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    二苯乙烯苷對慢性氟中毒致腦損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、氧化應(yīng)激的影響

    2017-02-23 14:13:29吳曉玲張貴鋒劉其禮保澤慶
    關(guān)鍵詞:腦損傷

    吳曉玲 張貴鋒 劉其禮 保澤慶

    【摘要】 目的:探討二苯乙烯苷對慢性氟中毒致腦損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、氧化應(yīng)激的影響。方法:30只大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、實驗組,每組大鼠10只。對照組大鼠給予去離子水自由飲用;模型組、實驗組大鼠給予100 mg/L NaF溶液自由飲用,連續(xù)飲用12周。實驗組給予二苯乙烯苷60 mg/(kg·d)灌胃,對照組和模型組給予等劑量生理鹽水。比較各組大鼠逃避潛伏期、游泳時間百分比、穿過原平臺次數(shù)及血漿SOD和MDA含量變化。結(jié)果:與模型組比較,實驗組大鼠逃避潛伏期縮短(P<0.05);與模型組比較,實驗組大鼠游泳時間百分比增加(P<0.05);與模型組比較,實驗組大鼠穿過原平臺次數(shù)增加(P<0.05);與模型組比較,實驗組血漿SOD含量明顯增加,MDA含量明顯降低(P<0.05)。結(jié)論:二苯乙烯苷可明顯改善慢性氟中毒致腦損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,通過降低MDA含量和提高SOD含量減輕腦損傷。

    【關(guān)鍵詞】 二苯乙烯苷; 慢性氟中毒; 腦損傷; 學(xué)習(xí)記憶能力; 氧化應(yīng)激反應(yīng)

    Stilbene Glucoside on Chronic Fluorosis Induced Brain Learning and Memory in Rats,Oxidative Stress/WU Xiao-ling,ZHANG Gui-feng,LIU Qi-li,et al.//Medical Innovation of China,2017,14(02):021-024

    【Abstract】 Objective:To investigate Stilbene Glucoside on chronic fluorosis rats with brain injury learning and memory ability of oxidative stress.Method:A total of 30 rats were randomly divided into the control group,model group and experimental group,10 rats in each group.The control group was given deionized water ad libitum,the model group and the experimental group were given 100 mg/L NaF solution free drink,continuous drinking for 12 weeks.The experimental group was given Stilbene Glycosides 60 mg/(kg·d) gavage,the control group and the model group received normal saline.The escape latency,the percentage of swimming time,through the platform of the original frequency and plasma SOD and MDA content changes of three groups were compared.Result:Compared with the model group,the escape latency of the experimental group was shorten(P<0.05).Compared with the model group,the swimming time percentage of the experimental group was increased(P<0.05).Compared with the model group,through the platform of the original frequency of the experimental group was increased(P<0.05).Compared with the model group,plasma SOD of the experimental group was significantly increased,MDA decreased significantly(P<0.05).Conclusion:Stilbene glycosides can significantly improve the chronic fluorosis induced brain learning and memory in rats,and by reducing the content of MDA and increasing SOD reduce brain damage.

    【Key words】 Stilbene Glucoside; Chronic fluorosis; Brain damage; Learning and memory; Oxidative stress

    First-authors address:Zhaoqing Medical College,Zhaoqing 526020,China

    doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2017.02.006

    氟是維持人體正常生理活動所必需的一種微量元素,氟在動物腦組織中蓄積,致使腦內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng),進(jìn)一步導(dǎo)致腦組織的過氧化損傷[1-2]。氟主要通過抑制腦組織中多種酶的活性,抑制氨基酸、蛋白質(zhì)以及核苷酸的代謝或合成,造成腦組織能量代謝、神經(jīng)遞質(zhì)及離子通道紊亂和失調(diào),最終影響腦組織的結(jié)構(gòu)和生理功能[3-6]。二苯乙烯苷是中藥何首烏的主要有效成分,具有降脂、抗氧化等作用。故而筆者本研究旨在分析二苯乙烯苷對慢性氟中毒致腦損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、氧化應(yīng)激的影響,提供一定指導(dǎo)價值?,F(xiàn)報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料 30只,SPF級健康Wista大鼠,體質(zhì)量(180±20)g,雌雄各半,由北京維通利華公司提供,合格證號為SCXK(京)2007-0001,實驗前常規(guī)飼養(yǎng)1周,室溫23~25 ℃,相對濕度40%~70%。

    1.2 主要儀器與試劑 主要儀器:7600型全自動生化分析儀(日本日立公司),精密電子天平(來自于北京賽多利斯天平有限公司),生物組織包埋機(jī)(常州市中威電子儀器有限公司),HAD-D202轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)(德國徠卡公司)。主要試劑:10%水合氯醛(購于北京鼎盛偉業(yè)生物科技公司),SOD試劑盒(購于上海拜力生物科技有限公司),MDA試劑盒(購于上海榕柏生物技術(shù)有限公司),二苯乙烯苷(購于上海士鋒生物科技有限公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 實驗分組及造模 將30只大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、實驗組,每組大鼠10只。對照組大鼠給予去離子水自由飲用;模型組、實驗組大鼠給予100 mg/L NaF溶液自由飲用,連續(xù)飲用12周。實驗組給予二苯乙烯苷60 mg/(kg·d)灌胃,對照組和模型組給予等劑量生理鹽水。

    1.3.2 血漿標(biāo)本采集 大鼠給藥12周后,采用10%水合氯醛根據(jù)3.5 mL/kg麻醉后,腹主動脈取血3 mL,將其放置于裝有枸櫞酸鈉的管中搖勻,分離血漿,置于-20 ℃下保存待測。

    1.3.3 水迷宮試驗 水迷宮為高50 cm、直徑120 cm的一個圓形水池,分為4個象限,控制水池中水溫溫度為20~23 ℃。將直徑為12 cm的一個圓形平臺于某一象限給予固定,平臺面低于水面1 cm,將大鼠于試驗前放入水中適應(yīng)環(huán)境。

    1.3.4 定位航行試驗 該試驗分別以四個象限的某一固定點為起點,平臺為終點,然后面向池壁將大鼠放入水池中,對大鼠由起點游至終點的時間進(jìn)行記錄,即逃避潛伏期,試驗允許最大逃避潛伏期為60 s,連續(xù)測試5 d,且均于固定時間進(jìn)行每次試驗,且保持試驗環(huán)境不變。

    1.3.5 空間探索試驗 將平臺撤去,于水池中任意一點將大鼠放入水中游泳,時間為120 s,并且對大鼠120 s內(nèi)在原平臺所處象限的游泳時間進(jìn)行記錄,同時對原平臺象限游泳時間占總時間的百分比進(jìn)行計算。

    1.4 觀察指標(biāo) (1)觀察各組大鼠逃避潛伏期;(2)觀察各組大鼠游泳時間百分比;(3)觀察各組大鼠穿過原平臺次數(shù);(4)觀察各組大鼠血漿SOD和MDA水平變化,取上述血漿標(biāo)本測定,硫代巴比妥酸法測定MDA,采用放射免疫法測定SOD含量。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,計量資料用(x±s)表示,多個樣本均數(shù)方差分析及均數(shù)間兩兩比較行SNK-q檢驗,若方差不齊,則通過數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后使方差齊,再進(jìn)行檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠逃避潛伏期、游泳時間百分比、穿過原平臺次數(shù)比較 與對照組比較,模型組大鼠逃避潛伏期明顯延長(P<0.05);與模型組比較,實驗組大鼠逃避潛伏期縮短(P<0.05)。與對照組比較,模型組大鼠游泳時間百分比明顯降低(P<0.05);與模型組比較,實驗組大鼠游泳時間百分比增加(P<0.05)。與對照組比較,模型組大鼠穿過原平臺次數(shù)明顯減少(P<0.05);與模型組比較,實驗組大鼠穿過原平臺次數(shù)增加(P<0.05)。見表1。

    2.2 各組大鼠血漿SOD和MDA水平比較 與對照組比較,模型組血漿SOD含量明顯降低,MDA含量明顯增加(P<0.05);與模型組比較,實驗組血漿SOD含量明顯增加,MDA含量明顯降低(P<0.05)。見表2。

    3 討論

    低劑量氟是人體必需的一種微量元素,能夠維持人體正常的生命活動,但機(jī)體長期攝入過量氟則會致使氟中毒,氟中毒是全身性疾病,能夠造成機(jī)體各系統(tǒng)廣泛的損傷,且會危害人體健康,目前流行病學(xué)調(diào)查顯示世界范圍有50個國家以上報道存在慢性地方性氟中毒[7-9]。二苯乙烯苷屬多羥基芪類化合物,具有多種生理活性,包括降血脂、抗衰老以及抑制腫瘤等。二苯乙烯苷抗氧化及降血脂作用機(jī)制可能與幾下幾方面相關(guān):(1)二苯乙烯苷可抑制TG和TC經(jīng)腸道時的吸收;(2)二苯乙烯苷能夠抑制血小板源生長因子誘導(dǎo)的小妞血管平滑肌細(xì)胞的增生;(3)二苯乙烯苷能夠抑制5-脂氧化酶產(chǎn)物羥二十碳四烯酸、抑制血栓烷以及環(huán)氧化酶產(chǎn)物的作用;(4)二苯乙烯苷能夠明顯抑制血管細(xì)胞粘附分子-1的表達(dá)[10-11]。目前,臨床上尚無有關(guān)二苯乙烯苷對慢性氟中毒致腦損傷研究。

    學(xué)習(xí)記憶是腦的高級神經(jīng)活動,其中海馬是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵腦區(qū),且是氟中毒的靶器官[12]。腦內(nèi)信息傳遞的網(wǎng)絡(luò)主要是由突觸構(gòu)成,突觸的功能、形態(tài)等均會直接影響學(xué)習(xí)記憶氟可透過血-腦屏障在腦中徐蓄積,從而影響神經(jīng)系統(tǒng)功能和神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu),且會影響腦的許多生理功能,包括學(xué)習(xí)記憶能力和智力發(fā)育。動物實驗研究結(jié)果顯示,學(xué)習(xí)記憶行為損傷是慢性氟中毒或者亞慢性氟中毒造成腦損傷的主要表現(xiàn)之一,且慢性氟中毒對大鼠深吸痛興奮性也具有一定影響,從而抑制率大鼠在新異環(huán)境中的自發(fā)活動,同時隨著染毒時間的不斷延長,這種影響也更為顯著[13-15]。本研究結(jié)果表明,與模型組比較,實驗組大鼠逃避潛伏期縮短(P<0.05);與模型組比較,實驗組大鼠游泳時間百分比增加(P<0.05);與模型組比較,實驗組大鼠穿過原平臺次數(shù)增加(P<0.05)。提示二苯乙烯苷明顯改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,但其具體作用還需后續(xù)研究進(jìn)一步驗證。

    目前,氟對腦損傷肌注主要是氟通過自由基對腦組織的脂質(zhì)過氧化損傷作用。機(jī)體攝入過量氟后,氟可干擾氧代謝,致使氧自由基生成增多,引起細(xì)胞損傷[16-17]。氟中毒時會增強(qiáng)大鼠腦組織中的氧化應(yīng)激作用,且能夠抑制谷胱甘肽過氧化物氣化酶活性,此外大鼠腦組內(nèi)脂質(zhì)對過氧化中間產(chǎn)物MDA含量增加,SOD含量降低,而MDA可交聯(lián)蛋白質(zhì)與磷脂的氨基導(dǎo)致膜的脆性增加,從而致使神經(jīng)細(xì)胞的損傷,進(jìn)一步影響腦組織的正常生理功能[18-19]。SOD是重要的一種抗氧化劑,廣泛存在于各類微生物、植物及動物中,能夠通過催化氧自由基的自身氧化還原反應(yīng),從而有效清除自由基。此外,SOD活力水平高低與炎癥、腫瘤、衰老、內(nèi)分泌及免疫等疾病密切相關(guān)[20]。MDA是反應(yīng)機(jī)體抗氧化潛能的一個重要參數(shù),其水平高低能夠直接地反應(yīng)出機(jī)體細(xì)胞受損傷的程度[21]。因此,本研究探討二苯乙烯苷對慢性氟中毒致腦損傷SOD和MDA影響具有重要研究意義。筆者本研究結(jié)構(gòu)表明,與模型組比較,實驗組血漿SOD含量明顯增加(P<0.05),MDA含量明顯降低(P<0.05)。提示二苯乙烯苷可通過低MDA含量和提高SOD含量減輕腦損傷,但其具體作用還需后續(xù)研究進(jìn)一步驗證。

    綜上所述,二苯乙烯苷可明顯改善慢性氟中毒致腦損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,通過降低MDA含量和提高SOD含量減輕腦損傷。但本研究還存在一些不足之處,觀察影響機(jī)制方面研究較少,故而還需在后續(xù)中做進(jìn)一步深入基礎(chǔ)研究,證實具體影響作用機(jī)制。

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    (收稿日期:2016-10-10) (本文編輯:程旭然)

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