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    云南山地仿野生撫育姜黃后姜黃素的含量變化研究

    2016-11-29 08:26:41張婭李艷萍夏海梅
    云南中醫(yī)中藥雜志 2016年9期
    關(guān)鍵詞:姜黃素姜黃

    張婭+李艷萍+夏海梅

    摘要:目的筆者對(duì)姜黃仿野生撫育后其姜黃素含量變化及其仿野生撫育后其藥材品質(zhì)進(jìn)行了相關(guān)的追蹤研究,研究結(jié)果將為今后仿野生種植藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)和品質(zhì)保證提供依據(jù)。方法用HPLC,以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈:2%冰醋酸溶液(48:52)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為430nm,分別測(cè)定姜黃種苗、仿野生撫育一年后子代、二年后子代中姜黃素的含量,并進(jìn)行對(duì)比分析。且對(duì)含量較高的姜黃子代藥材進(jìn)行了檢查、鑒別、浸出物等檢測(cè)。結(jié)果經(jīng)過(guò)含量測(cè)定及對(duì)比分析可知,姜黃素含量:兩年后子代>姜黃種苗>一年后子代。

    關(guān)鍵詞:姜黃;姜黃素;仿野生撫育;含量變化

    中圖分類號(hào):R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B文章編號(hào):1007-2349(2016)09-0081-03

    姜黃有多種有效化學(xué)成分,在腫瘤、慢性肝病、糖尿病、腎病、皮膚病等疾病的治療上體現(xiàn)出了優(yōu)勢(shì)[1]。姜黃為姜科植物姜黃的干燥根莖,主要產(chǎn)于四川、福建等地,一般為野生,現(xiàn)多為栽培,生用[2]。其性味辛、苦、溫,歸脾、肝經(jīng),有破血行氣、通經(jīng)止痛之功效,被廣泛應(yīng)用于胸脅刺痛、閉經(jīng)、風(fēng)濕肩臂疼痛、跌打腫痛等病癥[3]。姜黃的生物活性成分包括姜黃酮、姜烯、水芹烯、莪術(shù)酮、姜黃素、胭脂樹橙、微量元素等。其中姜黃素作為其所含的主要成分,有著多種藥理作用和重要的經(jīng)濟(jì)前景,近年來(lái)被廣泛關(guān)注[4]。近年來(lái)研究表明,姜黃素具有抗腫瘤、護(hù)肝、調(diào)節(jié)免疫功能、抗炎和降血脂等多重藥理作用[5]。

    目前我國(guó)仍有80%左右的中藥材來(lái)自野生,保證野生中藥資源的可持續(xù)利用,保證野生藥材采集與生態(tài)環(huán)境保護(hù)的協(xié)調(diào),實(shí)現(xiàn)人與自然的和諧共處,是中醫(yī)藥可持續(xù)發(fā)展必須解決的關(guān)鍵問(wèn)題之一[6]。另一方面,如何提高栽培藥材質(zhì)量,使其與野生藥材相近,保證生產(chǎn)藥材的天然性,也倍受人們關(guān)注。藥用植物野生撫育具有重要的意義與優(yōu)勢(shì),有效解決了如下矛盾:藥材采集與資源更新的矛盾;野生藥材供應(yīng)短缺與需求不斷增加的矛盾;藥材生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護(hù)的矛盾;當(dāng)前利益與長(zhǎng)遠(yuǎn)利益的矛盾。具有如下優(yōu)勢(shì):①提供高品質(zhì)的野生藥材,野生撫育藥用植物在原生環(huán)境中生長(zhǎng),人為干預(yù)少,不易發(fā)生病蟲害,遠(yuǎn)離污染源,產(chǎn)品為近乎天然的野生藥材[7]。②能較好保護(hù)珍稀瀕危藥用植物,促進(jìn)中藥資源可持續(xù)利用。野生撫育是藥用植物資源遷地保護(hù)、就地保護(hù)及栽培三者的有機(jī)結(jié)合。通過(guò)合適的藥材采挖方法,種群自然繁殖或及時(shí)補(bǔ)種,實(shí)現(xiàn)了撫育藥用植物種群的可持續(xù)更新,較好地保護(hù)了珍稀瀕危藥用植物及其生物多樣性[8]。③有效保護(hù)中藥資源生長(zhǎng)的生態(tài)環(huán)境,野生撫育模式下藥材采挖和生產(chǎn)是在生物群落動(dòng)態(tài)平衡的基礎(chǔ)上進(jìn)行,野生撫育基地藥用植物所有權(quán)專有化克服了野生藥材濫采濫挖對(duì)生態(tài)環(huán)境的嚴(yán)重破壞,實(shí)現(xiàn)了藥材生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護(hù)的協(xié)調(diào)發(fā)展。④有效節(jié)約耕地,以低投入獲高回報(bào),野生撫育不占用耕地,只在補(bǔ)種和藥用植物生長(zhǎng)過(guò)程中實(shí)施最低限度的人為干預(yù),充分利用了藥用植物的自然生長(zhǎng)特性,大幅降低了人工管理費(fèi)用。

    野生姜黃多分布在落葉混交林及常綠林內(nèi)。伴生植物有楓香、馬桑、山胡椒、石楠、薔薇和懸鉤子等,伴生植物也是姜黃生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中必不可缺的部分。土壤主要以山地棕壤紅黃壤為主,年平均溫度為16-18℃。姜黃從發(fā)芽到種子成熟一般一年即可完成。其分為:萌芽期、莖葉生長(zhǎng)期、花果期以及根狀莖生長(zhǎng)期等。姜黃被選定為云南省中醫(yī)藥治療艾滋病試點(diǎn)項(xiàng)目用藥復(fù)方制劑組成中一味重要的中藥材,為了保證中醫(yī)藥治療艾滋病用藥的有效性和安全性,也為了仿野生撫育技術(shù)今后能得到大力推廣,筆者對(duì)野生姜黃的種苗進(jìn)行了云南山地引種后使其在自然環(huán)境下仿野生撫育,對(duì)其不同子代中其主要有效成分姜黃素含量變化進(jìn)行相關(guān)研究,其研究結(jié)果將為今后仿野生種植藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)和品質(zhì)保證提供依據(jù)。

    1實(shí)驗(yàn)材料、儀器

    11實(shí)驗(yàn)材料姜黃種苗、姜黃一年后子代、姜黃兩年后子代:采自云南省西疇縣把獨(dú)村仿野生中藥材種植基地。

    12實(shí)驗(yàn)儀器戴安UltiMate3000高效液相色譜儀(美國(guó)戴安公司);Gemini5uC1811oA46×250 mm色譜柱(美國(guó)phenomenex公司);PhernomexC18保護(hù)柱(美國(guó)phenomenex公司);BSA124S-CW電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司);ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);CQ250超聲清洗儀(上海超聲波儀器廠)電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠);202-1A(PCD-3000serials)烘箱(上海喬躍電子有限公司)

    2實(shí)驗(yàn)方法

    21水分檢查

    211姜黃(種苗)水分測(cè)定取姜黃供試品26452 g,放入干燥至恒重的扁形稱瓶(286237 g),在105℃下干燥5h,取出,移至干燥器冷卻30 min,精密稱定重量(309815 g),再在105℃下干燥1h,冷卻,稱重(309796 g),至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5 mg為止。根據(jù)減失重量,計(jì)算供試品中含水量(%)。

    212姜黃(一年后子代)水分測(cè)定取姜黃供試品26525 g,放入干燥至恒重的扁形稱瓶(283550 g),在105℃下干燥5h,取出,移至干燥器冷卻30 min,精密稱定重量(307576 g),再在105℃下干燥1 h,冷卻,稱重(307541 g),至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失重量,計(jì)算供試品中含水量(%)。

    213姜黃(兩年后子代)水分測(cè)定取姜黃供試品24456 g,放入干燥至恒重的扁形稱瓶(282587 g),在105℃下干燥5h,取出,移至干燥器冷卻30 min,精密稱定重量(305190 g),再在105℃下干燥1 h,冷卻,稱重(305167 g),至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5 mg為止。根據(jù)減失重量,計(jì)算供試品中含水量(%)。

    22灰分檢查取干燥至恒重(629666 g)坩堝,稱取姜黃兩年生子代藥材40247 g,放到電爐上加熱至無(wú)煙,轉(zhuǎn)移至電爐500℃下加熱5 h,移至干燥器,干燥30 min,稱重。

    23酸不溶性灰分的檢查向上述裝有灰分的坩堝中加入10 mL稀鹽酸(95%-105%),水浴加熱10 min,加熱期間用5mL熱水沖洗蓋子,洗液并入坩堝中,10 min后用無(wú)灰濾紙過(guò)濾,水洗濾紙上的殘?jiān)敛伙@氯化物反應(yīng)為止(用AgNO3試液測(cè)試不產(chǎn)生Agcl沉淀為止)。濾渣同濾紙移至坩堝,坩堝移至電爐干燥至恒重。

    24浸出物檢查取干燥至恒重(839315 g)平底燒瓶,加20318 g姜黃兩年生子代藥材,加50%稀乙醇50 mL,塞緊稱重(1656 g),靜置1 h,加熱回流,微沸1h,放冷,取下燒瓶,稱重(減失量用50%稀乙醇補(bǔ)足),過(guò)濾,取濾液25 mL至干燥恒重的蒸發(fā)(757330 g),蒸干,放入干燥器30 min,稱重為759917 g。

    25薄層鑒別取兩年生子代姜黃粉末(過(guò)一號(hào)篩)02 g,加無(wú)水乙醇20 mL振搖,放置30 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2 mL使溶解,作為供試品溶液。另取姜黃素對(duì)照品,同法配置,作為對(duì)照品溶液。點(diǎn)樣:吸取上述溶液各4 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上。展開(kāi)劑:以三氯甲烷-甲醇-甲酸(96:4:07)為展開(kāi)劑。檢視條件:分別置于日光下及紫外燈(365 nm)下檢視。

    26含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈:2%冰醋酸溶液(48:52)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為430 mn。理論板數(shù)按姜黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

    對(duì)照品溶液的制備 取姜黃素對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每l mL含10 μg的溶液,即得。

    供試品溶液的制備 取不同姜黃細(xì)粉約02 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇10 mL,稱定重量,超聲處理20 min,搖勻,離心,精密量取上清液1 mL,置10 mL容量瓶中,加入甲醇稀釋至刻度線,搖勻,即得。

    測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL,注人液相色譜儀,測(cè)定,即得。

    3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    34小結(jié)

    本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)仿野生姜黃種苗、一年后子代、兩年后子代進(jìn)行相關(guān)研究(主要包括水分、灰分、水溶性浸出物、薄層鑒別、含量測(cè)定)。并采用HPLC法對(duì)姜黃野生種苗及其仿野生種植后不同子代藥材中有效成分姜黃素進(jìn)行含量比對(duì)分析。比對(duì)結(jié)果可見(jiàn),姜黃素含量:兩年后子代>姜黃種苗>一年后子代。

    研究目的在于通過(guò)對(duì)引種后仿野生種植的不同年限的子代藥材進(jìn)行采挖,并對(duì)其進(jìn)行有效成分的含量比對(duì),以期得到含量最接近野生藥材的第二代藥材。該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)從中藥資源學(xué)的角度考慮,為仿野生種植藥材的有效性及可推廣性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    參考文獻(xiàn):

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