高效液相色譜法測定鞣柳硼三酸散中水楊酸含量

曹桂紅，黃春青，許　波，周　欣

(1.貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽　550004；2.貴州師范大學 天然藥物質(zhì)量控制研究中心，貴州 貴陽　550001)

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高效液相色譜法測定鞣柳硼三酸散中水楊酸含量

曹桂紅1，黃春青1，許波1，周欣2

(1.貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽550004；2.貴州師范大學 天然藥物質(zhì)量控制研究中心，貴州 貴陽550001)

摘要：通過采用高效液相色譜法，建立了對鞣柳硼三酸散中水楊酸的含量測定方法。以Agilent SB-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)為流動相，檢測波長305nm，流速1.0mL/min，25℃柱溫，在此優(yōu)化的條件下，水楊酸在0.063 44～1.268 8μg之間線性關(guān)系良好(r=1.000 0，n=5)，回收率為101.26%，RSD為0.48%(n=9)。該方法簡便、準確，可用于鞣柳硼三酸散中水楊酸的含量測定，對控制制劑質(zhì)量有一定指導意義。

關(guān)鍵詞：鞣柳硼三酸散；水楊酸；高效液相色譜法

0引言

鞣柳硼三酸散是由鞣酸、水楊酸、硼酸組成的外用復合制劑，具有防腐收斂，殺菌止癢的功效，主要用于手、足癬的治療。收載于《國家藥品標準》化學藥品地方標準上升國家標準第十冊[1-4]。其中水楊酸具有抗菌作用[5]，用于治療各種慢性皮膚病如痤瘡(青春痘)、癬等。該制劑的質(zhì)量標準檢驗項目僅有性狀、鑒別和檢查，未對水楊酸的含量做出限定，有關(guān)水楊酸的含量測定的研究較多[6-14]，為了有效控制其質(zhì)量，經(jīng)過試驗對制劑中的水楊酸進行了定量研究，該方法簡便，結(jié)果準確可靠，重現(xiàn)性好，可作為該制劑中水楊酸的質(zhì)量控制方法，為該品種質(zhì)量標準的提高提供參考。

1儀器、試劑與藥品

Agilent 1260高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent SB-C18 4.6×250mm柱號：880975-902，梅特勒電子天平(生產(chǎn)地美國，儀器型號XS205)。水楊酸對照品(中國食品藥品檢定研究院 批號：100106-201104)、甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、乙醇(分析純)、水(超純水)，鞣柳硼三酸散(貴州金橋藥業(yè)有限公司)。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent SB-C18 (250mm×4.6mm，5μm)，檢測波長：305nm，流速1.0mL/min，流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)，柱溫：25℃，進樣體積：10μL。

2.2溶液制備

精密稱取水楊酸對照品15mg，置25mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液；精密量取對照品儲備液1mL置10mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取鞣柳硼三酸散10包混合均勻，研細，精密稱取(約相當于水楊酸0.075g)，置50mL量瓶中，加乙醇約40mL超聲10min，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL，置50mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方制法，配制不含水楊酸的陰性對照樣品以及陰性對照溶液。結(jié)果見圖1。

3方法學驗證

3.1線性范圍考察

取對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.063 44mg/mL)1μL、5μL、10μL、15μL、20μL注入液相色譜儀進行分析，記錄色譜圖，以進樣量X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程y=156 20x，r=1.000 0(n=5)，結(jié)果表明，水楊酸在進樣量0.063 44μg～1.268 8μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系(見圖2)。

A．對照品溶液　 B.供試品溶液　 C.陰性對照品溶液圖1　高效液相色譜圖Fig.1　Chromatographic of HPLC

圖2　標準曲線Fig.2　The standard curve line

3.2精密度試驗

取同一水楊酸對照品溶液(0.063 44mg/mL)10μL，按2.1色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰面積。RSD為0.04%(n=6)，儀器的精確度良好。

3.3穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0h、2h、4h、6h、8h，按2.1色譜條件進樣，以峰面積計算相對標準偏差(RSD)為1.04%(n=5)。供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.4重復性試驗

取同一批樣品，按上述方法制備供試品溶液6份，按2.1色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算水楊酸含量：平均含量為371.53mg/g，RSD為0.94%(n=6)；試驗結(jié)果表明方法重復性良好。

3.5加樣回收試驗

取同一批樣品9份，每份約0.1g，置50mL容量瓶中，按樣品含量與對照品的量比例為80%、100%、120%，分別加入1.502mg/mL的對照品溶液20mL、25mL、30mL，按2.1色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算回收率，平均回收率為101.26%，平均RSD為0.48%。結(jié)果見表1。

表1　加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

3.6樣品含量測定

取13批鞣柳硼三酸散樣品，按擬定方法制備供試品溶液，按擬定色譜條件進行測定，計算水楊酸的含量，計算結(jié)果見表2。

表2　水楊酸含量測定結(jié)果(n=2)

4討論

通過考察不同磷酸濃度(0.3%、0.4%、0.5%)對色譜峰的影響，結(jié)果表明，磷酸的濃度不同對峰的保留時間影響不大，但是對峰型有較大的影響，當磷酸濃度為0.4%時峰型較好，所以選擇甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)為流動相。

比較了5種超聲溶解時間：分別超聲5，8，10，12，15min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲10min后便已溶解完全，故選用超聲10min。

為考察實驗條件的微小變化對分析結(jié)果可能帶來的影響，實驗分別考察色譜儀、色譜柱、柱溫、流動相比例、流速的因素[3，4]。取同一樣品溶液進行測定。結(jié)果表明，水楊酸的含量在實驗條件有微小變化時測得的結(jié)果無顯著性差異，表明建立的方法簡便、快速、耐用性好，可滿足鞣柳硼三酸散中水楊酸的含量測定要求。

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文章編號：1004—5570(2016)03-0094-04

收稿日期：2016-03-29

作者簡介：曹桂紅(1983-)，女，碩士研究生，研究方向：藥物分析，E-mail:caoguihong2008@163.com.

中圖分類號：O657.7+2

文獻標識碼：A

Determination of salicylic acid in tannic acid, salicylic acid and boric acid powder by HPLC

CAO Guihong1,HUANG Chunqing1,XU Bo1,ZHOU Xin2

(1.Guizhou Institute for Food and Drug Control, Guiyang 550004, Guizhou, China; 2. The Research Center for Quality Control of Natural Medicine, Guizhou Normal University, Guiyang, Guizhou 550001, China)

Abstract:We established a HPLC method for determining the content of salicylic acid in tannic acid, salicylic acid and boric acid power. The chromatographic column was Agilent SB-C18, and the mobile phase was Methanol-0.4% phosphoric acid solution (60∶40). The detection wavelength was 305 nm, with the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 25 ℃. The average recovery and the RSD of salicylic acid was 101.26% and 0.48% (n=9), respectively. This method is effective, simple, accurate, and can be used to determine the content of salicylic acid in tannic acid, salicylic acid and boric acid powder.

Key words:tannic acid; salicylic acid and boric acid power; salicylic acid; HPLC