• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    姜黃素干預(yù)耐吉非替尼肺腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響及相關(guān)機(jī)制的研究

    2017-03-02 18:56:39陳灝詹建偉王利民陳清勇葉健
    中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生 2016年32期
    關(guān)鍵詞:肺腺癌姜黃素生物學(xué)特性

    陳灝 詹建偉 王利民 陳清勇 葉健

    [摘要] 目的 探討姜黃素對(duì)耐吉非替尼人肺腺癌PC9/ZD細(xì)胞的生物學(xué)特性影響以及干預(yù)其上皮間質(zhì)化過(guò)程(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的相關(guān)機(jī)制。 方法 采用體外姜黃素作用于耐吉非替尼人肺腺癌PC9/ZD細(xì)胞;分別通過(guò)形態(tài)學(xué)、MTT法、transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)姜黃素干預(yù)的耐藥細(xì)胞株的形態(tài)特征、藥物敏感性和侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化;通過(guò)Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)波形蛋白、上皮鈣粘附分子在藥物作用后的表達(dá)差異以及PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路中相關(guān)蛋白 AKT、mTOR的變化情況。 結(jié)果 與人肺腺癌PC9細(xì)胞比較,PC9/ZD耐藥細(xì)胞株呈間質(zhì)樣細(xì)胞表型;與親代PC9/ZD細(xì)胞比較,經(jīng)姜黃素作用后的PC9/ZD細(xì)胞對(duì)吉非替尼敏感性明顯增強(qiáng),轉(zhuǎn)移能力減弱(75.67±8.82 vs 103.67±13.67);侵襲能力減弱(17.22±3.63 vs 59.89±8.19);波形蛋白表達(dá)下調(diào)(1.07±0.23 vs 1.28±0.28),上皮鈣粘附分子表達(dá)上調(diào)(0.82±0.27 vs 0.29±0.11);AKT、mTOR磷酸化減弱(0.20±0.05 vs 0.63±0.17,0.72±0.25 vs 1.10±0.19)。 結(jié)論 姜黃素可以通過(guò)阻斷PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路而明顯干預(yù)耐吉非替尼肺腺癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程。

    [關(guān)鍵詞] 肺腺癌;吉非替尼耐藥;上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化;生物學(xué)特性;姜黃素

    [中圖分類(lèi)號(hào)] R285.5;R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2016)32-0001-04

    吉非替尼作為一種常規(guī)治療肺癌的化療藥物,在臨床上有著不錯(cuò)的療效,但還有很多肺癌患者會(huì)出現(xiàn)原發(fā)性耐藥或繼發(fā)性耐藥的現(xiàn)象。已有研究表明腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是其獲得耐藥能力的重要因素之一[1,2]。目前,姜黃素公認(rèn)為是姜黃中最有效和最豐富的活性成分之一。一方面,姜黃素的抗炎、抗凝、抗氧化等作用不斷被人們所證實(shí)[3];另一方面,姜黃素的抗腫瘤機(jī)制也成為熱點(diǎn)[4]。本研究通過(guò)體外姜黃素作用于耐吉非替尼人肺腺癌PC9/ZD細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)特性的檢測(cè),分析其干預(yù)EMT過(guò)程的相關(guān)機(jī)制,旨在為進(jìn)一步研究姜黃素干預(yù)肺腺癌耐藥細(xì)胞發(fā)生EMT時(shí)所涉及的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子或相關(guān)通路打下基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑和材料

    ①吉非替尼(Gefitinib)(阿斯利康制藥有限公司產(chǎn)品);②DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(Thermo公司產(chǎn)品);③胰酶、PBS溶液(Hyclone公司產(chǎn)品);④人結(jié)腸癌PC9細(xì)胞株(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司);⑤人肺腺癌耐吉非替尼PC9/ZD細(xì)胞株(同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院提供);⑥甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、山羊抗兔IgG二抗、β-actin(biosharp公司產(chǎn)品);⑦M(jìn)atrigel膠、transwell小室、培養(yǎng)瓶、離心管(美國(guó)CORNING公司);⑧E-cadherin、Vimentin、mTOR、p-mTOR、AKT、p-AKT、GAPDH一抗(Abcam公司)。

    1.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)

    采用倒置相差顯微鏡(OLYMPUS 200×)觀察人肺腺癌PC9細(xì)胞株和人肺腺癌耐吉非替尼PC9/ZD細(xì)胞株。

    1.3 常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)

    將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人肺腺癌耐吉非替尼PC9/ZD細(xì)胞株接種至5 cm×5 cm大小的培養(yǎng)瓶,在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞鋪滿(mǎn)培養(yǎng)瓶80%左右進(jìn)行傳代??蓪⒓?xì)胞凍存在-80℃的超低溫冰箱中,解凍后細(xì)胞活力正常。

    1.4 吉非替尼對(duì)細(xì)胞抑制率的測(cè)定

    消化離心正常生長(zhǎng)的耐吉非替尼PC9/ZD細(xì)胞株,并調(diào)整細(xì)胞濃度為3×104個(gè)/mL,在96孔板中每孔加入100 μL細(xì)胞懸液(邊緣孔用無(wú)菌PBS填充)平均分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,均加入用稀鹽酸溶解過(guò)濾后濃度為10 μg/mL的吉非替尼藥物溶液,調(diào)整每孔吉非替尼濃度分別為0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 μg/mL,并在實(shí)驗(yàn)組的小孔中加入姜黃素(Cur),并調(diào)整每孔Cur含量為60 μmol/L。設(shè)置4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后,每孔加入5 mg/mL MTT溶液20 μL;置于培養(yǎng)箱4 h后吸去上清液,每孔加DMSO 150 μL,振蕩3 min;采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tex)檢測(cè)波長(zhǎng)為490 nm的吸光度(OD值)。計(jì)算抑制率,公式為=(1-實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組)×100%。

    1.5 transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲能力

    ①轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn):消化離心正常生長(zhǎng)的耐吉非替尼PC9/ZD細(xì)胞株,調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個(gè)/mL,該組為對(duì)照組;向細(xì)胞懸液加入Cur,使Cur含量為60 μmol/L,細(xì)胞濃度也為5×104個(gè)/mL,該組為實(shí)驗(yàn)組;然后在每個(gè)transwell小室的上室中加入200 μL兩組細(xì)胞懸液,同時(shí)下室中加入含10%胎牛血清的DEME培養(yǎng)基500 μL;放置于培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)24 h后小心吸去上下小室中的液體,并倒扣于濾紙上2 min;除去上室中未穿出的細(xì)胞;室溫固定15 min(4%多聚甲醛);染色20 min(0.1%結(jié)晶紫染色液);風(fēng)干后觀察、200倍鏡下拍照和計(jì)數(shù)(每個(gè)小室隨機(jī)選取5個(gè)視野)。設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。②侵襲實(shí)驗(yàn):先在每個(gè)transwell小室的上室加入事先4℃過(guò)夜解凍并用DEME培養(yǎng)基稀釋6倍的Matrigel膠60 μL。細(xì)胞懸液密度變?yōu)?×104,其余步驟同轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)。

    1.6 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞蛋白表達(dá)

    常規(guī)培養(yǎng)的PC9/ZD細(xì)胞為對(duì)照組。預(yù)用含Cur含量為60 μmol/L的培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h的PC9/ZD細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組。采用裂解液(PMSF∶RIPA=1∶100)提取細(xì)胞總蛋白。蛋白濃度是由RIPA裂解液調(diào)整為5 μg/μL,然后使蛋白高溫下變性。配制分離和濃縮膠濃度為5%和10%,然后用恒壓100 V進(jìn)行電泳1 h,待電泳結(jié)束后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜條件為冰浴、恒流2 h。封閉將轉(zhuǎn)膜后的PVDF膜在4℃過(guò)夜條件下進(jìn)行一抗處理。次日洗膜3次,進(jìn)行二抗處理,37℃、1 h。再次洗膜3次用ECL顯色后采用Quantity One軟件(Bio-Rad)進(jìn)行半定量比較分析。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,并進(jìn)行兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 細(xì)胞株形態(tài)

    倒置相差顯微鏡(OLYMPUS 200×)直接觀察人肺腺癌PC9細(xì)胞株和人肺腺癌耐吉非替尼PC9/ZD細(xì)胞株。在200倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn),PC9細(xì)胞表現(xiàn)為上皮樣形態(tài),細(xì)胞大小均勻,為立方形或圓形;而PC9/ZD細(xì)胞株表現(xiàn)為間質(zhì)樣形態(tài),細(xì)胞大小不一,甚至為多邊形,細(xì)胞間距增大,并且有明顯的偽足(封三圖1)。

    2.2 吉非替尼對(duì)兩組細(xì)胞的抑制率比較

    吉非替尼對(duì)兩組細(xì)胞抑制效果見(jiàn)表1,并以吉非替尼濃度為橫坐標(biāo),細(xì)胞抑制率為縱坐標(biāo),繪制圖表(封三圖2)。結(jié)果顯示隨著吉非替尼濃度增加,吉非替尼對(duì)兩組細(xì)胞的抑制作用逐漸增強(qiáng);并且在同樣藥物濃度作用下,實(shí)驗(yàn)組抑制率明顯高于對(duì)照組(除1.0 μg/mL)(P<0.05)。

    2.3 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移能力和侵襲能力比較

    轉(zhuǎn)移和侵襲實(shí)驗(yàn)中,對(duì)照組穿過(guò)小室細(xì)胞數(shù)分別為(103.67±13.67)和(59.89±8.19)。實(shí)驗(yàn)組穿過(guò)小室細(xì)胞數(shù)分別為(75.67±8.82)和(17.22±3.63),表明姜黃素可以明顯干擾人肺腺癌耐吉非替尼PC9/ZD細(xì)胞株轉(zhuǎn)移(t=2.77,P=0.011)和侵襲能力(t=2.41,P=0.016),見(jiàn)封三圖3。

    2.4 兩組EMT相關(guān)蛋白表達(dá)及PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路p-AKT、p-mTOR比較

    Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較[蛋白相對(duì)含量E-cadherin和Vimentin分別為(0.29±0.11)和(1.28±0.28)],實(shí)驗(yàn)組的E-cadherin表達(dá)上調(diào)[蛋白相對(duì)含量為(0.82±0.27)],Vimentin表達(dá)下調(diào)[蛋白相對(duì)含量為(1.07±0.23)](圖1),表明姜黃素干預(yù)上皮間質(zhì)化的過(guò)程,使得上皮標(biāo)志蛋白表達(dá)上調(diào),間質(zhì)標(biāo)志蛋白表達(dá)下調(diào)。另一方面,相比于對(duì)照組[蛋白相對(duì)含量p-AKT和p-mTOR分別為(0.63±0.17)和(1.10±0.19)],實(shí)驗(yàn)組的p-AKT[蛋白相對(duì)含量為(0.20±0.05)]、p-mTOR[蛋白相對(duì)含量為(0.72±0.25)]也呈現(xiàn)低表達(dá)的狀態(tài)(圖2),說(shuō)明姜黃素阻斷PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)通路,進(jìn)而改變上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過(guò)程。

    3討論

    肺腺癌的治療是一個(gè)多學(xué)科綜合治療的過(guò)程,包括手術(shù)、化療和靶向治療等。吉非替尼作為治療肺腺癌的臨床一線化療藥物應(yīng)用十分廣泛,主要從三個(gè)方面發(fā)揮藥理作用:①競(jìng)爭(zhēng)EGFR-TK催化區(qū)域上Mg-ATP結(jié)合位點(diǎn),阻斷其信號(hào)傳遞;②抑制有絲分裂原活化蛋白激酶的活化,促進(jìn)細(xì)胞凋亡;③抑制腫瘤血管[5]。但臨床上常發(fā)生腫瘤細(xì)胞對(duì)其產(chǎn)生耐藥的現(xiàn)象從而導(dǎo)致化療失敗和預(yù)后不良[6]。腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥(MDR)可分為原發(fā)性耐藥和獲得性耐藥兩種類(lèi)型[7]。

    目前,普遍認(rèn)為肺腺癌的轉(zhuǎn)移和侵襲過(guò)程以及獲得耐藥能力的過(guò)程中均可能與EMT有關(guān)。李優(yōu)等[8]研究表明,通過(guò)干預(yù)PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路可以使EMT相關(guān)的E-鈣粘蛋白、波形蛋白表達(dá)發(fā)生改變,從而減弱經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力。腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化時(shí),一些經(jīng)典的信號(hào)傳導(dǎo)通路已經(jīng)被證實(shí),如HGF/c-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、轉(zhuǎn)錄因子Snail家族、β-連環(huán)蛋白通路、β-連環(huán)蛋白與磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B途徑等[9-11]。此外還有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移侵襲與其發(fā)生EMT時(shí)腫瘤細(xì)胞的基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)上調(diào)、改變細(xì)胞微環(huán)境有關(guān)[12]。由此可見(jiàn),通過(guò)干預(yù)腫瘤細(xì)胞EMT的發(fā)生能夠成為治療癌癥的新方向。

    姜黃素可以通過(guò)多種途徑干預(yù)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為,如 Wnt/β-catenin 信號(hào)傳導(dǎo)通路、PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路、細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB) 和STAT-3 信號(hào)通路等[8,13,14]。龐慧芳等[15]通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)姜黃素能夠逆轉(zhuǎn)TGF-β1誘導(dǎo)的胰腺癌 PANC-1 細(xì)胞的EMT過(guò)程,降低胰腺癌的惡性程度從而達(dá)到治療的目的。姜黃素的抗腫瘤作用越來(lái)越被重視。美國(guó)國(guó)立癌癥研究所已經(jīng)將其列為第三代抗癌預(yù)防藥,因?yàn)槠渲委熜Ч@著、不良反應(yīng)少、安全性高等特點(diǎn),在日本廣泛應(yīng)用[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相比于親代耐藥細(xì)胞,經(jīng)姜黃素處理的耐吉非替尼肺腺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼的敏感性明顯改善;轉(zhuǎn)移和侵襲能力也相應(yīng)地減弱;上皮間質(zhì)化標(biāo)志蛋白Vimentin表達(dá)下調(diào),E-cadherin表達(dá)上調(diào)。上述結(jié)果均說(shuō)明姜黃素對(duì)耐吉非替尼肺腺癌生物學(xué)行為的改變甚至逆轉(zhuǎn)上皮間質(zhì)化的過(guò)程。

    在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中,PI3K/AKT/mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路扮演著重要角色[17]。在多種惡性腫瘤細(xì)胞中均能發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT/mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路處于異常激活狀態(tài),與惡性腫瘤的各種生物學(xué)行為密切相關(guān)[18]。因此,針對(duì)該信號(hào)通路的研究和靶向藥物的應(yīng)用成為熱點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)使PI3K/AKT/ARK5信號(hào)通路處于活化狀態(tài)促進(jìn)Snail蛋白進(jìn)細(xì)胞核從而使細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)化[19,20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相比于親代耐藥細(xì)胞,姜黃素改變耐吉非替尼肺腺癌細(xì)胞的AKT、mTOR蛋白磷酸化。上述結(jié)果同時(shí)與Vimentin表達(dá)下調(diào)、E-cadherin表達(dá)上調(diào)相吻合,共同說(shuō)明經(jīng)姜黃素處理后,耐吉非替尼肺腺癌上皮間質(zhì)化的過(guò)程被阻斷甚至逆轉(zhuǎn)。

    結(jié)合國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示姜黃素對(duì)耐吉非替尼肺腺癌上皮間質(zhì)化有明顯作用,為下一步實(shí)驗(yàn)提供了理論基礎(chǔ),進(jìn)一步研究分子機(jī)制,通過(guò)基因檢測(cè)等其他手段明確姜黃素藥理作用與EMT的內(nèi)在聯(lián)系,為逆轉(zhuǎn)EMT以及抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展提供新的證據(jù)。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Goel A,Kunnumakkara AB,Aggarwal BB. Curcumin as "Curecumin":From kitchen to clinic[J]. Biochemical Pharmacology,2008,75(4):787-809.

    [2] Ha GH,Park JS,Breuer EK. TACC3 promotes epithelial-mesenchymal transition(EMT) through the activation of PI3K/Akt and ERK signaling pathways[J]. Cancer Letters,2013,332(1):63-73.

    [3] Wungki Park,ARM Ruhul Amin,Zhuo Georgia Chen,et al.New perspectives of curcumin in cancer prevention[J]. Cancer Prevention Research,2013,6(5):387-400.

    [4] 高艷,崔廣智,李慧穎,等. 姜黃素、小檗堿及其配伍對(duì)db/db小鼠糖脂代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響[J]. 天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,30(1):33-35.

    [5] 劉園園,張學(xué)飛,馮剛玲,等. 吉非替尼聯(lián)合放療治療非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移臨床療效Meta分析[J]. 中華腫瘤防治雜志,2016,23(2):121-127.

    [6] 李海英,王慶苓,包海軍,等. TRIM24介導(dǎo)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥機(jī)制探討[J]. 中國(guó)肺癌雜志,2016,19(1):24-29.

    [7] Batista TP,Santos CA,Almeida GF. Perioperative chemo-therapy in locally advanced gastric cancer[J]. Arquivos De Gastroenterologia,2013,50(3):236-242.

    [8] 李優(yōu),王劍,牟好,等. 姜黃素通過(guò)PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[J]. 腫瘤學(xué)雜志,2016,22(8):607-614.

    [9] Zha L,Zhang J,Tang W,et al. HMGA2 elicits EMT by activating the Wnt/β-catenin pathway in gastric cancer[J].Dig Dis Sci,2013,58(3):724-733.

    [10] Cong N,Du P,Zhang A,et al. Downregulated microRNA-200a promotes EMT and tumor growth through the wnt/β-catenin pathway by targeting the E-cadherin repressors ZEB1/ZEB2 in gastric adenocarcinoma[J]. Oncol Rep,2013,29(4):1579-1587.

    [11] Vivanco I,Sawyers CL.The phosphatidylinositol 3-Kinase[ndash]AKT pathway in human cancer[J]. Nature Reviews Cancer,2002,2(7):489-501.

    [12] Yoo YA,Kang MH,Lee HJ,et al. Sonic hedgehog pathway promotes metastasis and lymphangiogenesis via activation of Akt,EMT,and MMP-9 pathway in gastric cancer[J]. Cancer Research,2011,71(22):7061-7070.

    [13] 楊正生,李力,王亞斐. 姜黃素對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥物與臨床, 2013,13(3):341-343.

    [14] 趙軼峰,魏玉磊,王萍,等. 姜黃素抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2016,25(29):3202-3204.

    [15] 龐慧芳,覃華,趙秋,等. 姜黃素對(duì)胰腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響[J]. 世界華人消化雜志,2014,18(1):2565-2571.

    [16] 楊春梅,張林西. 姜黃素逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述,2011,17(5):704-706.

    [17] Lim M,Chuong CM,Roy-Burman P. PI3K,erk signaling in BMP7-induced epithelial-mesenchymal transition (EMT) of PC-3 prostate cancer cells in 2-and 3-Dimensional cultures[J]. Hormones and Cancer,2011,2(5):298-309.

    [18] Bitting RL,Armstrong AJ. Targeting the PI3K/Akt/mTOR pathway in castration-resistant prostate cancer[J]. Endocrine Related Cancer,2013,20(3):83-99.

    [19] 楊海平. TGF-β經(jīng)典信號(hào)通路及相關(guān)基因調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究[D].蘇州大學(xué),2015.

    [20] 任志濤. 小檗堿對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)A549細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和MRC-5細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及細(xì)胞信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響[D]. 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院,北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部,中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院,2015.

    (收稿日期:2016-07-09)

    猜你喜歡
    肺腺癌姜黃素生物學(xué)特性
    星點(diǎn)設(shè)計(jì)—效應(yīng)面法優(yōu)化姜黃素提取工藝
    靶向沉默RACK1基因?qū)Ψ蜗侔┞闶笠浦擦錾L(zhǎng)的抑制作用
    肺腺癌縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影像學(xué)規(guī)律及轉(zhuǎn)移影響因素分析
    山楂在城市園林綠化中的應(yīng)用
    當(dāng)歸防早期抽薹栽培技術(shù)
    平菇的室內(nèi)栽培方法
    當(dāng)歸生物學(xué)特性及無(wú)公害栽培研究
    云南山地仿野生撫育姜黃后姜黃素的含量變化研究
    培美曲塞聯(lián)合順鉑治療中晚期肺腺癌療效觀察
    G—RH2誘導(dǎo)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究
    首页视频小说图片口味搜索| 一区二区三区激情视频| 禁无遮挡网站| 亚洲美女黄片视频| 久久久久久人人人人人| 自线自在国产av| 村上凉子中文字幕在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| av中文乱码字幕在线| 自线自在国产av| 亚洲成人久久性| 成年女人毛片免费观看观看9| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一本久久中文字幕| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲成av人片免费观看| 一本一本综合久久| 久久精品成人免费网站| 日韩高清综合在线| 日韩高清综合在线| 国产色视频综合| 真人一进一出gif抽搐免费| 男人操女人黄网站| 午夜精品久久久久久毛片777| 日韩有码中文字幕| 在线看三级毛片| 成年女人毛片免费观看观看9| 99热这里只有精品一区 | 看黄色毛片网站| 黄色a级毛片大全视频| 一级毛片精品| 亚洲av成人一区二区三| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久国产精品人妻蜜桃| 日日夜夜操网爽| 在线观看舔阴道视频| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美成人午夜精品| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久精品人妻少妇| 成人三级黄色视频| 国产主播在线观看一区二区| 99精品欧美一区二区三区四区| АⅤ资源中文在线天堂| 国产三级黄色录像| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产精品av久久久久免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美日韩乱码在线| 国产高清有码在线观看视频 | 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久亚洲真实| 久久九九热精品免费| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产色视频综合| 一级作爱视频免费观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲免费av在线视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品日产1卡2卡| 日本在线视频免费播放| 我的亚洲天堂| 中文字幕久久专区| 一本综合久久免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品久久久av美女十八| 免费av毛片视频| 久久久国产精品麻豆| av视频在线观看入口| 十八禁人妻一区二区| 国产成人av教育| 欧美色欧美亚洲另类二区| www.精华液| 国产激情欧美一区二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 不卡av一区二区三区| 成人特级黄色片久久久久久久| 999久久久国产精品视频| 精品久久久久久,| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产黄a三级三级三级人| 欧美成人性av电影在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 国产av又大| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产成人啪精品午夜网站| 99国产精品99久久久久| 又黄又爽又免费观看的视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 少妇粗大呻吟视频| 久久久久久九九精品二区国产 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产在线观看jvid| 国产精品二区激情视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 一级片免费观看大全| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 成年人黄色毛片网站| 热99re8久久精品国产| 国产v大片淫在线免费观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产免费男女视频| 女同久久另类99精品国产91| 精品电影一区二区在线| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产激情久久老熟女| 久久久久久久久中文| 欧美日韩精品网址| 大型黄色视频在线免费观看| 国产一区在线观看成人免费| 欧美激情 高清一区二区三区| 黄色视频,在线免费观看| 日本 欧美在线| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久热在线av| 亚洲午夜理论影院| 美女国产高潮福利片在线看| 久久精品91蜜桃| 国产亚洲精品第一综合不卡| 宅男免费午夜| 欧美激情高清一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 久久这里只有精品19| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 国产高清有码在线观看视频 | 久久久久久大精品| 国产精品久久视频播放| av片东京热男人的天堂| 国产人伦9x9x在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 午夜视频精品福利| 亚洲片人在线观看| a级毛片a级免费在线| 视频在线观看一区二区三区| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 老司机深夜福利视频在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 国产爱豆传媒在线观看 | 欧美激情 高清一区二区三区| av在线天堂中文字幕| 麻豆av在线久日| 热99re8久久精品国产| 高清在线国产一区| 热re99久久国产66热| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 村上凉子中文字幕在线| 免费高清视频大片| 欧美在线一区亚洲| 免费在线观看黄色视频的| www国产在线视频色| 国产亚洲欧美98| 午夜久久久久精精品| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 色哟哟哟哟哟哟| 香蕉av资源在线| 国产高清有码在线观看视频 | 一个人观看的视频www高清免费观看 | 热99re8久久精品国产| 国产成人啪精品午夜网站| 国产激情欧美一区二区| 久久香蕉精品热| 午夜福利18| 国产av不卡久久| 久久亚洲真实| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一级毛片高清免费大全| 国产午夜福利久久久久久| 午夜福利一区二区在线看| 日韩欧美免费精品| 99在线视频只有这里精品首页| 男女那种视频在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 12—13女人毛片做爰片一| 他把我摸到了高潮在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 热99re8久久精品国产| 精品久久久久久成人av| netflix在线观看网站| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产av一区二区精品久久| 成人午夜高清在线视频 | www.自偷自拍.com| 在线免费观看的www视频| 男女视频在线观看网站免费 | www.熟女人妻精品国产| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 黄色a级毛片大全视频| 日韩精品青青久久久久久| 国产成人av教育| 国产野战对白在线观看| 丰满的人妻完整版| 俄罗斯特黄特色一大片| 免费在线观看黄色视频的| 我的亚洲天堂| 在线观看www视频免费| 亚洲成人国产一区在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 丁香六月欧美| 国产99白浆流出| 99热只有精品国产| 在线观看午夜福利视频| 午夜久久久在线观看| 国产99久久九九免费精品| 无限看片的www在线观看| 久久人人精品亚洲av| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 中文字幕久久专区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99热只有精品国产| 91国产中文字幕| 午夜久久久久精精品| 成年版毛片免费区| 美女大奶头视频| 香蕉丝袜av| 亚洲成国产人片在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久 成人 亚洲| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 又大又爽又粗| 正在播放国产对白刺激| 黄色成人免费大全| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 757午夜福利合集在线观看| 99re在线观看精品视频| 国产黄色小视频在线观看| 无人区码免费观看不卡| 看黄色毛片网站| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 99在线视频只有这里精品首页| xxx96com| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 成人av一区二区三区在线看| 免费高清视频大片| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲人成网站高清观看| 丝袜在线中文字幕| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美日韩一级在线毛片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 成人国产一区最新在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲色图av天堂| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美成狂野欧美在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 黑丝袜美女国产一区| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 成人精品一区二区免费| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人免费观看视频高清| 99久久精品国产亚洲精品| 看黄色毛片网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 在线观看免费视频日本深夜| 男女床上黄色一级片免费看| 99久久精品国产亚洲精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 12—13女人毛片做爰片一| 国产黄a三级三级三级人| 国产真实乱freesex| 久久青草综合色| 午夜福利高清视频| 露出奶头的视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 在线国产一区二区在线| 亚洲精品一区av在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 99国产精品一区二区三区| 午夜福利一区二区在线看| 国产欧美日韩一区二区精品| 日日爽夜夜爽网站| 18禁观看日本| 亚洲中文av在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产亚洲精品av在线| av天堂在线播放| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲五月婷婷丁香| 男女那种视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 色综合欧美亚洲国产小说| 黄色成人免费大全| 深夜精品福利| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩欧美 国产精品| 亚洲av美国av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 中文字幕高清在线视频| 午夜福利高清视频| 欧美激情高清一区二区三区| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 一级毛片高清免费大全| 午夜福利18| 精品久久久久久久末码| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 午夜福利高清视频| 欧美日韩乱码在线| 国产av一区在线观看免费| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品一区二区三区四区久久 | 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久久久久九九精品二区国产 | 久久久精品欧美日韩精品| 欧美一级毛片孕妇| 手机成人av网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久性视频一级片| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美黑人巨大hd| 午夜免费鲁丝| 好男人电影高清在线观看| 男女午夜视频在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲色图av天堂| 老汉色av国产亚洲站长工具| aaaaa片日本免费| 99国产精品一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 成人手机av| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 久久久国产成人免费| 亚洲午夜理论影院| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产色视频综合| netflix在线观看网站| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久精品成人免费网站| 欧美一级a爱片免费观看看 | 亚洲 国产 在线| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 妹子高潮喷水视频| 午夜福利免费观看在线| 国产成人欧美在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 日韩欧美三级三区| a在线观看视频网站| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 午夜福利一区二区在线看| 精品欧美国产一区二区三| 看片在线看免费视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 午夜免费激情av| 香蕉久久夜色| 1024香蕉在线观看| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 黄片小视频在线播放| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产一区在线观看成人免费| 男人操女人黄网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| aaaaa片日本免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 嫩草影院精品99| 国产高清videossex| 日韩欧美国产一区二区入口| 人成视频在线观看免费观看| 看免费av毛片| 国产精品久久久av美女十八| 欧美成狂野欧美在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲av五月六月丁香网| 男女床上黄色一级片免费看| 国产97色在线日韩免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 黄频高清免费视频| 日本一本二区三区精品| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产伦在线观看视频一区| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久香蕉激情| 成年版毛片免费区| 午夜福利免费观看在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲国产精品sss在线观看| 香蕉国产在线看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产亚洲欧美在线一区二区| 色尼玛亚洲综合影院| 午夜福利在线在线| 午夜福利在线观看吧| 看黄色毛片网站| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美三级亚洲精品| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 香蕉av资源在线| 国产精品久久电影中文字幕| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久精品国产亚洲av高清一级| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产主播在线观看一区二区| x7x7x7水蜜桃| 亚洲专区国产一区二区| 天天添夜夜摸| 国产精品一区二区免费欧美| 午夜福利欧美成人| 亚洲人成伊人成综合网2020| 91成人精品电影| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 免费在线观看黄色视频的| 女同久久另类99精品国产91| 国产黄a三级三级三级人| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲国产精品999在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品一区二区精品视频观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 草草在线视频免费看| 欧美黄色淫秽网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 嫁个100分男人电影在线观看| 超碰成人久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲国产看品久久| 免费在线观看成人毛片| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产精品 欧美亚洲| 国产野战对白在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 国产午夜福利久久久久久| 欧美黑人巨大hd| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品第一国产精品| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 在线观看www视频免费| 久久亚洲真实| 亚洲最大成人中文| 久久久久久国产a免费观看| 黄色a级毛片大全视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99久久国产精品久久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 1024视频免费在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久国产欧美日韩av| 女警被强在线播放| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 亚洲人成网站高清观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品久久蜜臀av无| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美大码av| 国产av一区二区精品久久| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| av中文乱码字幕在线| 精品无人区乱码1区二区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 日韩精品青青久久久久久| 好男人在线观看高清免费视频 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产精品影院久久| 国产欧美日韩一区二区精品| 动漫黄色视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 18禁国产床啪视频网站| 国产久久久一区二区三区| 美女午夜性视频免费| 91麻豆av在线| 国产精品久久久av美女十八| 两人在一起打扑克的视频| 波多野结衣高清无吗| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 好男人电影高清在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99在线视频只有这里精品首页| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 成人特级黄色片久久久久久久| 99riav亚洲国产免费| 久久国产精品影院| 色精品久久人妻99蜜桃| 一本综合久久免费| 日本免费a在线| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产伦人伦偷精品视频| 久久精品国产综合久久久| 91成年电影在线观看| 9191精品国产免费久久| 露出奶头的视频| 午夜日韩欧美国产| 久久久国产精品麻豆| 看黄色毛片网站| 久久久久久久午夜电影| 久久 成人 亚洲| 1024香蕉在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 一a级毛片在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 男人舔女人下体高潮全视频| 校园春色视频在线观看| 亚洲第一av免费看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 在线视频色国产色| xxxwww97欧美| 国产成人系列免费观看| 欧美中文日本在线观看视频| 精华霜和精华液先用哪个| 少妇的丰满在线观看| 久久狼人影院| 99热这里只有精品一区 | 中文字幕人妻熟女乱码| 老熟妇仑乱视频hdxx| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲 国产 在线| 国内精品久久久久久久电影| 嫩草影视91久久| av片东京热男人的天堂| 丁香欧美五月| 色av中文字幕| 草草在线视频免费看| 中文在线观看免费www的网站 | 天堂动漫精品| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人精品一区二区免费| 嫩草影院精品99| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产成人精品久久二区二区91| 国产乱人伦免费视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久精品91蜜桃| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲精品国产区一区二| av福利片在线| 男人舔奶头视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 色尼玛亚洲综合影院| 在线免费观看的www视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 午夜福利免费观看在线| 国产精品亚洲美女久久久| 国产成人精品无人区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美乱妇无乱码| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美中文日本在线观看视频| 国产一区在线观看成人免费| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日韩欧美三级三区| 成人欧美大片| 免费看美女性在线毛片视频| 手机成人av网站| 一区二区三区精品91| 免费在线观看影片大全网站| 一进一出抽搐动态| 丁香欧美五月| 高清在线国产一区| 国产av不卡久久| 国产熟女xx| 两个人视频免费观看高清| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 欧美成狂野欧美在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 国产单亲对白刺激| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 91老司机精品| 露出奶头的视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久精品成人免费网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产麻豆成人av免费视频| 一级a爱片免费观看的视频|