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      不同濃度CCl4注射聯(lián)合飲用乙醇誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型研究

      2016-03-24 01:47:30翟偉刁廣浩李瑞生張紹庚王兆海
      實(shí)用肝臟病雜志 2016年6期
      關(guān)鍵詞:四氯化碳乙醇溶液小葉

      翟偉,刁廣浩,李瑞生,張紹庚,王兆海

      ·短篇論著·

      不同濃度CCl4注射聯(lián)合飲用乙醇誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型研究

      翟偉,刁廣浩,李瑞生,張紹庚,王兆海

      目的探索不同濃度CCl4聯(lián)合飲用乙醇制備大鼠肝硬化模型,尋求最佳的藥物和乙醇濃度。方法取90只SD大鼠,分為對(duì)照組10只和實(shí)驗(yàn)組A組、B組、C組和D組,每組20只,給予不同濃度的CCl4油溶液腹腔注射,同時(shí)以不同濃度的乙醇溶液為飲用水,制備肝硬化模型。結(jié)果在實(shí)驗(yàn)12 w末,A組大鼠死亡10只,B組死亡8只,C組死亡4只,D組死亡5只;實(shí)驗(yàn)A組肝細(xì)胞走向紊亂,纖維組織增生,纖維間隔形成。有假小葉形成,肝細(xì)胞大小不一,呈點(diǎn)灶狀壞死,肝細(xì)胞凋亡、再生,匯管區(qū)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn);B組與A組變化相似;C組肝細(xì)胞走向紊亂,纖維間隔形成,但無(wú)假小葉形成,肝細(xì)胞脂肪變性,纖維組織增生,肝細(xì)胞凋亡,匯管區(qū)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn);D組與C組表現(xiàn)類似。結(jié)論適當(dāng)濃度的CCl4油溶液結(jié)合乙醇溶液為飲用水誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型可顯著提高造模成功率。

      肝硬化;四氯化碳;乙醇;大鼠

      建立理想的肝硬化動(dòng)物模型不僅是進(jìn)行肝病實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ),也是臨床評(píng)價(jià)肝硬化診斷和治療方法的有效手段之一[1-6]。本實(shí)驗(yàn)采用皮下注射CCl4油溶液結(jié)合飲用乙醇制作肝硬化大鼠模型,觀察了肝組織結(jié)構(gòu)的變化。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑與藥品3~4周齡健康雄性SD大鼠90只,體質(zhì)量100~150 g,由我院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,采取人工光照,明、暗各12 h,溫度24~26℃,濕度50%~60%,噪音<50db,每個(gè)鼠籠放置少于4只大鼠。對(duì)大鼠的處置按照中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)委員會(huì)頒布的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行,全程符合動(dòng)物倫理學(xué)管理要求。四氯化碳(分析純)由解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供;市售某品牌中性菜籽食用油;苯巴比妥鈉(0.1 g/1 m l)由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供;3%戊巴比妥鈉溶液由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供;市場(chǎng)銷售的某品牌飲用白酒(乙醇含量為60%)。

      1.2 肝硬化模型的制備將動(dòng)物分為實(shí)驗(yàn)組80只和對(duì)照組10只。給予實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物每升蒸餾水中含0.35 g苯巴比妥鈉的溶液代替飲用水飲用2 w。將實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物分為4組,每組20只。給予A組動(dòng)物50%四氯化碳中性菜籽油溶液0.5 ml/100 g體質(zhì)量腹腔注射,2次/w,并以10%乙醇溶液為其惟一飲用水,持續(xù)12 w;給予B組動(dòng)物四氯化碳中性菜籽油溶液同A組,但以蒸餾水為其惟一飲用水;給予C組33%四氯化碳中性菜籽油溶液0.5 m l/100 g體質(zhì)量腹腔注射,2次/w,以10%乙醇溶液為其惟一飲用水,持續(xù)12 w;給予D組四氯化碳中性菜籽油溶液同C組,以20%乙醇溶液為其惟一飲用水;給予對(duì)照組普通顆粒飼料喂養(yǎng),正常飲蒸餾水。在實(shí)驗(yàn)第12 w末,處死大鼠,開(kāi)腹,取肝組織行石蠟包埋、切片、HE染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察。

      2 結(jié)果

      2.1 病死率對(duì)照組大鼠無(wú)死亡;在誘導(dǎo)12周過(guò)程中,20只A組大鼠死亡10只(50%);20只B組大鼠死亡8只(40%);20只C組大鼠死亡4只(20%);20只D組大鼠死亡5只(25%)。

      2.2 組織病理學(xué)表現(xiàn)對(duì)照組大鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝板條索狀以中央靜脈為中心呈放射狀排列,無(wú)肝細(xì)胞變性、壞死(圖1);實(shí)驗(yàn)A組肝細(xì)胞走向紊亂,纖維組織增生,纖維間隔形成。有假小葉形成,肝細(xì)胞大小不一,呈點(diǎn)灶狀壞死,肝細(xì)胞凋亡、再生,匯管區(qū)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2、圖3);B組與A組變化相似;C組肝細(xì)胞走向紊亂,纖維間隔形成,但無(wú)假小葉形成,肝細(xì)胞脂肪變性,纖維組織增生,肝細(xì)胞凋亡,匯管區(qū)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn);D組與C組表現(xiàn)類似(圖4、圖5)。

      3 討論

      肝硬化動(dòng)物模型的制作方法包括血吸蟲(chóng)尾蚴法[7]、四氯化碳法[8]、硫代乙酰胺法[9]、低劑量長(zhǎng)期應(yīng)用致癌物法[10]、膽總管結(jié)扎法[11]和乙醇性[12]肝硬化模型等。

      本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔注射不同濃度的CCl4,結(jié)合飲用乙醇制備大鼠肝硬化模型,出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞點(diǎn)、灶狀壞死及纖維性變,肝細(xì)胞走向紊亂,纖維組織增生,纖維間隔形成,假小葉形成,肝細(xì)胞大小不一,呈點(diǎn)灶狀壞死,肝細(xì)胞凋亡、再生,匯管區(qū)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn),提示肝硬化病變制備成功。肝纖維化是肝臟進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展的重要環(huán)節(jié),其主要表現(xiàn)在肝內(nèi)纖維組織增生和纖維間隔形成,它是對(duì)各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應(yīng),同時(shí)也是慢性肝病的重要病理特征。

      圖1 對(duì)照組大鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞無(wú)變性、壞死(HE,10×)

      圖2 實(shí)驗(yàn)A組大鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)肝細(xì)胞走向紊亂,纖維間隔形成,有假小葉形成((HE,10×)

      圖3 實(shí)驗(yàn)A組大鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)肝細(xì)胞走向紊亂,纖維間隔形成,伴假小葉形成(HE,20×)

      圖4 實(shí)驗(yàn)C組大鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)肝細(xì)胞走向紊亂,細(xì)胞變性、壞死,纖維間隔形成,成熟假小葉形成(HE,10×)

      圖5 實(shí)驗(yàn)C組大鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)肝細(xì)胞走向紊亂,細(xì)胞變性、壞死,纖維間隔形成,成熟假小葉形成(HE,20×)

      四氯化碳是使用最早、最廣泛的肝纖維化誘導(dǎo)劑[11]。四氯化碳誘導(dǎo)慢性肝損傷的機(jī)理是直接損害肝細(xì)胞,破壞細(xì)胞的各種成分,造成肝細(xì)胞的脂肪變性和壞死。乙醇為酶誘導(dǎo)劑,損害線粒體,增加肝細(xì)胞氧耗量,還可增強(qiáng)四氯化碳對(duì)肝細(xì)胞的毒性作用,兩者同時(shí)作用可促進(jìn)肝硬化的形成[12]。

      本實(shí)驗(yàn)對(duì)四氯化碳的濃度及飲用乙醇溶液濃度進(jìn)行了改進(jìn),探討了最合適的四氯化碳濃度誘導(dǎo)肝硬化大鼠模型,同時(shí)以不同濃度的乙醇溶液為飲用水,持續(xù)12周,觀察大鼠肝硬化模型制備的成功率及動(dòng)物死亡率。實(shí)驗(yàn)證明,適當(dāng)濃度的四氯化碳油溶液能顯著增加肝硬化模型的成功率,而對(duì)大鼠的死亡率無(wú)明顯影響,同時(shí)適當(dāng)濃度的乙醇溶液可以加快大鼠的適應(yīng)期,減少大鼠拒飲現(xiàn)象,更好地誘導(dǎo)肝硬化模型,而高濃度的四氯化碳直接注射可以導(dǎo)致部分大鼠出現(xiàn)急性肝功能衰竭而死亡,而稍高濃度的乙醇溶液對(duì)大鼠的肝硬化成模無(wú)明顯影響,且部分大鼠拒絕飲用高濃度乙醇亦可導(dǎo)致死亡[13],適當(dāng)濃度的四氯化碳和乙醇可以維持對(duì)肝細(xì)胞的損害強(qiáng)度,因脂肪氧化減少,肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積,肝細(xì)胞破壞,假小葉形成,造成肝硬化的形成。本實(shí)驗(yàn)成功地制備了大鼠肝硬化模型,為以后研究肝硬化打下了基礎(chǔ)。

      [1]李小杉,肖靜,高月霞.原發(fā)性肝癌患者生存質(zhì)量研究新進(jìn)展.實(shí)用肝臟病雜志2011,14(3):236-238.

      [2]顧永珍.原發(fā)性肝癌的手術(shù)治療與臨床分析.吉林醫(yī)學(xué),2011,32(3):535-536.

      [3]歐陽(yáng)兵,吳威,徐政光.肝硬化合并肝癌患者出現(xiàn)低血糖的臨床表現(xiàn).當(dāng)代醫(yī)學(xué),2010,16(28):45-46.

      [4]郭若涵,白彬.大型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性肝纖維化及肝硬化模型的研究進(jìn)展.世界華人消化雜志,2014,21(5):421-426.

      [5]李棟,張樂(lè)玲,侯懷水,等.四氯化碳誘導(dǎo)兔肝硬化模型的動(dòng)態(tài)研究.世界華人消化雜志,2006,14(14):1403-1407.

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      (收稿:2016-05-06)

      (本文編輯:陳宗炳)

      A lcohol and CCl4-induced liver cirrhosis in rats


      Zhai Wei,Diao Guanghao,Li Ruisheng,et al.
      Department of Hepatobiliary Surgery,302nd Hospital,Beijing 100071

      Liver cirrhosis;Alcohol;CCl4;Rats

      10.3969/j.issn.1672-5069.2016.06.018

      100071北京市解放軍第302醫(yī)院肝膽外科一中心

      翟偉,男,28歲,碩士研究生,住院醫(yī)師。主要從事肝膽外科診斷與治療學(xué)研究。E-mail:624229727@qq.com

      王兆海,E-mail:pla302wzh@163.com

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