重癥急性胰腺炎大鼠血清Apelin、C反應(yīng)蛋白及腫瘤壞死因子-α水平變化及臨床意義

李　衛(wèi)　周筱筠　盧先州　劉龍飛　徐志廣　陳詩(shī)怡

(南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院肝膽外科，湖南　衡陽(yáng)　421002)

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重癥急性胰腺炎大鼠血清Apelin、C反應(yīng)蛋白及腫瘤壞死因子-α水平變化及臨床意義

李衛(wèi)周筱筠盧先州劉龍飛徐志廣陳詩(shī)怡

(南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院肝膽外科，湖南衡陽(yáng)421002)

〔摘要〕目的探討重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠血清Apelin、C反應(yīng)蛋白(CRP)及腫瘤壞死因子(TNF)-α水平的變化及臨床意義。方法將36只SD雄性大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為SAP組、假性手術(shù)組、對(duì)照組，每組12只，SAP組按照大鼠體重1 ml/kg劑量膽總管注入50 g/L?；悄懰徕c制備SAP模型，假性手術(shù)組行SAP組相同手術(shù)但不注射藥物，對(duì)照組正常飼養(yǎng)。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定Apelin、CRP及TNF-α水平，光鏡觀察SAP胰腺組織變化并進(jìn)行組織病理評(píng)分。結(jié)果SAP組胰腺組織嚴(yán)重水腫，組織細(xì)胞壞死、具有片狀出血斑并且胰腺出現(xiàn)局部皂化斑，假性手術(shù)組正?；蛘咻p微水腫，無明顯異常，對(duì)照組組織正常，建模成功。SAP組血清CRP和TNF-α水平均高于假性手術(shù)組和對(duì)照組，Apelin明顯低于假性手術(shù)組和對(duì)照組(P<0.05)。SAP組胰腺組織病理學(xué)評(píng)分高于假性手術(shù)組和對(duì)照組(P<0.05)。SAP組血清Apelin水平與胰腺組織病理學(xué)評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.876,P<0.05)，CRP和TNF-α水平與胰腺組織病理學(xué)評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.698、0.724,P<0.05)。結(jié)論血清Apelin、CRP及TNF-α水平變化與SAP發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可以作為疾病嚴(yán)重程度判斷和治療效果評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。

〔關(guān)鍵詞〕重癥急性胰腺炎；血清Apelin；C反應(yīng)蛋白；腫瘤壞死因子-α

目前認(rèn)為重癥胰腺炎(SAP)發(fā)病機(jī)制主要是胰腺自身消化和炎癥細(xì)胞因子激活，尤其是炎癥因子相互作用和累計(jì)作用，導(dǎo)致血管滲漏、低血容量以及多系統(tǒng)器官衰竭等重癥發(fā)生〔1〕。Apelin是一種脂肪細(xì)胞因子，是血管緊張素受體樣蛋白J受體內(nèi)源性配體，在肥胖、胰島素抵抗、心血管系統(tǒng)疾病以及炎癥反應(yīng)中起重要作用〔2〕；C反應(yīng)蛋白(CRP)和腫瘤壞死因子(TNF)-α均為機(jī)體受到感染或者損傷時(shí)釋放的敏感蛋白〔3〕。本文旨在研究SAP大鼠血清Apelin、CRP、TNF-α水平的變化及臨床意義。

1資料與方法

1.1動(dòng)物和試劑動(dòng)物：SD雄性大鼠36只購(gòu)自本院動(dòng)物中心，體重250～300 g，實(shí)驗(yàn)前記號(hào)筆標(biāo)記大鼠序號(hào)，按照隨機(jī)數(shù)字法分為SAP組、假性手術(shù)組、對(duì)照組，每組12只。試劑：Apelin、CRP及TNF-α酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)試劑盒均購(gòu)自上?？泼羯锟萍加邢薰?；牛磺膽酸鈉購(gòu)自南京凱夫醫(yī)藥科技有限公司。

1.2研究方法

1.2.1SAP模型制備大鼠建模前禁食12 h，可飲水，按照3 ml/kg給予大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥鈉溶液，麻醉后動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上固定大鼠，沿著腹壁正中線切開，打開腹腔，暴露胰腺，找到膽總管和十二指腸，仔細(xì)觀察胰管和膽管方向，在膽總管流向十二指腸端應(yīng)用血管夾夾閉膽總管，沿著相反方向穿刺膽總管，按照大鼠體重1 ml/kg劑量注入50 g/L?；悄懰徕c，注射完畢后，縫合穿刺孔，等待1 min左右，取下血管夾，然后逐層關(guān)閉腹部，整個(gè)過程均為無菌操作，術(shù)后大鼠禁食，可適量飲水，12 h左右建模成功；假性手術(shù)組除了未注入?；悄懰徕c外，其他手術(shù)方式同SAP組，對(duì)照組正常飼養(yǎng)。

1.2.2Apelin、CRP及TNF-α檢測(cè)SAP組和假性手術(shù)組手術(shù)建模12 h后，對(duì)照組經(jīng)過同樣時(shí)間，按照3 ml/kg大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉，開腹，抽取腹腔靜脈血5 ml于EP管中，按照5 000 r/min離心5 min，收集血清，-80℃保存?zhèn)溆?，?yīng)用ELISA測(cè)定Apelin、CRP、TNF-α水平，分別應(yīng)用相應(yīng)試劑盒測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求。

1.2.3胰腺標(biāo)本制定取胰腺組織，40 g/L甲醛固定，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察組織水腫情況，并且進(jìn)行胰腺組織病理學(xué)評(píng)分,從水腫、出血、壞死及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)4個(gè)方面評(píng)分。

1.3研究指標(biāo)比較三組Apelin、CRP、TNF-α水平及組織光鏡觀察結(jié)果；分析各指標(biāo)與組織病理評(píng)分之間的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1三組血清Apelin、CRP、TNF-α水平以及光鏡觀察結(jié)果比較光鏡下觀察SAP組胰腺組織嚴(yán)重水腫，組織細(xì)胞壞死、具有片狀出血斑并且胰腺出現(xiàn)局部皂化斑；假性手術(shù)組正?；蛘咻p微水腫，無明顯異常；對(duì)照組大鼠組織無明顯異常，說明建模成功。SAP組血清CRP和TNF-α水平均高于假性手術(shù)組和對(duì)照組，Apelin水平明顯低于假性手術(shù)組和對(duì)照組(P<0.05)，假性手術(shù)組和對(duì)照組Apelin 、CRP和TNF-α水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　三組Apelin、CRP、TNF-α水平

與SAP組相比：1)P<0.05

2.2血清Apelin 、CRP以及TNF-α水平與組織病理學(xué)評(píng)分相關(guān)關(guān)系分析SAP組胰腺組織病理學(xué)評(píng)分平均為(8.67±1.23)分，假性手術(shù)組為(1.32±0.78)分，對(duì)照組為(1.28±0.56)分，差異顯著(F=4.675，P=0.015)，其中SAP組評(píng)分高于假性手術(shù)組和對(duì)照組(P<0.05)，假性手術(shù)組和對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。SAP組血清Apelin水平與胰腺組織病理學(xué)評(píng)分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.876,P=0.000),CRP和TNF-α水平與胰腺組織病理學(xué)評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.698、0.724,P=0.000)。

3討論

近年來急性胰腺炎(AP)發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，并且由于對(duì)其發(fā)病機(jī)制尚未明確，缺乏特異性診斷或者評(píng)價(jià)指標(biāo)，因此是現(xiàn)在臨床上研究重點(diǎn)和難點(diǎn)之一。目前認(rèn)為AP是多種病因?qū)е乱让冈谝认賰?nèi)被激活后引起胰腺組織自身消化、水腫、出血甚至壞死的炎癥反應(yīng)，病變輕者以胰腺水腫為主，重者出現(xiàn)胰腺出血壞死，并且可以誘發(fā)感染、腹膜炎和休克等，病死率高〔4〕。研究證明〔5〕，AP病損的胰腺組織作為抗原或炎癥刺激物，激活了巨噬細(xì)胞而釋放出炎癥介質(zhì)，造成細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)和免疫功能紊亂。Cox等〔6〕研究發(fā)現(xiàn)CRP在大鼠SAP評(píng)估和疾病轉(zhuǎn)歸中具有重要意義，并且膿毒敗血癥的病人血漿Apelin水平發(fā)生明顯變化，因此檢測(cè)血液中相關(guān)細(xì)胞因子濃度，對(duì)于判斷胰腺病變嚴(yán)重程度、病情發(fā)展和預(yù)后至關(guān)重要。

Apelin因子〔7〕是孤兒G蛋白耦聯(lián)受體，是近來發(fā)現(xiàn)具有重要生物學(xué)活性的心血管多肽性因子，是腎素-血管緊張素新的組成部分，具有擴(kuò)張血管、降低血壓、調(diào)整生物節(jié)律等多種生物學(xué)功能。目前主要以大鼠為載體來發(fā)現(xiàn)胃腸系統(tǒng)和胰腺部位中Apelin-mRNA的表達(dá)，并且在胃腺上皮組織發(fā)現(xiàn)大量的Apelin分泌細(xì)胞，依賴絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑刺激胰腺分泌膽囊收縮素等，因此Apelin因子在SAP等消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。CRP主要是機(jī)體受到嚴(yán)重?fù)p傷等炎癥刺激后肝細(xì)胞合成的急性相關(guān)蛋白，研究發(fā)現(xiàn)〔8〕AP通常在最初24 h引起CRP升高，若無并發(fā)癥，此值在第1周末下降。如果入院時(shí)CRP>100 mg/L，很可能已形成并發(fā)癥，CRP>110 mg/L，可能是出血性胰腺炎，并且CRP診斷靈敏度較高。TNF-α可以促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生各種炎癥因子,進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

本研究說明SAP對(duì)大鼠胰腺組織產(chǎn)生嚴(yán)重?fù)p害，與胰腺組織光鏡觀察結(jié)果一致。相關(guān)性分析顯示隨著胰腺病理組織評(píng)分升高，血清Apelin表達(dá)水平逐漸降低，可能原因?yàn)镾AP發(fā)生時(shí)導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)，大量炎癥因子對(duì)心肌細(xì)胞造成一定的損傷，因Apelin因子為內(nèi)源性心肌收縮因子，心肌細(xì)胞損傷失去了需要Apelin因子的機(jī)會(huì)，因此Apelin因子表達(dá)會(huì)降低。本研究說明CRP和TNF-α因子在SAP的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后中起著重要作用。此外，可以通過檢測(cè)CRP、TNF-α表達(dá)水平變化來推斷SAP病情變化、嚴(yán)重程度或治療效果，這與相關(guān)研究結(jié)果類似〔9〕。但是本文研究對(duì)象為大鼠，上述論斷僅可作為人類研究的參考依據(jù)，臨床應(yīng)用還需要在SAP患者上做更深層次研究。

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〔2015-07-11修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

第一作者：李衛(wèi)(1979-)，男，碩士，副教授，副主任醫(yī)師，主要從事肝、膽、胰腺疾病方面的研究。

〔中圖分類號(hào)〕R657.5+1

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)09-2080-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.09.014