不同血清學(xué)方法對(duì)調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)包蟲(chóng)病患者血清的檢測(cè)及評(píng)價(jià)

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摘要：目的 探討對(duì)于調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)包蟲(chóng)病患者應(yīng)用不同血清學(xué)方法進(jìn)行血清檢測(cè)的效用。方法 采用3種囊型包蟲(chóng)抗Dot-ELISA和IHA以及ELISA，1種泡型包蟲(chóng)EM18抗原ELIB檢測(cè)臨床確診120例包蟲(chóng)病患者的血清。結(jié)果 經(jīng)B超和X線影像學(xué)檢測(cè)確診的120例包蟲(chóng)病患者，應(yīng)用不同血清檢驗(yàn)方法檢查的結(jié)果中，囊型包蟲(chóng)病和泡型包蟲(chóng)病各有109例和11例，其中泡型包蟲(chóng)病使用Dot-ELIS、IHA、ELISA該3種血清檢驗(yàn)法與B超和X線影像學(xué)檢測(cè)結(jié)果等同；肺臟包蟲(chóng)病患者應(yīng)用囊型包蟲(chóng)抗原IHA檢測(cè)血清陽(yáng)性率低于其它部位血清陽(yáng)性率，但Dot-ELISA檢驗(yàn)和IHA檢驗(yàn)及ELISA檢驗(yàn)所檢出的血清陽(yáng)性率相近。結(jié)論 通過(guò)甄別不同血清學(xué)對(duì)包蟲(chóng)病的檢測(cè)效用，能夠?yàn)榕R床治療和積極預(yù)防控制包蟲(chóng)病的流行提供可靠依據(jù)，具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：血清學(xué)方法；包蟲(chóng)病；預(yù)防控制

包蟲(chóng)病多見(jiàn)于新疆、內(nèi)蒙和青海等農(nóng)牧區(qū)，導(dǎo)致棘球絳及其幼蟲(chóng)寄生人體的原因有農(nóng)牧民習(xí)俗和宗教信仰等原因。隨著包蟲(chóng)病感染病例的增多，也使得醫(yī)療機(jī)構(gòu)提高了預(yù)防控制包蟲(chóng)病流行的力度。而影像檢查技術(shù)不容易及時(shí)發(fā)現(xiàn)囊腫或腫塊從而導(dǎo)致誤診，本文將探討通過(guò)檢測(cè)包蟲(chóng)病患者血清的免疫學(xué)方法對(duì)該病進(jìn)行檢測(cè)，以達(dá)到預(yù)防控制包蟲(chóng)病流行的效用；現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1抗原與血樣 從新宰綿羊肝臟或肺臟提取棘球蚴囊液，用pH 9.6的碳酸鹽稀釋使其蛋白質(zhì)含量達(dá)到50 μg/ml；采用預(yù)包被板和包蟲(chóng)病抗體檢測(cè)試劑盒等。血樣采自流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)，經(jīng)我B超和X線檢查確診的120例包蟲(chóng)病患者的血清各取5 ml，也抽取非包蟲(chóng)病體檢者陰性血清作為參照，血清經(jīng)分離后保存待用。

1.2檢驗(yàn)方法 檢測(cè)方法有：點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)（Dot-ELIS）和微量間接血凝檢驗(yàn)法（IHA），酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)（ELISA）和EM18免疫印漬檢驗(yàn)（EM18-ELIB）。②Dot-ELIS檢驗(yàn)將抗原吸附在PVC反應(yīng)板表面，待充分反應(yīng)后用洗滌法徹底清除游離殘余。②IHA檢驗(yàn)抗原載體經(jīng)金屬陽(yáng)離子靜電作用讓蛋白質(zhì)與紅細(xì)胞表面結(jié)合達(dá)到致敏效果，并在微量滴定板上以1：64比例稀釋再加入致敏紅細(xì)胞懸液1滴，混勻1～2 h后觀察紅細(xì)胞凝集程度以確定陽(yáng)性反應(yīng)孔為滴度終點(diǎn)。③ELISA檢驗(yàn)將棘球蚴囊液抗原稀釋至每孔內(nèi)含蛋白質(zhì)10 μg/ml，其中IgG抗原酶結(jié)合物工作濃度為1：200。顯色采用TMBS底物，陽(yáng)性臨界值以x+3s≥陰性為對(duì)照。④EM18-ELIB檢驗(yàn)抗原采用泡型包蟲(chóng)原頭蚴粗抗原，SDS-PAGE電泳結(jié)束后再轉(zhuǎn)至NC膜制成抗原膜條，再用所制成的抗原膜條做Western Bolt檢驗(yàn)，血清稀釋比例為1：100，IgG抗原酶結(jié)合物按1：100比例稀釋然后經(jīng)BA底物顯色反應(yīng)后，若8 kDa處出現(xiàn)反應(yīng)帶可判斷為陽(yáng)性。

1.3數(shù)據(jù)處理 采用SPSS17.0軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料使用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)；以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同血清檢驗(yàn)方法的檢測(cè)結(jié)果 經(jīng)B超和X線影像學(xué)檢測(cè)確診的120例包蟲(chóng)病患者，應(yīng)用不同血清檢驗(yàn)方法檢查的結(jié)果中，囊型包蟲(chóng)病和泡型包蟲(chóng)病各有109例和11例，其中對(duì)泡型包蟲(chóng)病使用Dot-ELIS、IHA、ELISA該3種血清檢驗(yàn)法與B超和X線影像學(xué)檢測(cè)結(jié)果等同，Dot-ELIS、IHA、ELISA和EM18-ELIB這4中血清檢驗(yàn)法也與上述檢測(cè)方法所得出的結(jié)果等同，見(jiàn)表1。

2.2不同血清學(xué)方法對(duì)包蟲(chóng)病患不同位置的檢測(cè)結(jié)果 肺臟包蟲(chóng)病患者應(yīng)用囊型包蟲(chóng)抗原IHA檢測(cè)血清陽(yáng)性率低于其它部位血清陽(yáng)性率，但Dot-ELISA檢驗(yàn)和IHA檢驗(yàn)及ELISA檢驗(yàn)所檢出的血清陽(yáng)性率相近，見(jiàn)表2。

3討論

包蟲(chóng)病容易寄生于人體組織和器官以至于臨床難以依據(jù)病原學(xué)進(jìn)行確診，所以臨床對(duì)于包蟲(chóng)病的檢測(cè)通常將查體和影像學(xué)以及免疫學(xué)等檢驗(yàn)結(jié)果做綜合性判斷。影像學(xué)檢驗(yàn)雖然能夠有較高檢出率，但影像檢查技術(shù)不容易及時(shí)發(fā)現(xiàn)囊腫或腫塊從而導(dǎo)致誤診。而包蟲(chóng)病作為地方性疾病，由于感染病例的增多也相應(yīng)提高臨床對(duì)其的重視程度。

本次探討中不同檢驗(yàn)方法對(duì)囊型和泡型包蟲(chóng)病敏感程度也不盡相同，其中Dot-ELISA抗原和IHA抗原對(duì)于該兩型包蟲(chóng)病的敏感度相似。對(duì)泡型包蟲(chóng)病使用Dot-ELIS、IHA、ELISA該3種血清檢驗(yàn)法與B超和X線影像學(xué)檢測(cè)結(jié)果等同，但ELISA抗原檢出囊型包蟲(chóng)陽(yáng)性率低于Dot-ELISA和IHA檢驗(yàn)法，說(shuō)明該兩種囊型包蟲(chóng)生理和生化代謝各異。因此，需要在臨床診斷中加強(qiáng)檢測(cè)的敏感度。

泡球蚴缺乏完整角質(zhì)層使得故血清中抗多含有囊型包蟲(chóng)病，B超和影像檢驗(yàn)出的鈣化的囊型或灶型包蟲(chóng)病多分布于肝、肺2臟，血清學(xué)檢驗(yàn)方法不易檢出的原因，通常為包蟲(chóng)囊腫生長(zhǎng)受到抑制后出現(xiàn)退行性改變，減少了血清抗體滴度導(dǎo)致血清學(xué)方法難以發(fā)現(xiàn)特異性抗體[1]。此外，還需看到本次檢測(cè)結(jié)果中還存在肝臟、肺臟的囊塊符合影像征象，但3種血清學(xué)檢查結(jié)果均不支持該結(jié)果，這也說(shuō)明對(duì)包蟲(chóng)病的診斷需綜合臨床和各類(lèi)檢驗(yàn)結(jié)果做出判斷。

本次探討可見(jiàn)囊型和泡型該2型包蟲(chóng)病的致病性及診療方法各異，也導(dǎo)致了臨床需審慎做出判斷。在鈣化的灶型或囊型中若EM18-ELIB檢查為陽(yáng)性則可考慮為泡型包蟲(chóng)病，而單發(fā)單囊包蟲(chóng)患者血清呈陽(yáng)性則說(shuō)明囊型包蟲(chóng)也會(huì)分泌出EM18抗原，同時(shí)也說(shuō)明種棘球絳蟲(chóng)的生理生化代謝因種類(lèi)不同其差異也不盡相同[2]。據(jù)盧愛(ài)桃，郭衛(wèi)東，宋壯志，等報(bào)道[3]，目前通過(guò)將泡型包蟲(chóng)的原頭節(jié)進(jìn)行分離發(fā)現(xiàn)其具有EM2、EM2a和EM18特異性抗原，也說(shuō)明泡型包蟲(chóng)有特異性較強(qiáng)，與本文所探討的結(jié)果具有一致性。

綜上，通過(guò)采用不同血清學(xué)對(duì)包蟲(chóng)病進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)比各種檢查方法的檢測(cè)結(jié)果的敏感度和準(zhǔn)確率，便于臨床分析各種檢測(cè)方法的效用，有助于臨床對(duì)包蟲(chóng)病作出準(zhǔn)確的診療判斷，進(jìn)而可以起到積極預(yù)防控制包蟲(chóng)病的流行的作用。

參考文獻(xiàn)：

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[2]高春花，汪俊云，楊玥濤.等.5種抗原檢測(cè)囊型包蟲(chóng)病血清學(xué)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2012，28（8）：811-814.

[3]盧愛(ài)桃，郭衛(wèi)東，宋壯志，等.呼和浩特農(nóng)村地區(qū)人群包蟲(chóng)病血清學(xué)調(diào)查研究[J].醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制，2013，29（2）：184-185.

編輯/孫杰