乳癖康膠囊中橙皮苷含量HPLC測定方法的建立及評價

尹晶，王艷，王睿，侯宜

(1．吉林大學(xué)白求恩制藥廠，長春130021；2．吉林大學(xué)藥學(xué)院a.藥學(xué)實驗中心；b.組織工程教研室，長春130021)

乳癖康膠囊由乳癖康片經(jīng)劑型改進(jìn)而成，乳癖康片收載于《國家標(biāo)準(zhǔn)藥品匯編》，由橘葉、夏枯草等8味中藥組成[1]。乳癖康膠囊的主要成分為橙皮苷，具有活血化瘀、疏肝理氣的功效，用于肝氣郁結(jié)、氣滯血瘀所致的乳腺增生、乳房脹痛等癥。橙皮苷具有抗炎、抗氧化、抗癌、調(diào)節(jié)免疫力、防輻射、保護心血管系統(tǒng)等藥理活性[2]，所以選擇橙皮苷作為指標(biāo)成分對乳癖康膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制。經(jīng)方法學(xué)考察以及陰性對照試驗顯示，該方法簡單且重現(xiàn)性好，能為乳癖康膠囊質(zhì)量控制提供有力依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　樣品試藥及主要儀器

乳癖康膠囊(0.38g/粒，吉林大學(xué)藥學(xué)院天然藥化教研室自制)；橙皮苷對照品(批號：110721-200308，中國藥品生物制品檢定所)；所用試劑乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

U-3400型分光光度計(日立公司)；SPD-10Avp紫外可見檢測器、Auw120D十萬分之一電子天平、LC-10AT高效液相色譜儀(島津公司)。

1.2　溶液的制備

1.2.1對照品溶液的制備精密量取4.12mg橙皮苷對照品于25mL量瓶中，加一定量甲醇至刻度，得對照品溶液。精密量取對照品溶液0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL、1.1mL置于2mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，得到系列對照品溶液。

1.2.2供試品溶液的制備取本品20粒內(nèi)容物，計算出平均粒重，研細(xì)。量取本品內(nèi)容物細(xì)粉0.31g于25mL量瓶中，加50%甲醇溶液20mL，超聲處理(功率120W，頻率40kHz)30min，加50%甲醇溶液稀釋，搖勻后靜置，吸取上清液，得供試品溶液。

1.2.3陰性對照溶液的制備按“1.2.2”項下方法制成不含橙皮苷成分的陰性對照溶液。

1.3　測定方法

色譜柱：Shim-pack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-水(V乙腈∶V水=20∶80)；柱溫：40℃；檢測波長：284nm。按照上述色譜條件，陰性對照溶液無干擾峰，并且橙皮苷與乳癖康膠囊中的其他成分可以得到良好分離。

2　結(jié)果

2.1　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取6份對照品溶液10μL，按照選定色譜條件進(jìn)樣并測定。以進(jìn)樣量(μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：Y=-5882+1 159 440X，r=0.9997，0.0824μg/mL～0.9064μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

2.2　精密度實驗

精密量取供試品溶液10μL，按照選定色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果RSD=0.37%(n=6)，表明精密度良好。

2.3　重復(fù)性實驗

取乳癖康膠囊同一批號樣品6份，按照“1.2.2”項制備方法制成供試品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)樣測定，測得RSD=2.16%(n=6)，表明方法重復(fù)性較好。

2.4　穩(wěn)定性實驗

精密量取10μL供試液，并于配制后0h、1h、2h、4h、6h按照樣品測定方法測定。結(jié)果RSD=0.37%(n=5)，表明供試品溶液在6h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.5　回收率實驗

在已經(jīng)確定含量的成品粉末中各定量加入1mL的橙皮苷對照品溶液(0.78mg/mL)，依法進(jìn)樣測定(樣品進(jìn)樣量為10μL)，計算回收率，測得RSD=2.86%(n=6)，平均回收率為100.5%。

2.6　樣品含量測定

取不同批號的樣品10批，按照“1.2.2”項方法制成供試品溶液。精密量取對照品溶液和供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按照選定色譜條件測定，并計算10批乳癖康膠囊中橙皮苷的含量，結(jié)果見表1。

表110批樣品中橙皮苷含量測定(μg/粒，n=2)

Table1ResultsofdeterminationofHesperidinin10samples

批　號Batchnumber編號　Number12X040323075807720765040324064206750659040325056505880576040326055205320542040327042504340429040328089108720882040329093609600948040330104810111030040401099809600979040402116512221194

3　討論

試驗在溶劑選擇上分別采用甲醇、30%甲醇和50%甲醇等溶液制備供試品溶液，并進(jìn)樣測定。結(jié)果顯示，50%甲醇溶液制備供試品溶液分離效果好、峰面積積分值最高，故供試品溶液采用50%甲醇制備。

據(jù)不同文獻(xiàn)報道[3～5]，高效液相色譜法測定橙皮苷的檢測波長為270nm、283nm、284nm等。取適量橙皮苷對照品溶液于石英比色皿，甲醇溶液為參比溶液，全波長掃描譜中最大吸收在284nm處，確定本品經(jīng)高效液相分離測定橙皮苷含量的檢測波長為284nm。

乳癖康膠囊是復(fù)方制劑，含有眾多干擾成分，故流動相的選擇十分重要。經(jīng)查閱文獻(xiàn)[6～8]，高效液相色譜法測定橙皮苷含量所使用的流動相分別為甲醇-水、乙腈-0.1%冰醋酸溶液等多種流動相進(jìn)行測定。經(jīng)考察及試驗發(fā)現(xiàn)，乙腈-水(V乙腈∶V水=20∶80)能夠達(dá)到峰型好、基線分離明顯的要求，所以采用上述流動相進(jìn)行測定。

實驗表明，本試驗選用HPLC測定乳癖康膠囊中的橙皮苷含量，保留時間適中，陰性對照液無干擾峰，峰形較對稱，適用于乳癖康膠囊該制劑的質(zhì)量控制和分析。

[1]王俊香，王冬英，李軍勇.HLPC測定消癖康膠囊中橙皮苷和丹酚酸B的含量[J].中成藥，2007,29(9):1313-1315.

[2]Zhang DS,Gao HY,Wu LJ,et al.The Pharmacological activities of hesperidin[J].Modern Chinese Medicine,2006,(8):25-27.

[3]宋劍鋒,馮敬騫,胡建華,等.HPLC法通式測定常山胡柚花中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的量[J].中草藥,2014,45(6):854-856.

[4]徐海燕,金藝,張紅霞,等.HPLC同時測定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中成藥,2010:32(8):1355-1357.

[5]張鶴,馬寧.HLPC法測定乳癖消結(jié)丸中丹參酮IIA、橙皮苷含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015:11(12):24-26.

[6]黃蒙蒙,王俊香,李峰.HPLC法測定乳癖康膠囊中熊果酸的含量[J].山東中醫(yī)雜志,2013:32(12):921-922.

[7]劉玉軍,代龍,孫明江,等.HPLC測定白芪龍膠囊中齊墩果酸和熊果酸[J].中成藥,2011,33(6):994:996.

[8]麻秀萍,蔣朝暉,丁寧,等.HPLC測定馬鞭草中熊果酸的含量[J].中成藥,2005,27(1):88-90.