關(guān)于酶聯(lián)免疫法與膠體金法應(yīng)用在乙肝表面抗原檢測中的效果

張昆英

【中圖分類號(hào)】R18.56 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-6851（2017）01-0-02

乙肝表面抗原主要是指乙肝病毒外殼蛋白，是臨床上乙肝血清標(biāo)志檢查中的一項(xiàng)主要指標(biāo)之一，其自身不存在傳染性，通常與乙肝病毒共同存在[1]。乙肝病毒的傳播，主要是通過血液傳播感染這一途徑，所以，為了有效控制血液傳播風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)血樣質(zhì)量進(jìn)行檢驗(yàn)，以確定血樣中是否存在乙肝表面抗原[2]。當(dāng)前，臨床上對(duì)乙肝表面抗原檢測通常采用酶聯(lián)免疫法與膠體金法。本文主要研究酶聯(lián)免疫法與膠體金法應(yīng)用在乙肝表面抗原檢測中的效果，并總結(jié)如下：

1.資料與方法

1.1 血樣來源

此次研究的血樣標(biāo)本，均為我院2015年12月-2016年8月期間采集的2040份體檢樣本。所有樣本均使用真空管采集，且均對(duì)每以標(biāo)本予以乙肝病毒攜帶普查，并在當(dāng)日完成所有樣本檢測。

1.2 儀器與試劑

此次研究所使用的檢測儀器均有上?？迫A生物有限公司提供的KHB ST36w 洗板機(jī)與KHB ST-360 酶標(biāo)儀，兩種述儀器皆在通過廠方嚴(yán)格校準(zhǔn)與調(diào)試之后方投入使用。同時(shí)，此次所使用的酶聯(lián)免疫法檢測試劑由上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)為20121106 20130124 20130307；膠體金法檢測試劑由艾康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)為20120719 20130201 20130407 20130711，且試劑均在有效試用范圍。

1.3 方法

分別使用酶聯(lián)免疫法與膠體金法對(duì)2040份血樣予以乙肝表面抗原檢測，對(duì)兩種檢測的結(jié)果、方法、特征進(jìn)行回顧性分析。

（1）酶聯(lián)免疫法。首先吸取20μL稀釋液滴入微孔并加入100μL的血清，使其在37℃下溫育60min，之后再將酶結(jié)合物50μL加入到反應(yīng)孔中，再溫育30min，在溫育結(jié)束后治愈洗板機(jī)進(jìn)行洗滌拍干，并加底物顯色，最后進(jìn)行終止液的加入并用酶標(biāo)儀予以比色，正確讀取吸光度值并加以計(jì)算。

（2）膠體金法。首先使用加樣器吸取新鮮血清60μL慢慢滴至試紙條加樣端，讓血清自動(dòng)通過濾膜并向檢測端移動(dòng)。之后在室溫環(huán)境下放置10min，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行觀察。

（3）結(jié)果判讀。酶聯(lián)免疫法結(jié)果判讀：若S/CO≥1時(shí)，表明檢測結(jié)果呈陽性；若S/CO<1，則表明檢測結(jié)果呈陰性。膠體金法結(jié)果判讀：若試紙條檢測線與對(duì)照線位置出現(xiàn)兩條紫紅色免疫復(fù)合物線條，表明結(jié)果呈陽性；若紫紅色免疫復(fù)合物線條只出現(xiàn)于試紙條對(duì)照線位置，則表明結(jié)果呈陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS20.0軟件處理本次數(shù)據(jù)，計(jì)量資料表示用“x±s”，計(jì)數(shù)資料用χ? 檢驗(yàn)，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)P<0.05。

2.結(jié)果

采用酶聯(lián)免疫法檢測時(shí)，檢測出陽性血樣標(biāo)本有186份，占總數(shù)的9.11%；而采用膠體金法檢測時(shí)，檢測出陽性血樣標(biāo)本179份，占總數(shù)的8.77%。采用兩種方法對(duì)全部血樣標(biāo)本進(jìn)行檢測時(shí)，結(jié)果同時(shí)顯示為陽性的血樣標(biāo)本為170份，酶聯(lián)免疫檢測顯示陰性，而膠體金法檢測顯示陽性有4份；酶聯(lián)免疫法檢測顯示為陽性而膠體金法檢測顯示為陰性有10份。運(yùn)用兩種方式對(duì)2040份血樣檢測，結(jié)果顯示同為陰性血樣有1860份（具體如表1所示）。

3.討論

膠體金法及酶聯(lián)免疫法為臨床上檢測乙肝表面抗原的常見方法，兩者在檢測原理上有著較大的區(qū)別。相對(duì)來講，膠體金主要是由氯金酸與還原劑等物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)而聚合成的顆粒，該種種顆粒會(huì)受到靜電影響，而成為膠體狀態(tài)，并具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性。而在弱堿狀況下，膠體金會(huì)帶有負(fù)電荷，并與蛋白質(zhì)分子正電荷基團(tuán)相結(jié)合[3]。所以，搞這個(gè)結(jié)合屬于靜電結(jié)合，蛋白質(zhì)的生物特性通常不會(huì)受到影響。另外，膠體金具有敏感性、方便性、穩(wěn)定性、快捷性、試劑與設(shè)備無特殊性、結(jié)果直觀性等特征。

而酶聯(lián)免疫法則是一種相對(duì)特殊的試劑檢測形式，主要是以免疫酶技術(shù)為基礎(chǔ)所形成的新型免疫測定技術(shù)。主要通過酶復(fù)合物與抗體的結(jié)合，之后利用試劑顯示的顏色予以檢測[4]。該種方法在敏感性與特異性上較高，但同時(shí)，也存在操作繁雜的缺陷。在檢測過程中，致使結(jié)果受到影響的各種因素也比較多，對(duì)檢測設(shè)備與檢測人員有著較高的要求。

從此次研究結(jié)果也可以看出，在2040份血樣標(biāo)本中，使用酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)結(jié)果呈陽性的血樣標(biāo)本為186份，占總數(shù)的9.11%；而采用膠體金法檢驗(yàn)結(jié)果呈陽性的血樣標(biāo)本為179份，占總數(shù)的8.77%。也就是說，在乙肝表面抗原檢測中采用酶聯(lián)免疫法的靈敏度明顯要高于膠體金法，比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)方面的意義（P<0.05）。

綜上所述，在大規(guī)模乙肝病毒攜帶篩檢中，可采用膠體金檢測法對(duì)血樣進(jìn)行快速的篩查，以提高檢測效率，縮短初篩時(shí)間。人在少數(shù)膠體金法檢測結(jié)果呈陽性的二次篩檢中，可采用酶聯(lián)免疫檢測以確保結(jié)果的精準(zhǔn)性。

參考文獻(xiàn)

[1]侯娟，陳偉金.乙型肝炎表面抗原不同檢測方法的優(yōu)勢比較分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2014，20（12）：23-24.

[2]劉加紅.兩種乙肝表面抗原檢測法的比較[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2014，12（11）：79.

[3]李玉亮.淺談應(yīng)用膠體金法與酶聯(lián)免疫法檢測乙肝表面抗原的優(yōu)缺點(diǎn)[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2014，12（16）：45-46.

[4]安紅霞.ELISA法與金標(biāo)法相結(jié)合提高乙肝表面抗原檢測準(zhǔn)確度的探討與應(yīng)用[J].中國傷殘醫(yī)學(xué)，2013，21（06）：295-296.