致[11]；二則我們臨床實(shí)驗(yàn)室在做HBsAg ELISA檢測(cè)試劑性能驗(yàn)證時(shí)可以借鑒此濃度；三則提示如此類試劑應(yīng)用于臨床，處于試劑盒臨界值范圍的感染者漏檢可能性極大。

《中國(guó)藥典》第3部（2010版）中對(duì)精密性的要求是CV≤15%，有學(xué)者做過(guò)國(guó)產(chǎn)HBsAg ELISA檢測(cè)試劑的專項(xiàng)抽驗(yàn)調(diào)查，其各試劑批間，同一批試劑間的精密性均能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求[9]。我省EQA統(tǒng)計(jì)的室間精密性與之相差甚遠(yuǎn)（見(jiàn)表4），理論上來(lái)講，不同試劑批間的精密性應(yīng)該和不同試劑的室間精密性均應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)相符（見(jiàn)表4、表5）。但進(jìn)口試劑的精密性CV值與《中國(guó)藥典》第3部（2010版）中對(duì)精密性的要求相符，進(jìn)一步說(shuō)明進(jìn)口HB-sAg ELISA檢測(cè)試劑的基本性能優(yōu)于國(guó)產(chǎn)試劑。

本文所統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均來(lái)自室間質(zhì)評(píng)樣本的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，不排除質(zhì)控樣品的基質(zhì)效應(yīng)，但該研究為本省區(qū)域5年來(lái)的大樣本總結(jié)，對(duì)同行在選擇、應(yīng)用HBsAg ELISA檢測(cè)試劑方面仍有一定的參考價(jià)值。針對(duì)新鮮樣品與質(zhì)控品的互通性在不同ELISA試劑的檢測(cè)結(jié)果研究不同文獻(xiàn)也鮮見(jiàn)的情況，建議同行參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[12，13]多做這方面的工作。同時(shí)希望臨床定性免疫學(xué)檢驗(yàn)重要常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求[14]能早日出臺(tái)，讓與之相關(guān)的免疫檢測(cè)質(zhì)量有標(biāo)準(zhǔn)可循，促進(jìn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的互認(rèn)工作，加強(qiáng)臨床實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)管理[15，16]，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量。

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湖南省衛(wèi)生廳課題（編號(hào)：2014-104）