手法對CCI模型大鼠局部鎮(zhèn)痛作用及其機制的實驗研究

陳艷偉++李沛++張仲博++趙利敬++史鵬博++巴正

【摘 要】目的：探討手法對神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠局部鎮(zhèn)痛作用效果及其作用機制，為手法鎮(zhèn)痛提供理論依據(jù)。方法：將32只SPF級雌性SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、針刺組、手法組，每組

8只。除假手術(shù)組外，其他各組建立坐骨神經(jīng)慢性縮窄性損傷（CCI）大鼠模型。建模成功后，針刺組給予針刺治療，手法組給予手法治療。觀察手法對大鼠疼痛閾值的影響及手法治療后施術(shù)局部β-內(nèi)啡肽的含量。結(jié)果：大鼠造模后，表現(xiàn)出跛行、抬足、舔足等痛覺過敏表現(xiàn)，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

（P < 0.05）。手法能明顯提高神經(jīng)病理性疼痛大鼠的疼痛閾值（P < 0.05）；給予手術(shù)大鼠手法治療后，針刺組和手法組大鼠病灶局部β-內(nèi)啡肽含量明顯升高，與假手術(shù)組及模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。

手法組和針刺組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。結(jié)論：手法對CCI模型大鼠局部鎮(zhèn)痛效果顯著，其作用機制可能是通過升高施術(shù)局部β-內(nèi)啡肽的含量而達到鎮(zhèn)痛效果。

【關(guān)鍵詞】 手法；CCI模型；神經(jīng)病理性疼痛；鎮(zhèn)痛；β-內(nèi)啡肽；大鼠

Experimental Study on the Effect and Mechanism of Manipulation on CCI Model in Rats

CHEN Yan-wei，LI Pei，ZHANG Zhong-bo，ZHAO Li-jing，SHI Peng-bo，BA Zheng

【ABSTRACT】Objective：To explore the effect of manipulation on local analgesic effect in neuropathic pain rats and its mechanism，provide a theoretical basis for the technique of analgesia.Methods：Thirty-two healthy SD female rats were randomly divided into sham operation group，model group，acupuncture group and manipulation group，with 8 rats in each group.In addition to the sham operation group，the other groups were established sciatic nerve chronic constriction injury（CCI）rat model.After successful modeling，the acupuncture group was given acupuncture treatment，the manipulation group was given manipulation treatment.The content of the local application of beta endorphin manipulation effect on pain threshold in rats and after manipulation treatment.Results：After modeling，the rats showed a limp，lift the foot，foot licking hyperalgesia，compared with sham operation group，the difference was statistically significant（P < 0.05）.Manipulation can significantly improve the pain threshold of neuropathic pain rats（P < 0.05）.After the surgical rats were given treatment of manipulation，β-endophine content of acupuncture group rats and manipulation group significantly increased，there were significant differences compared to the sham operation group as well as the model group（P < 0.05）.There were no significant differences between acupuncture group rats and manipulation group（P > 0.05）.Conclusion：The effect of manipulation on local analgesia in CCI model rats was significant，its mechanism may be through increased application of local beta endorphin content and analgesic effect.

【Keywords】 manipulation；CCI model；neuropathic pain；analgesic；β-endorphine；rats

疼痛是危及人類健康和影響生活質(zhì)量的重大醫(yī)學(xué)難題。治療慢性疼痛的主要困難就是明確其病因、正確選擇鎮(zhèn)痛方法。手法在緩解經(jīng)筋系統(tǒng)疼痛方面療效肯定，具有簡便驗廉、副作用少的優(yōu)勢。臨床工作中，筆者以中醫(yī)經(jīng)筋理論為指導(dǎo)，對患者施以手法治療可以緩解大部分慢性經(jīng)筋疼痛。但是長期以來，關(guān)于手法緩解疼痛的作用機制研究相對較少。已有研究表明，在患者局部施以針刺和手法治療，能夠增加血液中β-內(nèi)啡肽（β-EP）等具有鎮(zhèn)痛作用的神經(jīng)遞質(zhì)，減少P物質(zhì)（SP）等具有致痛物質(zhì)的產(chǎn)生[1-2]。β-EP作為一種內(nèi)源性類嗎啡樣物質(zhì)，在抑制疼痛方面起到了重要作用。本實驗擬在疼痛部位局部施以適當手法以觀察其鎮(zhèn)痛效果及其對作用局部β-EP含量的影響，探討手法局部鎮(zhèn)痛的機制，為中醫(yī)骨傷科手法治療經(jīng)筋疾病提供科學(xué)依據(jù)和理論指導(dǎo)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 SPF級雌性SD大鼠32只，體質(zhì)量（200±20）g，由河南省實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（豫）2010-0002。IVC獨立通氣鼠籠，12/12 h晝夜交替節(jié)律下進行飼養(yǎng)，室溫（22±1）℃，濕度（50±10）%。進行適應(yīng)性喂養(yǎng)，并進行痛閾值篩選：測定值位于8～30 s之間的大鼠納入實驗。

1.2 試 劑 水合氯醛（大連美侖生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號B20150801）；β-EP試劑盒（上海朝瑞生物科技有限公司）；注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司）。

1.3 主要儀器 酶標儀（Thermo Multisan）；組織勻漿機（QIAGEN）；高速離心機（Thermo）；非吸收性外科縫線（揚州市華祥醫(yī)療器械廠）。

2 方 法

2.1 分組與造模方法 將32只SD雌性大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、針刺組、手法組，每組8只。

假手術(shù)組：用2%戊巴比妥鈉，0.3 mL·（100 g）-1麻醉，俯臥位固定好大鼠后，手術(shù)區(qū)備皮，消毒。于大鼠右側(cè)背部切開皮膚，暴露坐骨神經(jīng)主干，不對坐骨神經(jīng)進行結(jié)扎，然后逐層消毒、縫合。

模型組：參照CCI模型造模方法[3]，麻醉，俯臥位固定好大鼠后，手術(shù)區(qū)備皮、消毒，取大鼠右側(cè)膝部、髂棘的連線，其中點下方0.5 cm處，做一平行線，沿著此線切開大鼠腿部皮膚（約1～1.5 cm），鈍性分離肌肉，暴露坐骨神經(jīng)主干，用5-0鉻制羊腸線松扎坐骨神經(jīng)干4道，每2道之間間隔1 mm，結(jié)扎強度以環(huán)繞的羊腸線能在坐骨神經(jīng)主干上自由的滑動，不影響神經(jīng)外膜血運為原則，然后逐層消毒、縫合，并給予青霉素腹腔注射，避免術(shù)后感染。大鼠在術(shù)前1 d禁食、禁水，羊腸線（5-0）用溫鹽水浸泡24 h，手術(shù)后大鼠局部縫合傷口血跡清洗干凈，并單籠飼養(yǎng)，防止自行咬破傷口，或互相撕咬造成動物傷口撕裂而死亡。

針刺組：造模同模型組，于第6天進行針刺治療，安靜環(huán)境中將大鼠固定，動物于清醒狀態(tài)下選取其環(huán)跳穴，針刺深度為0.5 cm，隔5 min行針一次，共20 min。

手法組：造模同模型組，于第6天在大鼠手術(shù)同側(cè)環(huán)跳穴處施以按法，術(shù)者使用食指作用于環(huán)跳穴處，作用20 min。

2.2 觀察指標及方法 各組分別于造模前1 d、治療前、治療后測量大鼠熱痛閾值，測量完畢后處死取材。處理標本后，使用β-EP試劑盒對標本進行測量。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以表示，符合正態(tài)分布且方差齊，采用單因素方差分析；治療前后比較，采用配對樣本t檢驗；不符合正態(tài)性檢驗及方差齊性檢驗，則采用秩和檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 大鼠一般情況 假手術(shù)組大鼠皮毛光潤，精神狀態(tài)好，喜動，反應(yīng)靈敏，飲食正常；模型組、針刺組、手法組造模后，大鼠精神萎靡，少活動，飲食較差，右足（術(shù)側(cè)）出現(xiàn)跛行、抬足、舔足等痛過敏表現(xiàn)。造模前各組大鼠體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；模型組、針刺組、手法組大鼠體質(zhì)量與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；模型組、針刺組、手法組大鼠與造模前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

3.2 大鼠各時期疼痛閾值變化 造模前，各組大鼠之間疼痛閾值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。治療前，各組大鼠之間疼痛閾值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；假手術(shù)組與模型組、針刺組、手法組比較，疼痛閾值明顯降低（P < 0.05）；模型組、針刺組、手法組兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義

（P > 0.05）。治療后，假手術(shù)組與針刺組、手法組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；手法組、針刺組與治療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；手法組和針刺組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

3.3 各組大鼠治療后肌肉組織β-EP濃度比較 治療后，手法組和針刺組大鼠β-EP含量明顯升高，手法組與假手術(shù)組、模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05），與針刺組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意

義（P > 0.05）。見表3。

4 討 論

1988年，Bennett和Xie首次成功研制出大鼠CCI模型。由于CCI模型的制備方法較為簡易，造模成功率高，觀測模型大鼠痛閾值較為方便，自CCI模型制作出后就成為經(jīng)典的慢性疼痛模型。CCI模型造模手術(shù)操作簡單明了，用時短，創(chuàng)傷小，技術(shù)要求低，對大鼠整體影響小，術(shù)后可出現(xiàn)較為明顯的痛閾值降低的癥狀：術(shù)肢自發(fā)痛、物理性刺激痛覺過敏和痛覺超敏。實驗中CCI模型大鼠體質(zhì)量較假手術(shù)大鼠輕，反應(yīng)遲鈍，精神萎靡，少活動，飲食較差，右足（術(shù)側(cè)）出現(xiàn)跛行、抬足、舔足等痛過敏表現(xiàn)。這些痛閾值降低的現(xiàn)象表明實驗造模成功，大鼠的慢性疼痛模型較為典型。

臨床工作中，在處理經(jīng)筋類疼痛時，施術(shù)者往往以患者痛處為腧穴，在其周圍痛處仔細尋找壓痛點，并對該點及周圍區(qū)域進行點、壓、按、擦、推、扳、拍等手法操作，以達到通氣散瘀消瘀、活血散結(jié)、消腫止痛、疏經(jīng)通絡(luò)的作用。臨床實踐證明，取痛處為腧穴能夠使手法治療更直接、方便，效果更加顯著，操作更為簡單。《靈樞·九針論》中記載手法配合藥物能夠加強功效，對肢體麻木、筋脈不通類疾病有很好的療效，同時也能用于肢體功能鍛煉?；钛鲱愃幬锬軌蛑κ址ɑ钛袣狻⑹柰ń?jīng)絡(luò)，提高療效。手法和藥物的配合可用于治療四肢麻木、關(guān)節(jié)不利等經(jīng)筋病證。在臨床康復(fù)鍛煉中可以運用手法和藥物配合提高康復(fù)功能鍛煉的效率。在治療經(jīng)筋疾病和患肢康復(fù)鍛煉時常將手法治療配合中藥塌漬、熏蒸，往往能夠取得較好的臨床療效。

已有研究表明，在患者局部施以針刺療法和手法能夠增加血液中β-EP等具有鎮(zhèn)痛作用的神經(jīng)遞質(zhì)，減少SP等具有致痛物質(zhì)的產(chǎn)生[1-2]。中醫(yī)經(jīng)筋疾病的治療原則是“以痛為腧”[4]。針灸鎮(zhèn)痛得到了大量臨床實踐驗證，在治療經(jīng)筋病亦遵循“以痛為腧”的原則，實驗證明，針灸可以抑制炎性疼痛和神經(jīng)病理性疼痛[5]。β-EP作為一種內(nèi)源性類嗎啡樣物質(zhì)，在抑制疼痛方面起到了重要作用。已有研究證明，針刺能夠刺激血漿β-EP的含量增加，從而達到鎮(zhèn)痛的效果，其含量與鎮(zhèn)痛效果呈正相

關(guān)[6]。指針遵循針灸的原理作為一種獨特的針灸方法是區(qū)別于普通針刺的非侵入性治療，疼痛患者更容易接受，臨床上更容易開展。傳統(tǒng)的阿片類藥物是治療重度疼痛最有效的鎮(zhèn)痛藥物，它主要是通過抑制中樞神經(jīng)元對傷害性刺激的反應(yīng)而起作用。研究表明，阿片類藥物的鎮(zhèn)痛作用大部分是通過與外周阿片受體相結(jié)合而起到鎮(zhèn)痛作用[7]。內(nèi)源性阿片肽是推拿鎮(zhèn)痛的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[8]。β-EP是內(nèi)源性阿片系統(tǒng)中鎮(zhèn)痛作用較強的一種內(nèi)啡

肽[9]。據(jù)報道，β-EP含量在慢性疼痛患者血中水平較低，在疼痛患者相應(yīng)的壓痛點進行針刺和按壓后獲得鎮(zhèn)痛效應(yīng)時，患者血和腦脊液中的β-EP含量升高，其鎮(zhèn)痛效應(yīng)與升高幅度呈正相關(guān)，提示按摩產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用可能與內(nèi)啡肽升高有關(guān)[10]。冀斌等[11]運用四指推法能夠有效治療腰椎間盤突出癥，緩解腰背部疼痛以及雙下肢疼痛。通過治療前后疼痛閾值對比及量化分析患者治療前后血漿β-EP含量變化，發(fā)現(xiàn)經(jīng)四指推法治療后的患者血漿β-EP含量較治療前明顯升高，說明四指推法的鎮(zhèn)痛作用可能是通過調(diào)節(jié)外周血漿中β-EP的含量而實現(xiàn)的。

以往的研究只能證明手法可以促使機體血漿內(nèi)β-EP的含量升高，而沒有直接的證據(jù)表明疼痛部位組織β-EP的含量與鎮(zhèn)痛效果的關(guān)系。本實驗是為了檢測施術(shù)部位局部肌肉組織所含β-EP的含量，探討手法鎮(zhèn)痛更為直接的作用機制。實驗結(jié)果證明大鼠痛閾值與局部肌肉組織β-EP的含量呈正相關(guān)?？梢缘贸鼋Y(jié)論：手法對CCI疼痛模型是具備治療作用的。手法能夠促使大鼠施術(shù)部位肌肉組織β-EP的含量升高，提高大鼠痛閾值。手法鎮(zhèn)痛機制可能是通過升高局部β-EP的含量而達到鎮(zhèn)痛效果。

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收稿日期：2016-07-13；修回日期：2016-09-27