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    黑芝麻炮制前后芝麻素含量變化與抗氧化活性研究

    2016-03-26 02:58:26李淑軍劉鵬付智慧孫美玲胡慧華
    特產(chǎn)研究 2016年4期
    關(guān)鍵詞:木脂素生品黑芝麻

    李淑軍,劉鵬,付智慧,孫美玲,胡慧華

    (北京中醫(yī)藥大學中藥學院,北京100102)

    黑芝麻始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,列為上品,名胡麻,為脂麻科植物脂麻(SesamumindicumL.)的干燥成熟種子[1],性甘、平,歸肝、腎、大腸經(jīng),能夠補肝腎、益精血、潤腸燥。陶弘景謂之為“八谷之中,唯此為良”。臨床常用于治療肝腎不足、虛風眩暈、腸燥便秘、病后虛弱等病癥[2]。九蒸九制后有烏發(fā)之功,但需久服多服。古今用法各異,生熟功效不同。

    芝麻木脂素是黑芝麻中的主要生理活性成分,總質(zhì)量分數(shù)達0.5%~1.0%,也是非常優(yōu)良的天然抗氧化劑。芝麻木脂素包括脂溶性木脂素(Lignans)和含有配糖體的水溶性木脂素(Lignans glucosides)。脂溶性木脂素有芝麻素(Sesamin)、芝麻酚(Sesamol)、芝麻林素(Sesamolin)等;水溶性木脂素則是由1~3個葡萄糖相連形成的極性較強的糖苷[3]。芝麻素和芝麻林素是芝麻中主要的木脂素,其質(zhì)量分數(shù)分別為總木脂素的0.2%~0.5%和0.1~0.3%[4]。

    本實驗通過檢測黑芝麻生品及炮制品所含芝麻素的含量,探究炮制次數(shù)對芝麻素含量的影響,并以清除自由基實驗為依據(jù),測定樣品溶液對于羥自由基、DPPH自由基的清除作用,比較炮制前后黑芝麻抗氧化活性的強弱,以期為黑芝麻在中藥領(lǐng)域的研究提供參考。

    1 材料與儀器

    1.1 原料與試劑

    黑芝麻生品、不同蒸制次數(shù)的炮制品、芝麻素對照品(上海源葉生物科技有限公司);芝麻素(純度99.24%,北京中醫(yī)藥大學中藥炮制學實驗室自制);石油醚、乙醇、甲醇、HCL、H2O2、硫酸亞鐵銨(北京化工廠);三羥甲基氨基甲烷(Tris)(北京博奧拓達科技有限公司);鄰二氮菲(天津市光復科技發(fā)展有限公司);1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)(東京化成工業(yè)株式會社)。

    1.2 儀器設(shè)備

    Agilent 1100 series(惠普公司);色譜柱:YWG-C18柱(4.6mm×150mm,5μm)(北京迪馬歐泰科技發(fā)展中心);18系列紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-2000A(上海亞榮生化儀器廠);SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵(上海振捷實驗設(shè)備有限公司);電子天平(上海越平科學儀器有限公司)。

    1.3 色譜條件

    流動相:甲醇∶水(70∶30);檢測波長:287nm;流速:1mL/min;柱溫:室溫。

    2 試驗方法

    2.1 黑芝麻的炮制方法

    取黑芝麻1000g,取50g作為生品,其余藥材清蒸45min,曬干。取50g,作為1制樣品。余下的900g,再清蒸45min,曬干,取出50g,作為2制樣品。同法,共取10次,獲得10份樣品。

    2.2 對照品溶液的制備

    精密稱取芝麻素對照品5mg置100mL三角瓶中,加甲醇制成芝麻素含量為0.05mg/mL的溶液。

    2.3 供試品溶液的制備

    取樣品1.0g,加入硅藻土2.0g拌勻,置索氏提取器中,加入甲醇100mL,85℃提取4h?;厥占状贾粮?,加入氯仿溶解,轉(zhuǎn)移至容量瓶中,并定容至25mL,過濾,取續(xù)濾液5mL,揮至近干,加入0.5g硅膠(160目~200目)拌樣,干法上柱(柱直徑1.5cm,過160目~200目硅膠3.0g)。用石油醚-氯仿(2∶1)洗脫,棄去前60mL洗脫液,收集60mL后,改用氯仿洗脫,再收集60mL,合并洗脫液,回收溶劑至干。用甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至容量瓶中,并定容至10mL。用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。

    2.4 黑芝麻樣品的制備

    稱取105℃烘干后的黑芝麻5.00g,粉碎機粉碎,將粉末置于圓底燒瓶中,加入12倍量的石油醚,水浴65℃回流1h,揮去石油醚,粉末加12倍量的90%乙醇,55℃超聲提取30min,取出靜置2h,然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去90%乙醇,甲醇定容10mL,作為供試液。取定容后的溶液0.5mL,用甲醇定容到10mL,作為樣品溶液。

    3 方法學考察

    3.1 線性關(guān)系與工作曲線

    取對照品溶液,分別進樣5μL、10μL、15μL、20μL、25μL,按“1.3”項下方法測定。以峰面積為縱坐標、進樣量為橫坐標進行回歸處理,得回歸方程:Y=1127.9X-41.77,相關(guān)系數(shù)r=0.9999,芝麻素在0.2μg/mL~1.0μg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

    3.2 提取時間的確定

    由于本品用索氏提取法提取,所以試驗中只比較了不同提取時間的影響。取同一批生品5份,精密稱定,加入硅藻土2.0g,拌勻,置索氏提取器中,加入100mL甲醇,提取2h、3h、4h、5h、6h,再按“2.3”項下方法制備供試品溶液,進樣5μL。按“1.3”項下方法測定,結(jié)果見表1。

    表1提取時間確定

    Table1Determinationofextractiontime

    結(jié)果表明,在2h~6h中,芝麻素提取率穩(wěn)定,考慮到提取的完全性,選定提取時間為4h。

    3.3 供試品溶液穩(wěn)定性考察

    取同一批生品1.0g,按“2.3”項下方法制得供試品溶液,間隔一定時間,按“1.3”項下方法測定,放置時間為0h、2h、4h、6h、8h,進樣量5μL,結(jié)果得RSD值為1.51%。結(jié)果表明,供試品溶液在8h內(nèi)保持穩(wěn)定。

    3.4 精密度試驗

    取同一批生品1.0g,按“2.3”項下方法制成供試品溶液,并按“1.3”項下方法連續(xù)測定5次,進樣量5μL,RSD為0.77%,結(jié)果表明,該儀器精密度良好。

    3.5 重復性試驗

    取同一批生品5份,各1.0g,按“2.3”項下方法制成供試品溶液,并按“1.3”項下方法分別測定,進樣量5μL,RSD為0.54%,結(jié)果表明重復性良好。

    3.6 回收率試驗

    采用加樣回收實驗方法測定,取同一批已知含量的樣品5份,精密稱定,分別精密加入芝麻素對照品溶液(0.4228mg)各10mL,再按“2.3”項下方法制備供試品溶液,進樣量5μL,測定其含量,結(jié)果見表2。

    表2加樣回收率

    Table2Recoveryofsample

    4 結(jié)果

    4.1 芝麻素含量的測定

    實驗組炮制前后樣品取樣5μL,按方法學考察測定方法進行測定,結(jié)果見表3。

    表3芝麻素含量測定結(jié)果

    Table3Resultsofthecontentofsesamin

    結(jié)果表明,隨著蒸制次數(shù)的增加,芝麻素的含量逐漸下降。9制樣品中芝麻素的11:12 2018-3-26一步研究。

    4.2 黑芝麻生品和不同炮制次數(shù)的黑芝麻炮制品對羥自由基(·OH)清除作用

    取12支10mL比色管,依次編號,分別依次加入7.5mmol/L硫酸亞鐵銨溶液0.3mL、7.5mmol/L鄰二氮菲溶液0.3mL、pH 7.47 Tris-HCL緩沖液1mL;之后1號管加純凈水1mL,2~13號管分別加入7.5mmol/L H2O2溶液1mL;然后3~12號管加入生品及不同炮制次數(shù)的黑芝麻樣品溶液1mL。所有比色管加甲醇定容到10mL,37℃水浴1h。以甲醇為參比,510nm處測吸光度值。平行測3次,取平均值,分別計算黑芝麻生品及炮制品的羥自由基清除率(P)[5]。

    P=(A樣品-A損)/(A未損-A損)×100%

    式中:A樣品、A未損、A損分別為加入樣品溶液的羥自由基體系,不加H2O2及加入H2O2體系的吸光度。結(jié)果見圖1。

    由圖1可知,隨著蒸制次數(shù)的增加,黑芝麻生品及黑芝麻炮制品均具有一定的羥自由基清除作用,但隨著蒸制次數(shù)的增加,羥自由基的清除率呈現(xiàn)出減小的趨勢,生品對羥自由基的清除率最大,而7制樣品以后基本保持不變。換句話說,生品黑芝麻的抗氧化活性強于炮制品。此結(jié)果與本實驗前期測定芝麻素含量的結(jié)果相吻合,說明芝麻素是黑芝麻中抗氧化活性的主要成分。

    4.3 黑芝麻生品和不同炮制次數(shù)的黑芝麻炮制品對DPPH自由基的清除作用

    取11支10mL比色管,依次編號,分別依次加入4.5mL 60μmol/L的DPPH溶液;1號管中加入100μL甲醇溶液,2~11號管加入生品及不同炮制次數(shù)的黑芝麻樣品溶液100μL。各比色管加甲醇定容到5.0mL,振蕩、避光反應(yīng)30min,以甲醇為參比,516nm處測吸光度,平行測定3次,求平均值。分別計算黑芝麻生品及炮制品的清除率(P)。

    P=(A0-A樣品)/A0×100%

    式中:A0、A樣品分別為不加樣品溶液的DPPH自由基體系、加樣品溶液的DPPH自由基體系的吸光度。結(jié)果見圖2。

    由圖2可知,黑芝麻生品及炮制品均具有一定程度的DPPH自由基清除作用,但隨著黑芝麻蒸制次數(shù)的增加,DPPH自由基的清除率逐漸減小,生品對DPPH自由基的清除率最大,7制樣品以后清除率基本保持不變。此次實驗的結(jié)果與前期對芝麻素含量的測定結(jié)果一致,表明黑芝麻具有很強的抗氧化活性,而隨著芝麻素的減少,其抗氧化活性逐漸減弱。

    5 討論

    芝麻素具有抗氧化、抗菌、調(diào)節(jié)血脂、穩(wěn)定血壓、保護肝功能及抑制腫瘤等多種藥理作用,芝麻素是黑芝麻中起主要生理活性作用的木脂素類化合物。實驗結(jié)果揭示,隨著黑芝麻蒸制次數(shù)的增加,其中的芝麻素含量降低,從而使炮制品的抗氧化活性降低。結(jié)果說明,黑芝麻具有很強的抗氧化性能,芝麻素是黑芝麻抗氧化的主要成分,蒸制以后黑芝麻的抗氧化活性降低與蒸制過程中芝麻素含量的降低有著密切的關(guān)系。

    我國黑芝麻資源豐富,大多被用作油料作物,其藥用價值一直被忽略。隨著研究技術(shù)的不斷更新,黑芝麻的藥用前景更加值得深入研究。

    [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[K].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:344.

    [2]Gao H Y.Use Sesamum indium L.to benefit the gallbladder and eliminate the stone[J].Shandong J Traditi Chin Med,1996,15(6):266.

    [3]何曉梅,谷仿麗,張穎,等.芝麻木脂素超聲提取工藝優(yōu)化及其抗氧化性能[J].生物加工過程,2013,11(6):53-54.

    [4]唐傳核,彭志英.芝麻木酚素“芝麻素”研究概況[J].糧食與油脂,2000,(6):37-39.

    [5]許鰓,曹躍,周翎,等.狗脊炮制前后抗氧化活性的研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2011,29(11):2424-2426.

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