不同培養(yǎng)因素對黑玫瑰石竹叢生芽增殖的影響

張引引 孫寧 陳小強(qiáng) 張菁雯

摘 要：研究多種因素對黑玫瑰石竹組培快繁中叢生芽分化增殖培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明：叢生芽增殖培養(yǎng)以MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，增加或減少大量礦質(zhì)元素不利于叢生芽的誘導(dǎo)；NAA/6-BA為0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1的激素配比有利于叢生芽的增殖，在此基礎(chǔ)上添加谷氨酰胺100 mg·L-1，可提高增殖數(shù)達(dá)9.4；選用蔗糖15 g·L-1為增殖培養(yǎng)的碳源，在提高增殖效果的同時(shí)可有效降低成本。

關(guān)鍵詞：黑玫瑰石竹；組織培養(yǎng)；叢生芽；增殖系數(shù)

中圖分類號：S682.1+9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2016.08.031

Abstract：The stems of Dianthus Linn were used as explants and the different effect factors on bud clusters propagation were studied. The results showed that the best medium was MS； NAA 0.1 mg·L-1 +6-BA 1.0 mg·L-1 + Gln 100 mg·L-1 was an optimum concentration for bud differentiation， the propagation coefficient was 9.4； the propagation coefficient could be remained at a high level and the cost could be reduced in sucrose 15 g·L-1.

Key words： Dianthus Linn； tissue culture； bud clusters； propagation coefficient

石竹科植物是重要的觀賞園藝植物，全世界共75個屬，約2 000種，我國有30屬388種，分布于全國各地[1-2]。黑玫瑰石竹是石竹科石竹屬多年生草本植物，重瓣花型，花瓣黑紫色嵌白邊、質(zhì)如絲絨，株高30～50 cm，各地可種植，可用作盆栽、切花、花壇等栽植，觀賞價(jià)值極高。黑玫瑰石竹不易用種子繁殖，易產(chǎn)生品種混雜，不能保持原品種的優(yōu)良品質(zhì)，而傳統(tǒng)扦插繁殖易造成病毒害，切花質(zhì)量變劣，栽培質(zhì)量下降[3-4]。對黑玫瑰石竹組織培養(yǎng)技術(shù)的研究，不僅可以開展種苗的快繁，而且還可以結(jié)合脫毒技術(shù)實(shí)現(xiàn)無毒苗的生產(chǎn)，研究結(jié)果可為這一新特花卉品種的規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)參考。本研究以黑玫瑰石竹試管苗莖段為試材，對外源激素、大量礦質(zhì)元素、碳源、有機(jī)添加物及活性炭等多種因素對叢生芽增殖的影響進(jìn)行了研究。

1 材料和方法

1.1 材 料

試驗(yàn)材料為市售北京花仙子園藝黑玫瑰石竹種子。

1.2 方 法

1.2.1 初代培養(yǎng) 選取顆粒飽滿的黑玫瑰石竹種子，清水沖洗清潔，無菌條件下用70%乙醇浸泡30 s后，0.1%HgCl2浸泡7 min，無菌水沖洗4～5次。將表面滅菌后的種子接入初代培養(yǎng)基MS+蔗糖30 g·L-1，光照培養(yǎng)。

1.2.2 繼代培養(yǎng) 黑玫瑰石竹種子經(jīng)初代培養(yǎng)20～30 d，即可獲得無菌實(shí)生苗。將初代培養(yǎng)獲得的實(shí)生試管苗剪切為1.5～2 cm莖段，接入不同處理的繼代增殖培養(yǎng)基中。接種后放于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：（25±2） ℃、光照強(qiáng)度2 000～3 000 Lx、光照時(shí)長14 h·d-1。培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)苗的生長狀況，調(diào)查記錄試管苗的株高、芽增殖數(shù)、生根情況等指標(biāo)。

（1）外源激素處理。以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖30 g·L-1。NAA/6-BA和 NAA/KT 2種激素配比分別設(shè)置6個處理：①0.1 mg·L-1/0.5 mg·L-1；②0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1；③0.1 mg·L-1/1.5 mg·L-1；④0.2 mg·L-1/0.5 mg·L-1；⑤0.2 mg·L-1/1.0 mg·L-1；⑥0.2 mg·L-1/1.5 mg·L-1。

（2）碳源處理。采用MS為基本培養(yǎng)基，附加（1）中篩選的適宜激素配比。培養(yǎng)基蔗糖、白砂糖和麥芽糖為碳源，每種碳源設(shè)15 g·L-1和30 g·L-12個濃度處理。

（3）大量元素處理。分別采用MS、1/2 MS、1/4 MS和2 MS為基本培養(yǎng)基，附加（1）中篩選的適宜激素配比，蔗糖30 g·L-1。

（4）添加物處理。采用MS為基本培養(yǎng)基，附加（1）中篩選的適宜激素配比，蔗糖30 g·L-1。培養(yǎng)基中添加水解乳蛋白（LH，100 mg·L-1）、谷氨酰胺（Gln，100 mg·L-1）、椰汁（100 ml·L-1）和活性炭（2 g·L-1）共4個處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源激素對叢生芽誘導(dǎo)與增殖的影響

培養(yǎng)基中添加植物生長素和細(xì)胞分裂素能促進(jìn)芽或根的分化。不同的NAA/6-BA濃度比對黑玫瑰石竹的芽增殖及株高影響不同，具體影響結(jié)果見表1。

由表1可見，當(dāng)NAA濃度一定時(shí)，隨6-BA濃度的增大，莖長和增殖系數(shù)都有升高的趨勢。當(dāng)NAA 0.1 mg·L-1、6-BA 1.5 mg·L-1時(shí)，增殖系數(shù)高于其它各個處理，且平均株高最高，但此時(shí)由于6-BA濃度過高，部分植株出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。處理3、5的NAA/6-BA比例均為0.2，其增殖系數(shù)相近，但處理5的試管苗莖細(xì)弱，不易移栽成活。因此，綜合叢生芽增殖以及植株的生長情況，采用處理2即NAA/6-BA為0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1時(shí)，適宜黑玫瑰石竹叢生芽的分化增殖。

不同NAA/KT濃度比對黑玫瑰石竹試管苗芽增殖的影響見表2。