牛尾菜根乙醇提取液藥理活性的初步研究

苗婷婷+馮穎+劉宇+王曼寧+沈紅梅

摘 要：目的：對牛尾菜根提取液的祛痰鎮(zhèn)咳、消炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行初步研究.方法：用牛尾菜根乙醇提取液對小鼠連續(xù)灌胃7d，分別采用氨水引咳法、酚紅排泌量法、足腫脹和耳廓腫脹法、醋酸扭體法和熱板法觀察效果.結(jié)果：牛尾菜根的乙醇提取液可明顯抑制氨水所致的小鼠咳嗽，使酚紅排泌量增加，明顯對抗熱刺激和醋酸所致的小鼠疼痛反應(yīng).結(jié)論：牛尾菜根的乙醇提取液對小鼠有明顯的鎮(zhèn)咳祛痰及消炎鎮(zhèn)痛作用.

關(guān)鍵詞：牛尾菜根；鎮(zhèn)咳；祛痰；消炎；鎮(zhèn)痛

基金項目：吉林省科技發(fā)展計劃（編號：20140204002NY）；吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃（編號：2015033）.

牛尾菜（Smilax ripariaA. DC）又叫心葉牛尾菜、龍須菜、鞭桿子菜等，是百合科菝葜屬的多年生宿根植物.其幼苗可食用，口感好，無異味，牛尾菜還具有廣泛的生物活性和極高的藥用價值，有活血化瘀、祛痰止咳等功效，多用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、支氣管炎、肺結(jié)核、咳嗽咯血等[1-2]，是長白山區(qū)廣受歡迎的一種藥食的重要植物資源[3-4]，也是我國山野菜出口的重要品種之一[5]，

目前對牛尾菜的研究主要集中在其營養(yǎng)、成分、栽培、種苗發(fā)育等方面，很少有牛尾菜藥理活性方面的研究報道，未見有祛痰鎮(zhèn)咳、消炎鎮(zhèn)痛方面的相關(guān)實

驗數(shù)據(jù).為探討其藥理活性，本實驗對牛尾菜根進(jìn)行提取，觀察其對小鼠的祛痰鎮(zhèn)咳、消炎鎮(zhèn)痛作用.

1 實驗材料

1.1 動物

體重為（25±2）g的昆明小鼠，購自長春市高新區(qū)醫(yī)學(xué)實驗動物中心（scxk-（吉）2008-0001）.小鼠灌胃給藥，給藥劑量0.02L/kg體重，1次/d，連續(xù)7d.

1.2 藥品及處理

牛尾菜采集于吉林省通化縣金斗鄉(xiāng)，清洗干凈后放在通風(fēng)良好的地方自然干燥，取根部用粉碎機粉碎.稱取牛尾菜根粉末400g，以70%乙醇加熱回流提取2小時，重復(fù)3次，得到乙醇提取液，濃縮后配成高、中、低劑量組（生藥含量每毫升0.202g、0.101g、0.0505g），4℃冷藏備用.

1.3 試劑與儀器

枸櫞酸噴托維林片，國藥準(zhǔn)字H21022140，丹東制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)；阿司匹林緩釋片，批號120707056，哈爾濱格拉雷藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；地塞米松磷酸鈉注射液，國藥準(zhǔn)字H41021269，焦作福瑞堂制藥有限公司.

RE-5ⅡAA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮儀器廠；SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)水式多用真空泵，河南省予華儀器有限公司；UV1200S型紫外可見分光光度計，上海翱藝儀器有限公司；FW-100高速萬能粉碎機，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；YLS-8A型多功能誘咳引喘儀，濟南益延科技發(fā)展有限公司；YLS—21A型冷熱板測痛儀，濟南益延科技發(fā)展有限公司.

2 實驗方法

2.1 小鼠氨水引咳法

最后一次給藥1h后，在多功能誘咳引喘儀內(nèi)自動恒壓噴放氨霧30s，將小鼠放入其內(nèi)記錄咳嗽潛伏期和3min內(nèi)咳嗽的次數(shù).

2.2 小鼠酚紅祛痰法

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：y=0.1195x-0.16，R=0.77.末次給藥后30min，每只小鼠腹腔注射濃度為0.5%的酚紅溶液0.5ml，30min后處死小鼠，仰臥位固定，用手術(shù)刀剝離氣管周圍的組織，取等長的氣管，放入離心管中加5ml的5%碳酸氫鈉溶液，每分鐘3000轉(zhuǎn)，離心5分鐘后吸取上清液，在波長546nm處測吸光度值帶入回歸方程，即得小鼠酚紅的排泌量，以此作為祛痰作用的指標(biāo).

2.3 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗

末次給藥1h后，左側(cè)耳廓雙面均勻涂抹0.04ml二甲苯，右耳廓作為陰性對照組同法涂抹等量生理鹽水，1h后處死小鼠，沿耳廓基線對稱剪下兩耳稱重，計算腫脹度（mg）及腫脹抑制率（%）.

2.4 甲醛致小鼠足腫脹實驗

末次給藥1h后，在左足跖部注射0.05ml 2.5%甲醛，右足為陰性對照，同法注射等量生理鹽水，1h后處死小鼠，對稱剪下小鼠左右足，稱重，計算腫脹度（mg）及腫脹抑制率（%）.

2.5 醋酸扭體法實驗

末次給藥1h后，腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.2ml/10g），記錄痛閾潛伏期及注射醋酸后15min內(nèi)扭體的次數(shù)，計算抑制率.

2.6 熱板法實驗

把冷熱板測痛儀調(diào)到55℃，分別記錄每只小鼠的痛閾潛伏期和痛閾值，計算痛閾提高百分率.

2.7 統(tǒng)計分析

表1、表2及表5、表6用spss19.0軟件處理，進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果用±s表示.

3 結(jié)果與分析

3.1 牛尾菜根乙醇提取液的鎮(zhèn)咳實驗

表1顯示：與生理鹽水組和陽性對照組相比較，中劑量組和高劑量組都能顯著延長小鼠的咳嗽潛伏期（P<0.01，p<0.05），并使小鼠在 3min內(nèi)咳嗽的次數(shù)顯著減少（P<0.01），而低劑量組不存在統(tǒng)計學(xué)差異.

3.2 牛尾菜根乙醇提取液的祛痰實驗

表2顯示：與生理鹽水組相比較，所有實驗組均可使小鼠的酚紅排泌量增加，其中陽性對照組差異顯著（p<0.05），高、中、低劑量組差異極其顯著（p<0.01），隨著藥物濃度的增加酚紅排泌量增加.結(jié)果表明：牛尾菜根乙醇提取液的高、中、低劑量組具有明顯的祛痰作用，且效果優(yōu)于氯化銨.

3.3 耳廓腫脹實驗

與生理鹽水組比較，牛尾菜根乙醇提取液的三個劑量組對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹都有一定的抑制作用，其中高、中劑量組的效果甚至優(yōu)于陽性對照組. 結(jié)果見表3.

3.4 足腫脹實驗

表4顯示：與生理鹽水組比較，牛尾菜根乙醇提取液三個劑量組都可以抑制甲醛引起的小鼠足腫脹，其中高、中劑量組的效果甚至優(yōu)于陽性對照組.

3.5 熱板法實驗

實驗結(jié)果顯示：給藥1.5h后，高、中劑量組小鼠痛閾值發(fā)生極顯著變化（P<0.01），低劑量組和阿司匹林組發(fā)生顯著變化（P<0.05）.表明牛尾菜根乙醇提取液能對抗熱刺激所致的小鼠疼痛反應(yīng)，結(jié)果見表5.

3.6 扭體法實驗

實驗結(jié)果顯示：給藥1h后，在小鼠扭體潛伏期方面，藥物組與生理鹽水組比較無統(tǒng)計學(xué)差異，但小鼠扭體次數(shù)顯著減少（P<0.01），抑制率提高，表明牛尾菜根乙醇提取液能對抗醋酸所致的小鼠疼痛反應(yīng)，結(jié)果見表6.

4 討論

在民間的許多典籍、附方中記載：牛尾菜有消炎鎮(zhèn)痛、祛痰止咳、舒筋活絡(luò)、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種藥理活性，但是沒有相關(guān)的實驗數(shù)據(jù)相支持.咳嗽是人體的一種自我保護(hù)性反射動作，能減輕或制止咳嗽的藥物稱為鎮(zhèn)咳藥，通過咳嗽可將呼吸道內(nèi)的病理性分泌物和外界進(jìn)入呼吸道的異物排出，頻繁的、刺激性的咳嗽則失去保護(hù)性意義[6].本實驗通過氨水引咳法引起小鼠咳嗽，用牛尾菜根乙醇提取液治療后，觀察牛尾菜的鎮(zhèn)咳作用，結(jié)果表明：牛尾菜根乙醇提取液的高、中濃度組對延長小鼠咳嗽潛伏期、減少3min內(nèi)咳嗽次數(shù)有很好的效果.

咳痰是機體通過咳嗽排除呼吸道內(nèi)的病理性分泌物的過程，有利于呼吸道中異物的清除，而能減輕咳嗽的藥物稱為祛痰藥，其作用原理多為增加呼吸道分泌，使痰液變稀或降低痰液中的黏性成分，或增加呼吸道粘膜上皮細(xì)胞纖毛的運動，使痰液易于咳出[7].本實驗通過酚紅的排出量作為排出痰液的指標(biāo)，證明牛尾菜根的乙醇提取液具有明顯的祛痰作用.

牛尾菜是民間常用草藥，已有研究表明牛尾菜中含有酚類、甾體皂苷等化學(xué)成分[8-9]，其中甾體皂苷類具有顯著的抗炎活性[10]，本實驗結(jié)果與此研究相一致，證明：牛尾菜根的乙醇提取液可以減輕小鼠耳腫脹和足腫脹反應(yīng)，具有很好的消炎作用.

多種原因可引起疼痛，包括溫度、機械性刺激的物理因素和化學(xué)因素以及其它等等，本實驗選取了兩種常見的物理和化學(xué)性因素，分別觀察藥物對小鼠疼痛的影響，結(jié)果表明牛尾菜根提取液能對抗熱刺激和醋酸所致的小鼠疼痛反應(yīng)且效果明顯，但具體的鎮(zhèn)痛機理還有待于進(jìn)一步研究.

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作者簡介

苗婷婷（1981-），女，漢族，吉林省柳河縣人，實驗師，碩士研究生，研究方向：藥理學(xué)。