MMP及TIMP在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達*＊?

范玉香

(贊皇縣醫(yī)院，河北贊皇　051230)

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MMP及TIMP在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達*＊?

范玉香

(贊皇縣醫(yī)院，河北贊皇051230)

［摘要］目的:探討基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9及組織抑制因子TIMP-1、TIMP-2在子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)患者血清及腹腔液中的表達及意義。方法:選取行腹腔鏡術(shù)EMT患者40例及同期行腹腔鏡術(shù)非EMT患者40例作為研究對象，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定兩組患者MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在血清和腹腔液中的表達，同時比較EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2。結(jié)果: EMT組患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于非EMT組(P＜0.05)，EMT組TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于非EMT組(P＜0.05) ;隨臨床EMT分期的增加MMP-2、MMP-9表達水平相應(yīng)升高，Ⅲ～Ⅳ期顯著高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05) ;而TIMP-1、TIMP-2的表達水平隨EMT臨床分期增高而降低，Ⅲ～Ⅳ期顯著低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)。結(jié)論: MMP-2、MMP-9的高表達與TIMP-1、TIMP-2的低表達，可能參與EMT的發(fā)生與發(fā)展過程。

［關(guān)鍵詞］子宮內(nèi)膜異位癥;血清;體液，腹腔;基質(zhì)金屬蛋白酶;組織抑制因子

網(wǎng)絡(luò)出版時間: 2016－02－23網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.2101.056.html

子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)是指子宮內(nèi)膜組織在子宮腔被覆內(nèi)膜及子宮肌層以外的部位生長、浸潤，導(dǎo)致疼痛、出血、不育等臨床癥狀，是育齡期婦女常見的良性疾病，發(fā)病率達10%～15%，嚴(yán)重影響婦女身心健康及生活質(zhì)量［1－2］。EMT的發(fā)病機制與經(jīng)血逆流種植學(xué)說、靜脈和淋巴播散學(xué)說、免疫學(xué)說等相關(guān)［3］。研究指出，EMT是一種血管生成依賴性疾病，內(nèi)膜的種植過程是免疫應(yīng)答異常、局部炎癥反應(yīng)和血管新生的過程，在這個過程中間基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)及其組織抑制因子(TIMP)起著重要的作用，二者以1∶1的比例形成復(fù)合物，抑制MMP的活性，調(diào)控著對細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)中MMP的降解［4－5］。本研究旨在探討基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)及其組織抑制因子-1、-2(TIMP-1、TIMP-2)在EMT患者血清及腹腔液中的表達及意義。

1　材料和方法

1.1一般資料

選取2014年1月～2015年1月婦科經(jīng)腹腔鏡術(shù)確診為EMT患者40例作為觀察組，符合EMT疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)及分期標(biāo)準(zhǔn)［6］，排除有心、腦、腎等器官嚴(yán)重疾病，排除免疫、代謝、內(nèi)分泌等激素依賴性疾病，至少3月內(nèi)未接受過任何激素藥物治療;年齡23～46歲，平均(31.3±6.7)歲;體重指數(shù)(BMI) 16.2～25.2 kg/m2，平均(20.8±3.2) kg/ m2;根據(jù)美國生育協(xié)會評分標(biāo)準(zhǔn)(r-AFS)分期，Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期25例。選取同期因子宮肌瘤或不孕癥等行腹腔鏡術(shù)的非EMT患者40例作為對照組，其中子宮肌瘤28例，不孕癥12例，引起不孕癥原因為卵巢腫瘤、輸卵管發(fā)育不全或不通等，年齡24～46歲，平均(32.0±5.2)歲; BMI 16.3 ～25.7 kg/m2，平均(21.1±3.5) kg/m2。兩組患者年齡、BMI等資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2方法

所有研究對象于入院第2天清晨7時采集外周靜脈血5 mL，常溫靜置1 h，3 500 r/min離心20 min，取上清液置－70℃保存待檢。腹腔液標(biāo)本于手術(shù)時用無菌注射器吸取子宮直腸陷凹和子宮膀胱陷凹處腹腔液5 mL，3 500 r/min離心20 min，取上清液置－70℃條件保存待檢。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定兩組患者血清及腹腔液MMP-2、 MMP-9和TIMP-1、TIMP-2的水平，試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司，由專業(yè)人員按照說明書操作。

1.3觀察指標(biāo)

觀察EMT患者與非EMT患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平，并比較EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的差異。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 18.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

觀察組血清MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于對照組(P＜0.05)，TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于對照組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1　兩組患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

表1　兩組患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

(1)與對照組比較，P＜0.05

指標(biāo)　　觀察組(n =40)　　對照組(n =40) 155.2±50.3 MMP-9　 289.3±62.2(1)　191.1±53.5 TIMP-1　 238.7±57.5(1)　401.2±65.5 TIMP-2　 205.5±39.7(1)MMP-2　 245.8±58.7(1)343.7±41.5

2.2腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

觀察組腹腔液中MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于對照組(P＜0.05)，TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于對照組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2　兩組患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

表2　兩組患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

(1)與對照組比較，P＜0.05

指標(biāo)　　觀察組(n =40)　　對照組(n =40) 15.3±6.2 MMP-9　27.3±4.4(1)　18.3±5.8 TIMP-1　 975.7±421.5(1)　1 305.5±437.3 TIMP-2　 831.5±305.8(1)MMP-2　25.7±8.5(1)1 131.3±305.7

2.3不同分期EMT患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

EMT患者Ⅲ～Ⅳ期血清MMP-2、MMP-9的表達水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期血清TIMP-1、TIMP-2表達水平顯著低于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3　EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

表3　EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

(1)與Ⅰ～Ⅱ期比較，P＜0.05

指標(biāo)　　Ⅰ～Ⅱ期(n =25)Ⅲ～Ⅳ期(n =15) MMP-2　179.2±39.5　 291.3±54.5(1)MMP-9　210.3±42.2　 335.4±69.5(1)TIMP-1　362.7±71.2　 158.5±42.3(1)TIMP-2　241.5±32.7　 115.7±21.3(1)

2.4不同分期EMT患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

EMT患者Ⅲ～Ⅳ期腹腔液MMP-2、MMP-9的表達水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期腹腔液TIMP-1、TIMP-2表達水平顯著低于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表4。

表4　EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

表4　EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

(1)與Ⅰ～Ⅱ期比較，P＜0.05

指標(biāo)　?、瘛蚱?n =25)Ⅲ～Ⅳ期(n =15) MMP-2　18.5±6.7　 27.1±5.0(1)MMP-9　19.3±5.7　 28.9±4.3(1)TIMP-1　 1 215.6±502.1　 870.3±267.9(1)TIMP-2　 1 115.3±375.8　 781.6±215.4(1)

3　討論

EMT被認(rèn)為是類似癌性浸潤的一種良性疾病，月經(jīng)期脫落的子宮內(nèi)膜細(xì)胞隨經(jīng)血逆流，經(jīng)血管或淋巴管進入腹腔、肝、肺等器官，種植于器官表面并生長。異位內(nèi)膜本身及其周圍組織血液供應(yīng)的建立和維持是EMT的發(fā)病基礎(chǔ)，目前已發(fā)現(xiàn)許多肽類生長因子以自分泌或旁分泌形式促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與分化。EMT患者全身及盆腔局部發(fā)生了免疫狀況改變，不能對異位的內(nèi)膜清除，導(dǎo)致機體巨噬細(xì)胞數(shù)量增加，MMP由巨噬細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、粒細(xì)胞等合成及分泌，是具有高度同源性的內(nèi)肽酶，可以加快血管內(nèi)皮細(xì)胞新生血管的形成，與整合素相互活化增強細(xì)胞間黏附，在內(nèi)膜細(xì)胞的異位種植生長中起促進作用［7－9］。TIMP是MMP的特異性抑制因子，MMP的活性可被TIMP和巨球蛋白所抑制，通過調(diào)節(jié)MMP的活性調(diào)控ECM的更新與破壞［10－11］?；啄さ耐暾允桥袛喈愇粌?nèi)膜浸潤與侵襲的重要標(biāo)志，MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在這一過程的調(diào)節(jié)中具有特殊意義［12］。MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2主要分布在EMT患者的血管內(nèi)皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞，在間質(zhì)細(xì)胞表達相對較低，于EMT在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中的表達率較低［13］。MMP-2、MMP-9的表達隨EMT臨床分期的升高而增強，提示與EMT患者異位內(nèi)膜的侵襲呈正相關(guān)。由于MMP-2 和MMP-9在EMT患者早期就有表達，在異位組織中明顯增高，臨床可通過檢測MMP-2、MMP-9的水平來判斷愈后情況［14］。本研究表明，EMT患者MMP-2、MMP-9在血清和腹腔液中的表達水平顯著高于對照組，隨著臨床分期的增加MMP-2、MMP-9的表達水平也相應(yīng)升高，本組Ⅲ～Ⅳ期MMP-2、MMP-9的表達水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，說明MMP-2、MMP-9在異位內(nèi)膜中的過度表達，使得異位內(nèi)膜有很強大的水解能力，降解病變周圍的基底膜，使異位內(nèi)膜在組織內(nèi)種植生長并使病灶不斷擴大。TIMP通過調(diào)解MMP的活性調(diào)控著細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解，MMP與TIMP間的平衡如果失調(diào)，會引起多種病理改變，這種現(xiàn)象在EMT的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，TIMP-1和TIMP-2隨著EMT病情的發(fā)展和r-AFS分期的升高其表達水平逐漸降低，而MMP-2和MMP-9活性反而增強［15］。本研究顯示TIMP-1、TIMP-2在EMT的表達水平低于對照組，且隨臨床分期的增加TIMP-1、TIMP-2的表達水平也相應(yīng)降低，本組Ⅲ～Ⅳ期的TIMP-1、TIMP-2表達水平明顯低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，使MMP-2/TIMP-2與MMP-9/TIMP-1間的比值增加，平衡出現(xiàn)失調(diào)，使異位內(nèi)膜侵襲力增加，改變了ECM的合成與降解，與文獻［15］報道一致。研究認(rèn)為MMP與TIMP平衡的失調(diào)，改變了ECM合成與降解過程，誘發(fā)并促進EMT的發(fā)生與發(fā)展［16］。

總之，MMP-2、MMP-9的高表達與TIMP-1、TIMP-2的低表達，可能參與EMT的發(fā)生與發(fā)展，臨床通過檢測其表達水平，對預(yù)測疾病的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)歸具有重要意義。

4　參考文獻

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(2015－06－23收稿，2015－11－21修回)

中文編輯:戚璐;英文編輯:劉華

·護理學(xué)研究·

Expression of MMP and TIMP in the Endometriosis

FAN Yuxiang
(Zanhuang Hospital of Hebei Province，Zanhuang 051230，Hebei，China)

［Abstract］Objective: To explore the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with endometriosis (EMT) and their clinical significance.Methods: A total of 40 patients with EMT for laparoscopy and 40 patients with non-EMT for laparoscopy at the same period were enrolled in the study.The double-antibody sandwich ELISA was used to detect the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid.Meanwhile，the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with EMT at different stages were compared.Results: The expression levels of MMP-2 and MMP-9 in the serum and peritoneal fluid in EMT group were significantly higher than those in the non-EMT group (P＜0.05).The expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 in EMT group were significantly lower than those in the non-EMT group (P＜0.05).With the increasing clinical staging of EMT，the expression levels of MMP-2 and MMP-9 were correspondingly elevated while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 were reduced with the increasing clinical staging of EMT.Specifically，the expression levels of MMP-2 and MMP-9 at stageⅢ～Ⅳwere significantly higher than those at stageⅠ～Ⅱ(P＜0.05) while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 at stageⅢ～Ⅳwere significantly lower than those at stageⅠ～Ⅱ(P＜0.05).Conclusion: The high expressions of MMP-2 and MMP-9 and low expressions of TIMP-1 and TIMP-2 are probably involved in the genesis and development of EMT.

［Key words］endometriosis; serum; body fluid，abdominal cavity; matrix metalloproteinaeses; tissue inhibitor

*［基金項目］河北省科技進步項目(20150261)

［中圖分類號］R711.2

［文獻標(biāo)識碼］A

［文章編號］1000-2707(2016) 02-0238-04