丹參多酚酸鹽對(duì)阿托伐他汀鈣在心肌缺血大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響

楊彩艷，鄒 堃，李宏輝，王 博，楊小英，賀 罡（.銀川市第一人民醫(yī)院藥學(xué)部，寧夏 銀川 75000；.寧夏醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，寧夏 銀川 750004；.寧夏醫(yī)科大學(xué)總院藥劑科，寧夏 銀川 750004）

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丹參多酚酸鹽對(duì)阿托伐他汀鈣在心肌缺血大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響

楊彩艷1，鄒 堃1，李宏輝2，王 博1，楊小英3，賀 罡（11.銀川市第一人民醫(yī)院藥學(xué)部，寧夏 銀川 750001；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，寧夏 銀川 750004；3.寧夏醫(yī)科大學(xué)總院藥劑科，寧夏 銀川 750004）

[摘要]目的：探討丹參多酚酸鹽對(duì)阿托伐他汀鈣在心肌缺血大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響。方法:選取雄性SD大鼠給予腹腔注射垂體后葉素建立心肌缺血損傷模型，將其隨機(jī)分為兩組：單用阿托伐他汀鈣組（30 mg·kg-1）與聯(lián)合用藥組（阿托伐他汀鈣30 mg·kg-1+丹參多酚酸鹽200 mg·kg-1），每組5只。分別于給藥前及給藥后0.083、0.17、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、36 h從尾靜脈采血1 mL，并分離血漿0.5 mL，采用LC-MS/MS測定阿托伐他汀鈣的血藥濃度，比較兩組間藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，利用DAS 3.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果:合用丹參多酚酸鹽后阿托伐他汀鈣在心肌缺血大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞增加顯著（P < 0.05），其它藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無顯著性差異（P > 0.05）。結(jié)論：在心肌缺血的病理狀態(tài)下，丹參多酚酸鹽能顯著提高阿托伐他汀鈣的生物利用度，但對(duì)其體內(nèi)的消除無顯著影響。

[關(guān)鍵詞]丹參多酚酸；阿托伐他汀鈣；藥代動(dòng)力學(xué)；心肌缺血

阿托伐他汀是HMG-CoA還原酶抑制劑，具有調(diào)節(jié)血脂水平，保護(hù)血管內(nèi)皮、抗炎、穩(wěn)定斑塊等作[1-2]，主要經(jīng)細(xì)胞色素P450代謝，聯(lián)合其他藥物使是其發(fā)生不良反應(yīng)的高危因素[3]。丹參多酚酸鹽是中藥丹參的主要有效成分，具有活血、化瘀、通絡(luò)等功能，臨床常將其聯(lián)合他汀類藥物治療冠心病且療效顯著[4]。溫金華等[5]研究發(fā)現(xiàn)，大鼠體內(nèi)丹參可影響瑞舒伐他汀的藥代動(dòng)力學(xué)特性。因此，丹參多酚酸鹽是否影響在心肌缺血病理狀態(tài)下阿托伐他汀的藥代動(dòng)力學(xué)過程值得深入探討。本研究擬采LC-MS/MS法測定垂體后葉素（Pit）所致心肌缺血模型大鼠體內(nèi)阿托伐他汀的血藥濃度，考察丹參多酚酸鹽在心肌缺血病理狀態(tài)下對(duì)阿托伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)的影響。

1　材料

1.1儀器

LC-30A高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；API4000串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（配有電噴霧離子源，Analyst 1.5.1分析操作軟件，美國Applied Biosystems公司）；Eppendorf 5804R低溫高速離心機(jī)（德國Eppendorf公司）；XW-80A渦旋混合器（姜堰市康健醫(yī)療器具有限公司）；梅特勒AE240電子天平（瑞士梅特勒托利多儀器上海有限公司 ） 。

1.2藥品與試劑

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康SD雄性大鼠，體質(zhì)量（230±15） g，購自寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK（寧）2011-0001。

2　方法

2.1給藥方案及血樣采集

參考文獻(xiàn)[6]方法，所選大鼠在給藥1 d前先進(jìn)行Pit敏感性篩選，腹腔靜注Pit 21 U ·kg-1后觀察大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST波抬升情況，以ST段抬高0.1 mV為敏感大鼠。將10只雄性大鼠隨機(jī)分為2組，每組5只，分別為單?阿托伐他汀?組與聯(lián)合?藥組（阿托伐他汀?+丹參多酚酸鹽），給藥前大鼠禁食12 h，自由飲水。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)先給予腹腔靜注Pit 21 U·kg-1，5 min后阿托伐他汀?組灌胃給予阿托伐他汀?30 mg·kg-1，聯(lián)合?藥組則在腹腔注射丹參多酚酸鹽200 mg·kg-15 min后給予阿托伐他汀?30 mg ·kg-1灌胃，兩組分別在灌胃給藥前及給藥后0.083、0.17、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、36 h時(shí)從尾靜脈采血1 mL，血樣置于含有EDTA的試管中離心處理后，血漿樣品于–20 ℃冰箱中保存。

2.2LC-MS/MS條件

色譜條件：色譜柱：Shim-pack XR-ODS柱（2.0 mm×100 mm，2.2 μm）；保護(hù)柱：Shim-pack GVP-ODS柱（2.0 mm×5 mm，2.2 μm），柱溫40 ℃，地西泮為內(nèi)標(biāo)。流動(dòng)相：A相為 0.1%甲酸，B相為乙腈，采梯度洗脫（0～0.6 min，10%B；0.6～1.2 min，10% →90%B；1.2～3.5 min，90%B；3.5～4.1 min，90% →10%B，5.5 min結(jié)束）；流速0.3 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

質(zhì)譜條件：離子源：離子噴霧離子化源；離子噴射電壓：5500 V；溫度：500 ℃；源內(nèi)氣體1（GS1，N2）壓力：60 psi；氣體2（GS2，N2）壓力：30 psi；氣簾氣體（CUR，N2）壓力：20 psi；正離子方式檢測；掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；于定量分析的離子反應(yīng)分別為：m/z 559.3/440.0（阿托伐他?。?、m/z 285.0/192.5（地西泮），解簇電壓（DP）分別為：85 V和90 V，碰撞能量（CE）分別為：30 eV和45 eV；碰撞氣（CAD，N2）壓力：6 psi；Q1、Q3分辨率均為UNIT。

2.3溶液制備

精密稱取地西泮對(duì)照品10 mg，置于10 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，配制成1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將1 mg ·mL-1的地西泮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙腈稀釋至1 ng·mL-1，作為沉淀血漿蛋白的乙腈溶液，置4 ℃冰箱保存。

2.4血液樣本處理

取血漿50 μL，依次加入含內(nèi)標(biāo)的乙腈溶液150 μL、乙腈50 μL，振蕩5 min，14 000 r· min-1離心10 min，離心后取上清液200 μL轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中進(jìn)行LC-MS/MS分析。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

根據(jù)測定給藥后各時(shí)間點(diǎn)的阿托伐他汀血藥濃度，采DAS 3.0藥代動(dòng)力學(xué)軟件的非房室模型法分析（統(tǒng)計(jì)矩法）藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)間的比較運(yùn)SPSS13.0軟件，采配對(duì)t檢驗(yàn)。

3　結(jié)果

3.1方法專屬性

取6個(gè)不同個(gè)體的混合空白血漿50 μL，加入150 μL不含內(nèi)標(biāo)的乙腈，其余按“2.4”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)行LC-MS/MS分析，獲得空白血漿樣品的色譜圖，與含一定濃度對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)的血漿生物樣本獲得的色譜圖及大鼠給藥后獲得的色譜圖比較，判斷血漿內(nèi)源性物質(zhì)是否干擾待測物和內(nèi)標(biāo)的出峰。阿托伐他汀及內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為2.58、2.69 min。血漿內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)藥物、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的測定無干擾，詳見圖1。

3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限

圖1　方法專屬性A–空白血漿，B–空白血漿+藥物，C–給藥后0.5 h；1–阿托伐他汀，2–內(nèi)標(biāo)（地血泮）Fig 1 Specificity of methodsA–blank plasma, B–blank plasma + drug, C–0.5 h after administration; 1–atorvastatin calcium, 2–internal standard (diazepam)

3.3精密度實(shí)驗(yàn)

3.4加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

3.5主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

表1　急性心肌缺血大鼠單服阿托伐他汀鈣與合用丹參多酚酸鹽后阿托伐他汀鈣的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù). n = 5,± sTab 1 Pharmacokinetic parameters of atorvastatin calcium after single atorvastatin calcium administration and coadministration with salvianolate in the rat with acute myocardial ischemia. n = 5,± s

表1　急性心肌缺血大鼠單服阿托伐他汀鈣與合用丹參多酚酸鹽后阿托伐他汀鈣的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù). n = 5,± sTab 1 Pharmacokinetic parameters of atorvastatin calcium after single atorvastatin calcium administration and coadministration with salvianolate in the rat with acute myocardial ischemia. n = 5,± s

藥動(dòng)學(xué)參數(shù)　單阿托伐他汀組　聯(lián)合藥組　P AUC0-t/μg·L-1·h　511.635±94.8240 　872.265±214.788 　< 0.05 AUC0-∞/μg ·L-1·h　579.421±175.879 　927.822±211.728 　< 0.05 t1/2/h　10.600±2.22200 　10.055±7.15200 　> 0.05 tmax/h　0.333±0.22800　0.951±0.97100　> 0.06 CL/F/L·h-1·kg-1　53.914±13.0890　39.676±16.8430　> 0.07 Cmax/μg·L-1　170.100±83.5120　137.220±82.9340　> 0.08

3.6單用與聯(lián)合用藥組阿托伐他汀鈣平均血藥濃度-時(shí)間曲線

具體結(jié)果詳見圖2。

圖2　急性心肌缺血大鼠單服阿托伐他汀鈣與合用丹參多酚酸鹽后阿托伐他汀鈣的藥-時(shí)曲線圖Fig 2 Mean plasma concentration-time profiles of atorvastatin calcium after single atorvastatin calcium administration and co-administration with salvianolate in the rat with acute myocardial ischemia

4　討論

本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)研究[8]建立了簡單、準(zhǔn)確的測定血漿阿托伐他汀藥物濃度的LC-MS/MS方法，該法專屬性高，精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率等符合生物樣品分析的要求。

除普伐他汀外，他汀類藥物的生物轉(zhuǎn)化主要是由微粒體細(xì)胞色素同工酶系統(tǒng)完成，對(duì)細(xì)胞色素P450酶的抑制或誘導(dǎo)作，可影響他汀類藥物的藥代動(dòng)力學(xué)特性[9]，改變其血藥濃度，導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生[10-11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示丹參多酚酸鹽與阿托伐他汀合后可增加阿托伐他汀的血藥濃度，參數(shù)值A(chǔ)UC0-t與AUC0-∞明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。丹參多酚酸鹽系丹參素的衍生物，是中藥丹參中重要的有效成分之一[12]。有研究[13]表明丹參素可能是CYP2C9的競爭性抑制劑。因此，阿托伐他汀血藥濃度的增高可能是丹參多酚酸鹽抑制了阿托伐他汀在心肌缺血大鼠體內(nèi)的代謝，導(dǎo)致血藥濃度上升。當(dāng)然，也不排除其他機(jī)制引起阿托伐他汀血藥濃度升高，相關(guān)機(jī)制仍尚待進(jìn)一步研究。

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Effect of salvianolate on pharmacokinetics of atorvastatin calcium in rats with myocardial ischemia

YANG Cai-yan1, ZOU Kun1, LI Hong-hui2, WANG Bo1, YANG Xiao-ying3, HE Gang1(1. Department of Pharmacy, the First People's Hospital of Yinchuan, Yinchuan 750001, China; 2. Public Health Institute of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 3. Department of Pharmacy, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

[ABSTRACT]Objective: To study the effect of salvianolate on the pharmacokinetics of atorvastatin calcium in rats with myocardial ischemia.Methods: The rat models of myocardial ischemia were established by injecting pituitrin into the peritoneal cavity of SD rats. Parallel control method was applied in this study. Ten model rats were evenly randomized into two groups: atorvastatin calcium (30 mg· kg-1) group and drug combination group (atorvastatin calcium 30 mg·kg-1plus salvianolate 200 mg·kg-1). Blood samples (1 mL) were collected from the caudal vein at 0.083, 0.17, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36 h after drug administration. LC-MS/MS was used to determine the plasma concentrations of atorvastatin calcium. The pharmacokinetic parameters of the two groups were compared, and statistical analysis was performed by DAS 3.0 software. Results: When combined with salvianolate, the AUC0-tand AUC0-∞of atorvastatin calcium were increased obviously (P ＜ 0.05）. The other pharmacokinetic parameters had no signifcant changes (P > 0.05). Conclusion: In the state of myocardial ischemia, salvianolate could apparently increase the bioavailability of atorvastatin calcium, while it almost had no effect on drug elimination process.

[KEY WORDS]Salvianolate; Atorvastatin calcium; Pharmacokinetics; Myocardial ischemia

[中圖分類號(hào)]R969.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1672–8157(2016)02–0085–04

[基金項(xiàng)目]寧夏自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（NZ13206）

[通信作者]賀罡，男，主任藥師，主要從事藥事管理工作。E-mail：372438212@qq.com

[作者簡介]楊彩艷，女，主管藥師，主要從事臨床藥學(xué)工作。E-mail：13639596653@163.com

收稿日期：（2015-10-28 修回日期：2016-02-03）