水飛薊賓處方前研究

周宇 夏新華 李朝 張馳

摘要：目的 研究水飛薊賓的理化性質(zhì)，為設計優(yōu)良的處方奠定基礎。方法 采用高效液相色譜法測定水飛薊賓在不同溶劑中的平衡溶解度，采用搖瓶法測定水飛薊賓在正辛醇-水和正辛醇-緩沖液體系中的油水分配系數(shù)，并進行破壞性試驗等處方前研究。結(jié)果 水飛薊賓在25 ℃水中的平衡溶解度為1.352 mg/L，在乙腈中溶解度最大，在堿性緩沖液中溶解度增大，且加入表面活性劑能增加水飛薊賓在水中的溶解度，其中十二烷基苯磺酸鈉對水飛薊賓的增溶能力最強；水飛薊賓的表觀油水分配系數(shù)為61.39；水飛薊賓在酸、堿、氧化性和還原性溶液中均不穩(wěn)定。結(jié)論 本研究結(jié)果可為水飛薊賓新制劑的設計提供參考。

關鍵詞：水飛薊賓；平衡溶解度；表觀油水分配系數(shù)；破壞性試驗；高效液相色譜法

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）05-0100-04

Study on Silibinin Preformulation ZHOU Yu， XIA Xin-hua， LI Chao， ZHANG Chi （School of Pharmacy， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China）

Abstract： Objective To study the physical and chemical properties of silibinin； To lay foundation for optimal formulation design. Methods The high performance liquid chromatography method was used to detect the equilibrium solubility of silibininin in various solutions. The partition coefficients of silibinnin in the n-octalution-water and n-octalution-buffer solution systems were determined by shaking flask method. The destructive tests were carried out on silibinin. Results The equilibrium solubility of silibininin at 25 ℃ was 1.352 mg/L in water and the largest in acetonitrile， and increased in basic buffer solutions and after adding surfactants， of which sodium dodecyl benzene sulfonate was the strongest in solubilizing ability. The apparent oil-water partition coefficient of silibinnin was 61.39. Silibinnin was unstable in the acidic， basic， oxidizing and reducing solutions. Conclusion The experiment results can provide references for designing new preparations of silibinin.

Key words： silibinin； equilibrium solubility； apparent oil-water partition coefficient； destructive test； HPLC

藥物制劑處方前研究是指在設計制劑處方前對藥物一系列基本的物理性質(zhì)、化學性質(zhì)和制劑性質(zhì)的了解、分析、利用或改進[1]。處方前研究在新藥劑型設計和老藥劑型改進中已逐步成為常規(guī)化的研究項目[2-4]。水飛薊賓是菊科藥用植物水飛薊種子的種皮中提取所得的一種黃酮類化合物，以2種非對映異構體（水飛薊賓A、水飛薊賓B）形式存在。近年國內(nèi)外研究表明，水飛薊賓具有清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化、保護細胞膜、促進被損傷肝細胞合成DNA和結(jié)構蛋白質(zhì)以及抗纖維化等藥理活性，對急慢性肝炎、中毒性肝損傷和肝硬化具有較好的療效[5-7]。為進一步研發(fā)其新制劑（如肝靶向脂質(zhì)體等），提高臨床療效，本試驗對水飛薊賓進行平衡溶解度、油水分配系

數(shù)和破壞性試驗等處方前研究。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相系統(tǒng)（美國安捷倫公司），YD601N型電子天平（上海恒平科學儀器有限公司），KQ5200BE型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），HZQ-X280恒溫振蕩培養(yǎng)箱（太倉市華美生化儀器廠）。

水飛薊賓對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110856-201305）；水飛薊賓原料藥（湖南千金協(xié)力藥業(yè)有限公司，批號20150317，含量98.33%）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸餾，其余試劑均為分析純。

2 水飛薊賓含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil ODS1（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（48∶52∶1）；檢測波長：287 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃。在上述色譜條件下，水飛薊賓與異水飛薊賓立體異構體得以分離，保留時間分別為21.8、25.0 min，水飛薊賓A與水飛薊賓B之間分離度>1.5，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取水飛薊賓對照品19.2 mg于100 mL容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得水飛薊賓對照品溶液（0.192 mg/mL）。

2.3 線性關系考察

精密吸取水飛薊賓對照品溶液（0.192 mg/mL）1、2、4、6、8、10 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以水飛薊賓質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標，水飛薊賓A和水飛薊賓B峰面積之和為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=19.680X-69.808，r2=0.999 0。結(jié)果表明，水飛薊賓在19.2～192 mg/L范圍內(nèi)濃度與峰面積之和呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取水飛薊賓對照品溶液（0.186 mg/mL）10 μL，連續(xù)進樣6次，測定其峰面積，水飛薊賓峰面積RSD=0.88%。表明儀器精密度和進樣操作一致性符合要求。

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液（0.128 mg/ml）10 μL，分別于0、2、4、8、12、24 h進樣測定。水飛薊賓峰面積的RSD=1.11%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復性試驗

取同一批水飛薊賓原料藥共6份，用甲醇定容至100 mL，得到供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，水飛薊賓峰含量RSD=0.45%，表明該法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品，加入一定量的水飛薊賓對照

品，制備供試品溶液，重復6份。按“2.1”項下色譜條件測定，計算得水飛薊賓平均加樣回收率為96.50%，RSD=1.37%，表明該法準確度好。

2.8 樣品含量測定

取3批水飛薊賓原料藥，測定其水飛薊賓的含量。結(jié)果可知，3批樣品的平均含量為98.33%，且其所含水飛薊賓的含量差異不大。說明該制備工藝穩(wěn)定可行。

3 水飛薊賓平衡溶解度的測定

取過量水飛薊賓于10 mL具塞試管中，分別加入3組介質(zhì)（①水及緩沖溶液組：pH 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.8、7.0、7.4、8.0、9.0、10.0的磷酸鹽緩沖液；②有機溶劑組：甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正辛醇、二氯甲烷、環(huán)己烷、正丁醇；③20 mg/mL十二烷基苯磺酸鈉、聚乙二醇400、吐溫80、OP10）適量，超聲至藥物不再溶解，置恒溫振蕩器中，在25 ℃、150次/min條件下振蕩48 h，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按上述方法測定，計算水飛薊賓的含量，結(jié)果見表1～表3。

由表1可見，在不同pH值磷酸緩沖鹽溶液中，水飛薊賓溶解度隨溶劑pH值升高呈上升趨勢，但在

酸性、中性緩沖液中變化比較平穩(wěn)（其溶解度總體偏?。趬A性緩沖液中溶解度變化明顯，可能因為水飛薊賓與堿性溶劑結(jié)合成鹽，增加了溶解度。由表2可見，水飛薊賓在蒸餾水中溶解度較?。?.352 mg/L），在乙腈中的溶解度最大（9260.918 mg/L）。由表3可見，十二烷基苯磺酸鈉和0P10均可明顯增加水飛薊賓在水中的溶解度，而其他表面活性劑對水飛薊賓的增溶能力較弱。

4 水飛薊賓油水分配系數(shù)測定

取水飛薊賓適量，溶于水飽和的正辛醇中，使成飽和狀態(tài)，靜置后3000 r/min離心10 min。精密吸取上清液0.5 mL于具塞試管中，分別加入正辛醇飽和的水及pH 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.8、7.0、7.4、8.0、9.0、10.0的磷酸鹽緩沖液各4 mL，在恒溫振蕩器中，25 ℃、150次/min振蕩24 h，靜置分層后，3000 r/min離心15 min，分別精密吸取下層水溶液與藥物的正辛醇溶液適量，按上述方法測定，并按公式計算分配系數(shù)： 。式中，Papp為水飛薊賓的表觀油水分配系數(shù)；p為水飛薊賓在正辛醇中的初始濃度（mg/L），v為被水飽和的正辛醇體積（即0.5 mL）；Pw為藥物分配平衡時在水相中測得的水飛薊賓濃度（mg/L），vw為水相體積（4.0 mL）。結(jié)果水飛薊賓在正辛醇-水中的分配系數(shù)為61.39（lgPapp=1.79），而在系列磷酸鹽緩沖液中以pH 6.0緩沖液中的Papp最大，見表4。

5 破壞性試驗

取水飛薊賓原料適量，共4份，先用適量甲醇溶解，然后分別加入用0.9%NaCl溶液配制的0.01 mol/L HCl溶液、0.01 mol/L NaOH溶液、0.3%H2O2溶液及0.01%NaHSO3溶液，使其濃度為0.1 mg/mL，并分別于0、2、4、6、8、10、24 h取樣，按上述方法測定水飛薊賓含量。結(jié)果表明，水飛薊賓在HCl、H2O2及NaHSO3溶液中降解較快，而在NaOH堿性溶液中降解相對較為緩慢，見圖2～圖5。

6 討論

目前已有研究用紫外法測定了水飛薊素在水、緩沖液及表面活性劑溶液中的平衡溶解度[8-9]，也有研

究以水飛薊素為原料測定了水飛薊賓的溶解度及油水分配系數(shù)[10]。但尚未見以水飛薊賓為原料來測定水飛薊賓的溶解度、油水分配系數(shù)，并進行其破壞性試驗。本研究采用高效液相色譜法，其結(jié)果準確，專屬性強。

水飛薊賓在磷酸鹽緩沖液中的平衡溶解度隨pH值的升高而增大。由于水飛薊賓在堿性和酸性條件下會降解，因此在測定水飛薊賓平衡溶解度時，要使用超聲來加速藥物的溶解，盡可能減少水飛薊賓在酸和堿中的破壞。在加入表面活性劑時，水飛薊賓的平衡溶解度增加，其中十二烷基苯磺酸鈉的增溶能力最強。

從測定的溶解度及油水分配系數(shù)結(jié)果來看，水飛薊賓溶解度及油水分配系數(shù)都比較低，按照生物藥劑學分類系統(tǒng)，水飛薊賓屬于低溶解度、低滲透性、低生物利用度的藥物，將影響其臨床應用。因此，有必要研究開發(fā)新劑型，以增加其溶解速度和改善其吸收特性。

研究不同化學環(huán)境對水飛薊賓的破壞性對指導其制劑開發(fā)和應用具有重大意義。在制劑開發(fā)過程應避免酸性、堿性、氧化性和還原性物質(zhì)的加入。

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