陳勝玉
摘 要:采用正交試驗(yàn)法,在MS固體培養(yǎng)基上研究不同濃度蔗糖、NAA及6-BA對(duì)淡黃花百合愈傷組織增殖的影響,結(jié)果表明,愈傷組織增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+4%-5%蔗糖。
關(guān)鍵詞:淡黃花百合;愈傷組織生長(zhǎng);正交試驗(yàn)
百合屬的植物除具有極高的觀賞價(jià)值外,還具有藥用和食用價(jià)值,是我國(guó)衛(wèi)生部審批通過(guò)的首批藥食兩用植物,不僅臨床上有著廣泛的應(yīng)用,而且作為加工保健產(chǎn)品的原料也極具開(kāi)發(fā)前景。淡黃花百合是一種藥食兩用的野生種,為多年生宿根草本植物,主要產(chǎn)于貴州省務(wù)川縣,是百合開(kāi)發(fā)的重要資源。但由于近年的大量開(kāi)發(fā)和利用,導(dǎo)致野生淡黃花百合數(shù)量銳減,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。務(wù)川當(dāng)?shù)卦捎萌斯ぴ耘嗟姆椒▉?lái)解決供求問(wèn)題,但效果不甚理想。由于百合組織培養(yǎng)繁殖與傳統(tǒng)繁殖方法相比具有節(jié)省用材,繁殖速度快,病害少等優(yōu)點(diǎn),目前對(duì)百合組培快繁研究較多。因此我們想通過(guò)用組培方式來(lái)擴(kuò)繁淡黃花百合。李黛、談鋒、祝順琴對(duì)淡黃花百合的組織培養(yǎng)技術(shù)已做了一定的研究并成功地篩選出芽增殖的最佳培養(yǎng)基。本文介紹淡黃花百合愈傷組織增殖最佳培養(yǎng)基的篩選。
一、實(shí)驗(yàn)材料與方法
1.實(shí)驗(yàn)材料的獲得
淡黃花百合采自貴州務(wù)川縣野生林下。將新鮮鱗莖用自來(lái)水沖洗干凈、分瓣,取中間層鱗片在自來(lái)水下用流水沖洗30min左右,于超凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡10s左右,然后用0.1%的升汞消毒15min,再用無(wú)菌水沖洗5~10次。用嚴(yán)格滅菌的解剖工具切去鱗片的上部和下部,留下長(zhǎng)約1cm的中下部,并將其接種在pH值為5.8的MS+0.5mg/L6-BA+1mg/LNAA+3%蔗糖固體培養(yǎng)基中,每瓶接種1~2個(gè)切段,在25℃的溫度、1200lx的光照強(qiáng)度、12h/d的照光時(shí)間的條件下培養(yǎng)36天后可獲得無(wú)菌叢生芽和愈傷組織。將所得的愈傷組織接種到MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+3%蔗糖的培養(yǎng)基中擴(kuò)繁,即可得供試驗(yàn)用的材料。
2.實(shí)驗(yàn)方法
采用正交試驗(yàn)篩選愈傷組織增殖的最佳培養(yǎng)基。所用基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)采用L9(3)4正交表,NAA、6-BA、蔗糖濃度三因素三水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1,D因素為空列。
按正交表將各藥品依濃度要求配成培養(yǎng)基,每一個(gè)組合配10瓶,滅菌后在無(wú)菌條件下將愈傷組織接種到培養(yǎng)基中,每瓶接0.5cm見(jiàn)方的愈傷組織1塊,每組10個(gè)重復(fù),接種好后用電子天平稱(chēng)重并記錄。同樣在25℃的溫度、1200lx的光照強(qiáng)度、12h/d的照光時(shí)間的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)40天后再次用電子天平稱(chēng)重。用第二次稱(chēng)的重量減去第一次稱(chēng)的重量得出每瓶愈傷組織的凈增重(mg/天·gFW)。
二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
淡黃花百合愈傷組織增殖正交試驗(yàn)L9(3)4結(jié)果及直觀分析見(jiàn)表2。對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析可知6-BA濃度對(duì)淡黃花百合愈傷組織增殖的影響以0.5mg/L為最好,NAA以1mg/L為最好,蔗糖以5%為最好。
比較表2中三個(gè)因素的R值大?。篈因素的R=0.37,B因素的R=1.79,C因素的R=0.72,B因素的R值比A、C因素的R值都大。因此判定B因素是影響淡黃花百合愈傷組織增生的主要因素,而A為次要因素,具體關(guān)系是:
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論
從本次試驗(yàn)看,愈傷組織增殖較快,不易褐變。但在接種時(shí)應(yīng)嚴(yán)格取材為愈傷組織,盡可能不要取到帶芽的愈傷組織塊。研究證明:6-BA濃度的差異對(duì)淡黃花百合愈傷組織增殖的影響以0.5mg/L為最好,NAA以1mg/L為最好,蔗糖以5%為最好。三個(gè)因素對(duì)淡黃花百合愈傷組織增生影響的大小順序?yàn)椋篘AA>蔗糖>6-BA。蔗糖濃度的最佳濃度為5%,但是4%與5%對(duì)百合愈傷組織增殖的影響差異不大。從節(jié)約用材的角度考慮,蔗糖的濃度取4%~5%。故淡黃花百合愈傷組織增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+4%-5%蔗糖。
參考文獻(xiàn):
1.楊林莎,孫艷紅,方曉艷.中藥百合的研究進(jìn)展.河南中藥學(xué)刊,2002,17(1):74-75.
2.安利民,楊紅燕,李惠芝,杜勇軍,葉樹(shù)茂.利用組織培養(yǎng)對(duì)秦嶺百合屬植物的保種繁殖研究.西北植物報(bào),1996,16(5):5-7.
3.阮少寧,楊華,梁一池,劉榮忠.香水百合組織培養(yǎng)的試驗(yàn)研究.福建林學(xué)院學(xué)報(bào),2001,21(2):142-145.
4.李標(biāo),胡瓊?cè)A,何顯靜.紫紅花滇百合的組織培養(yǎng).植物生理學(xué)通訊,2002,38(2):40.
5.杭玲,蘇賓,陳麗新,蘇國(guó)秀,程湯,黃卓忠.龍芽百合組培快繁技術(shù)研究.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2001,4:183-184.
6.楊柏云,羅麗萍,蔡奇英.切花百合組織培養(yǎng)的研究.南昌大學(xué)學(xué)報(bào):理科版,2000,4:324-325.
7.王剛,杜捷,李桂英,梁萬(wàn)福,幸亨泰.蘭州百合和野百合組織培養(yǎng)及快速繁殖研究.西北師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2002,38(1):69-71.
8.李黛,談鋒,祝順琴.淡黃花百合的組織培養(yǎng).種子.
(作者單位:貴州省畢節(jié)市民族中學(xué))