革蘭氏陰性桿菌在呼吸道的感染特性及藥敏分析

(衡水市第四人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北 衡水 053000)

·臨床醫(yī)學(xué)·

革蘭氏陰性桿菌在呼吸道的感染特性及藥敏分析

劉晶

(衡水市第四人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北 衡水 053000)

目的探討呼吸性疾病患者革蘭氏陰性桿菌的分布情況，并分析其耐藥性。方法收集本院呼吸內(nèi)科100例患者的125株感染標(biāo)本的細(xì)菌株，包括痰液標(biāo)本、血液標(biāo)本，對所有標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌定量培養(yǎng)，以細(xì)菌數(shù)≥106為致病菌診斷標(biāo)準(zhǔn)，分析其中的革蘭氏陰性菌的分布情況，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果125株革蘭氏陰性桿菌中34株為大腸埃希菌，24株鮑曼不動桿菌，18株銅綠假單胞菌，10株陰溝腸桿菌，18株肺炎克雷伯菌以及21株其他菌株。其中阿米卡星、頭孢噻肟、美羅培南以及頭孢曲松對大腸埃希菌的耐藥率分別為79.41%、76.47%、76.47%、70.59%，而大腸埃希菌對氨芐西林以及頭孢哌酮比較敏感；鮑曼不動桿菌對氨芐西林和頭孢唑啉的耐藥率為100.00%；對頭孢曲松的耐藥率為91.67%；銅綠假單胞菌對氨芐西林以及頭孢曲松的耐藥率為100.00%，對頭孢噻肟以及左氧氟沙星的耐藥率為94.44%，陰溝腸桿菌對氨芐西林的耐藥率為90.00%。結(jié)論呼吸道感染常見病原菌以大腸埃希氏桿菌、鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌等為主。

呼吸內(nèi)科； 革蘭氏陰性桿菌； 耐藥性

呼吸系統(tǒng)感染主要的致病菌是革蘭氏陰性桿菌[1]，由于抗生素的濫用是重要原因，導(dǎo)致產(chǎn)生越來越多的耐藥菌，這對臨床治療用藥選擇合適的抗生素提出了很高的要求[2]。由于耐藥細(xì)菌增多，往往導(dǎo)致呼吸性疾病遷延不愈。由于不同的地方其醫(yī)療水平不同，故抗菌藥物的耐藥性也有一定的差異，所以需要對本地區(qū)的抗生素耐藥情況進(jìn)行了解，從而更好地指導(dǎo)診療，本文就本院呼吸內(nèi)科中革蘭氏陰性桿菌分布及其耐藥性進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1一般資料采用回顧性分析方法，選取本院2014年1月～2015年12月呼吸內(nèi)科100例患者作為本次研究對象，其中男57例，女43例，年齡41～89歲，平均年齡63.5±6.4歲，病程3～30天，平均病程10.9±2.1天，其中輕度肺部感染46例，中度27例，重度27例。然后收集100例患者的125株感染標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn)，包括痰液標(biāo)本以及血液標(biāo)本。

1.2方法

1.2.1 標(biāo)本采集 患者早晨起床后用力將喉嚨深處的痰液咳進(jìn)痰盒內(nèi)，將痰盒蓋好，對于氣道分泌物堵塞以及不合作的患者使用痰管外接吸引器進(jìn)行標(biāo)本采集。在吸引器吸管中段接一無菌瓶，瓶兩側(cè)各有一開口小管，其中一管接吸痰管，另一管接吸引器，開動吸引器后，痰液即被吸入瓶內(nèi)。將采集的所有標(biāo)本及時(shí)送檢，藥物敏感性試驗(yàn)采用NCCLS(美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會)推薦的紙片擴(kuò)散法(Kirby-Bauer)和MIC法進(jìn)行檢測。培養(yǎng)前將痰標(biāo)本振蕩洗滌來減少正常菌群的污染，將痰加入含有10 mL滅菌生理鹽水試管劇烈振蕩5～10 s，然后用接種環(huán)將沉淀于管底的膿痰小片沾出放入另一試管內(nèi)，以同樣的方法反復(fù)2次，最后將剩余的膿痰分別接種在血平板和麥康凱平攝上培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。對呈優(yōu)勢生長曲線的菌群進(jìn)一步挑選純化至單一菌種。其中質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853、金色葡萄球菌ATCC25923?？咕幬锛埰皖^孢硝噻吩紙片為OXOID公司提供。

1.2.2 藥敏實(shí)驗(yàn) 選擇進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)的藥物有氨芐西林、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢唑啉、亞胺培南、左氧氟沙星、頭孢哌酮、頭孢噻肟、呋喃妥因、頭孢西丁、美羅培南。培養(yǎng)基藥敏試驗(yàn)用MH瓊脂，流感嗜血桿菌藥敏試驗(yàn)用嗜血桿菌培養(yǎng)基HTM和營養(yǎng)補(bǔ)充劑SR158。上述培養(yǎng)基與營養(yǎng)補(bǔ)充劑均為OXOID公司的商品。β-內(nèi)酰胺酶的檢測采用頭孢硝噻吩紙片法檢測流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌中的β-內(nèi)酰胺酶，采用NCCLS2008年版推薦的ESBLs的紙片篩選法和酶抑制劑增強(qiáng)紙片確證法測定大腸埃希菌和克雷伯菌屬中的ESBLs產(chǎn)生株。

1.2.3 革蘭氏陰性桿菌的測定 采用手工法培養(yǎng)并分離標(biāo)本，利用標(biāo)準(zhǔn)線方法將標(biāo)本接種于相應(yīng)培養(yǎng)基板上，在37 ℃條件下培育1～2天，根據(jù)培養(yǎng)后菌落的形態(tài)進(jìn)行鏡檢，利用生化反應(yīng)法培養(yǎng)分離菌株，除革蘭陽性菌外。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1呼吸內(nèi)科住院患者的革蘭氏陰性桿菌構(gòu)成比125株革蘭氏陰性桿菌中34株為大腸埃希菌，其余分別為24株鮑曼不動桿菌，18株銅綠假單胞菌，10株陰溝腸桿菌，18株肺炎克雷伯菌以及21株其他菌株，見表1。

表1革蘭氏陰性桿菌分布比例

革蘭氏陰性桿菌株數(shù)比例(%)大腸埃希菌3427.20鮑曼不動桿菌2419.20銅綠假單胞菌1814.40肺炎克雷伯菌1814.40陰溝腸桿菌108.00其他2116.80合計(jì)125100.00

2.2主要的革蘭氏陰性菌的耐藥性分析阿米卡星、頭孢噻肟、美羅培南以及頭孢曲松應(yīng)用于大腸埃希菌的治療后耐藥率分別為79.41%、76.47%、76.47%、70.59%，對氨芐西林以及頭孢哌酮比較敏感。鮑曼不動桿菌對氨芐西林和頭孢唑啉為100.00%，對頭孢曲松的耐藥率為91.67%，對其他藥物的耐藥率均較高。銅綠假單胞菌對氨芐西林以及頭孢曲松的耐藥率為100.00%，對頭孢噻肟以及左氧氟沙星的耐藥率為94.44%，陰溝腸桿菌對氨芐西林的耐藥率為90.00%，見表2。

3 討 論

近些年來，臨床上抗生素的耐藥情況愈來愈嚴(yán)重，受到臨床醫(yī)師的關(guān)注，多重耐藥菌不斷在臨床上出現(xiàn)，也導(dǎo)致抗感染治療的難度在不斷增加，往往使得患者的病情反復(fù)發(fā)作，遷延不愈[3]，延長患者的住院時(shí)間，合理應(yīng)用抗生素，提高抗菌效果，降低患者的死亡率勢在必行[4]。

革蘭氏陰性桿菌在呼吸道感染中是最常見的一類致病細(xì)菌，本文發(fā)現(xiàn)，革蘭氏陰致病菌中最多的是大腸埃希菌，接下來分別為鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌，與之前的研究結(jié)果是相一致的[5-6]。

表2主要的革蘭氏陰性均的耐藥性分析

藥物大腸埃希菌(n=34)鮑曼不動桿菌(n=24)銅綠假單胞菌(n=18)陰溝腸桿菌(n=10)氨芐西林4(11.76)24(100.00)18(100.00)9(90.00)環(huán)丙沙星18(52.94)17(70.83)16(88.89)2(20.00)頭孢曲松24(70.59)22(91.67)18(100.00)6(60.00)頭孢唑啉9(26.47)24(100.00)16(88.89)6(60.00)亞胺培南23(67.65)17(70.83)3(16.67)1(10.00)左氧氟沙星6(17.65)17(70.83)17(94.44)4(40.00)頭孢哌酮5(14.71)19(79.17)3(16.67)4(40.00)頭孢噻肟26(76.47)13(54.17)17(94.44)7(70.00)呋喃妥因18(52.94)12(50.00)11(61.11)4(40.00)頭孢西丁18(52.94)17(70.83)3(16.67)6(60.00)美羅培南26(76.47)18(75.00)0(0.00)0(0.00)阿米卡星27(79.41)10(41.67)2(11.11)3(30.00)

大腸埃希菌是臨床感染中一種較為常見且重要的致病菌，在臨床診療過程中，其耐藥株有喹諾酮類、氯霉素、磺胺類等抗菌藥物，因?yàn)榫哂卸嘀啬退幍奶攸c(diǎn)，所以患者感染后臨床控制難度相對較大[7-8]。從本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果來看，該病菌對氨芐西林和頭孢哌酮的耐藥率相對較低，因此可作為該細(xì)菌治療的抗生素藥物。銅綠假單胞菌發(fā)生耐藥性的影響因素相對復(fù)雜，研究中發(fā)現(xiàn)其對氨芐西林和頭孢曲松的耐藥率相對較高，而對美羅培南及阿米卡星的耐藥率則相對較低，因此臨床上可采用美羅培南及阿米卡星抗生素聯(lián)合治療[9]。本文鮑曼不動桿菌對氨芐西林和頭孢唑啉耐藥性均較強(qiáng)，達(dá)到100%，對頭孢曲松的耐藥率達(dá)到了91.67%。其耐藥機(jī)制可能是鮑曼不動桿菌可產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶、碳青霉烯水解酶以及TEM-l、TEM-2酶等，這些酶導(dǎo)致抗生素失活[10]，而銅綠假單胞菌對于氨芐西林和頭孢曲松的耐藥率均達(dá)到了100%，對頭孢噻肟以及左氧氟沙星的耐藥率為94.44%，這是由于細(xì)菌的外膜通透性出現(xiàn)改變、OprD2蛋白缺失、導(dǎo)致細(xì)菌出現(xiàn)特異性的氨基糖苷類純化作用，從而出現(xiàn)多種β-內(nèi)酰胺酶以及頭孢菌素酶，導(dǎo)致抗菌藥物出現(xiàn)靶位改變，形成生物膜[11]，以上所介紹幾類主要致病菌耐藥性均不斷升高，但是臨床上新型抗生素的開發(fā)速度卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后，對于臨床抗感染治療帶來了很大的難度。

總之，呼吸內(nèi)科病房中常見病原菌以大腸埃希氏桿菌、鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌等。其中不同的細(xì)菌對抗菌藥物敏感性差異較大，臨床上要根據(jù)本科室中致病菌的分布及其耐藥情況分析，合理使用抗生素。

[1] 何萍,徐俊,陶云珍，等.2006～2011年兒童血行感染革蘭陰性桿菌的構(gòu)成及耐藥性監(jiān)測[J].臨床兒科雜志,2013,31(4):339-342.

[2] 劉德新,盧俊英,田加坤，等.綜合性ICU鮑曼不動桿菌肺部感染調(diào)查及耐藥性分析[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013,17(1):127-129.

[3] 吳一梅.124例肺炎患兒痰培養(yǎng)致病菌特點(diǎn)與藥敏試驗(yàn)結(jié)果研究[J].臨床肺科雜志,2014,11(7):1242-1244.

[4] 鄭薇,凌保東,賈旭，等.核糖體?？颗c抗生素耐藥[J].中國抗生素雜志,2014,39(3):161-170.

[5] 郭偉,張杰.卒中相關(guān)性肺炎病原菌對哌拉西林/舒巴坦等抗生素的耐藥現(xiàn)狀調(diào)查[J].中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志,2010,17(4):279-282.

[6] 鄭海曉,敖沛然,王軍榮，等.多重耐藥革蘭陰性桿菌Ⅰ類整合子結(jié)構(gòu)與功能分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2013,10(12):91-94.

[7] Mangino JE,Peyrani P,Ford KD,et al.Development and implementation of a performance improvement project in adult intensive care units:overview of the Improving Medicine Through Pathway Assessment of Critical Therapy in Hospital-Acquired Pneumonia(IMPACT-HAP)study[J].Crit Care,2011,15(1):259-262.

[8] 郭秀臣,郭微媛.血培養(yǎng)病原菌的分布及耐藥性分析[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,48(3):230-233.

[9] 孫伏喜,馮旰珠,姚靜，等.泛耐藥肺炎克雷伯菌血液分離株耐藥機(jī)制研究[J].中國抗生素雜志,2014,39(5):365-369.

[10] 嚴(yán)春,錢定良,詹愛霞,等.多重耐藥鮑曼不動桿菌攜帶碳青霉烯類水解酶基因情況的研究[J].疾病監(jiān)測,2011,26(9):736-738.

[11] 屠涌濤,肖美英,糜祖煌，等.一組泛耐藥銅綠假單胞菌耐藥相關(guān)基因的樣本聚類分析[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(9):1515-1517.

TheInfectionCharacteristicsandDrugSensitivityAnalysisofGramNegativeBacilliintheRespiratoryTract

LIU Jin

(DepartmentofInternalMedicine,HengshuiFourthHospital,Hengshui,Hebei053000,China)

ObjectiveTo investigate the distribution of gram negative bacilli in patients with respiratory disease and analyze their drug resistance.Methods125 bacterial strains of infections from 100 patients with respiratory medicine specimens,which include sputum and blood specimen,were collected and cultured.By taking Bacteria count more than106 as the standard,the study analysed the distribution of gram negative bacteria,and took drug sensitive test.ResultsAmong 125 strains of pathogenic gram negative bacilli,there were 34 strains of pneumonia escherichia coli,24 strains of acinetobacter baumannii,18 strains of pseudomonas aeruginosa,10 strains of enterobacter cloacae,18 strains of klebsiella pneumoniae and 21 strains of other strains.The amikacin,cefotaxime cefotaxime,meropenem and ceftriaxone against escherichia coli resistance ratio was 79.41%,76.47%,76.47%,70.59% respectively,while escherichia coli is sensitive to cefoperazone and ampicillin.Bauman Acinetobacter resistance to ampicillin and cefazolin was 100%,and to ceftriaxone was 91.67%.Pseudomonas aeruginosa resistant rate to ampicillin and ceftriaxone was 100%,to levofloxacin and levofloxacin was 94.44%.Enterobacter cloacae of ampicillin resistance rate was 90%.ConclusionEscherichia coli,bauman Acinetobacter,pseudomonas aeruginosa were the main gram negative bacillis causing hospitalized patients with?drug resistance.

respiratory medicine; gram-negative bacilli; drug resistance

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.03.029

2015-12-30；

2016-04-12

R56

A

蔣湘蓮)