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    新疆地區(qū)口腔頜面部淋巴瘤患者EBV感染與臨床病理特征的相關(guān)性分析

    2016-03-22 10:32:28胡露露張晉劉慧龔忠誠凌彬克熱木·阿巴斯尹小朋邵博王冰林兆全
    中國美容醫(yī)學(xué) 2016年2期
    關(guān)鍵詞:臨床病理特征相關(guān)性分析

    胡露露 張晉 劉慧 龔忠誠 凌彬 克熱木·阿巴斯 尹小朋 邵博 王冰 林兆全

    [摘要]目的:通過檢測口腔頜面部淋巴瘤患者的EBV水平,分析其與臨床病理特征之間的相關(guān)性。方法:選取2014年1月1日至2015年1月1日在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院收住的口腔頜面部淋巴瘤患者,采用ISH技術(shù)檢測EBV的水平,從性別、年齡、腫瘤部位、HL淋巴結(jié)內(nèi)外、病灶數(shù)量、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平等方面分析其相關(guān)性。結(jié)果:ISH技術(shù)檢測EBV感染陽性者占45%。與性別、年齡、腫瘤部位、病灶數(shù)量無關(guān)(P>0.05);與HL淋巴結(jié)內(nèi)外發(fā)生部位(結(jié)內(nèi)60%,結(jié)外25%,P=O.012)、臨床分期(I+II:30.8%,III+IV:71.4%,P=O.023)、腫瘤分型(NHL:54.9%,HL:11.1%,P=O.017)、病理類型(NKT:84.6%,BCL:23.1%,TCL:20%,HL:11.2%,P=O.034)、LDH水平(LDH>250mmol/l:60%,LDH≤250mmol/1.36%,P=O.026)有關(guān)(P<0.05);HL淋巴結(jié)內(nèi)外發(fā)生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜面部淋巴瘤患者EBV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。結(jié)論:EBV感染在口腔頜面部淋巴瘤患者呈高度陽性表達(dá),HL淋巴結(jié)內(nèi)外發(fā)生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜面部淋巴瘤患者EBV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

    [關(guān)鍵詞]口腔頜面部腫瘤;惡性淋巴瘤;EB病毒;臨床病理特征;相關(guān)性分析

    [中圖分類號]

    R739.8

    [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

    [文章編號]1008-6455(2016)02-0024-04

    淋巴瘤原發(fā)于淋巴結(jié)或淋巴組織,是一種惡性腫瘤,全身各部位均可發(fā)生。近年來,口腔頜而部淋巴瘤發(fā)病率上升快,占頭頸部腫瘤的3%,占全身淋巴瘤的8%-27%。EB病毒(EPstein-Barr virus,EBV)屬于皰疹病毒亞科,病毒潛伏,易致腫瘤發(fā)生。研究表明,許多腫瘤發(fā)生與EBV感染有關(guān),如鼻咽癌、何杰金氏病、伯基特淋巴瘤等。本研究通過對在我院收治的40例口腔頜而部淋巴瘤患者進(jìn)行分析,探索口腔頜而部淋巴瘤的臨床病理特征與EBV感染的相關(guān)性,為臨床治療提供理論依據(jù)。

    1 對象和方法

    1.1 一般資料

    收集2014年1月1日201 5年1月1日在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔頜而外科首診的,經(jīng)病理學(xué)檢查確診為非霍奇金淋巴瘤的病例40例,其中男22例,女18例;年齡24-75歲,平均年齡(52.8±6.4)歲,中位年齡(51.7±5.6)歲,臨床分期:I期:12例,II期:14例,III期:14例,IV期:IO例。

    1.2 儀器與試劑

    CD20、CD79a、Pax-5. CD15、CD30. CD45Ro.CyclinDI、CD23、CD5、Ki-67、HMB45、S-IOO、CKpan、波形蛋白、CDIO,ALK、CD65、CD56封閉液+一抗,兔抗鼠免疫組化二抗試劑盒,DAB試劑盒,過氧化氫,多聚賴氨酸,0.01%檸檬酸鈉緩沖液;二甲苯,無水乙醇,石蠟,蘇木素,中性樹膠(中國常州山峰化工有限公司)。

    超凈工作臺(美國Formal);普通離心機(jī)(上海飛鴿);倒置顯微鏡(日本Olympus);組織包埋機(jī)(日本SAKURA);脫水機(jī)(日本TIYODA);超薄切片機(jī)(德國Leica);臺式恒溫振蕩器(上海精宏);計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)(美國惠普)。

    1.3 方法及診斷

    入組病例為手術(shù)切除標(biāo)本及活檢標(biāo)本,均行HE染色及免疫組織化學(xué)染色,由2名高年資病理醫(yī)師閱片。參照WHO(2008版)造血與淋巴組織腫瘤分型。免疫組織化學(xué)采用二步法,包括CD20、CD79a、Pax-5、CD15、CD30、CD45Ro、CyclinDI、CD23、CD5、Ki-67、HMB45、S-IOO、CKpan、波形蛋白、CDIO、ALK、CD65、CD56等。

    1.4 ISH檢測

    應(yīng)用ISH技術(shù)檢測40例淋巴瘤石蠟包埋組織EBV的感染情況,采用地高辛標(biāo)記的EBER RNA寡核苷酸探針,與EBV編碼的小RNA互補(bǔ)結(jié)合。連續(xù)切片,厚度3-4μm,附于3氨丙基三乙氧硅烷(APEC)處理過的載玻片上。58℃烤片2h,二甲苯脫蠟lOmin,無水乙醇浸泡5min。空氣干燥,加胃蛋白酶于37℃環(huán)境下消化30min,梯度乙醇脫水、空氣干燥。滴加探針,加蓋玻片,37℃孵育過夜。PBS沖洗,加辣根過氧化物酶標(biāo)記的地高辛抗體,37℃孵育30min,DAB顯色,蘇木精復(fù)染。分別使用陽性對照探針與陰性對照應(yīng)用于已知的陽性切片。

    1.5 結(jié)果判斷結(jié)果

    陽性信號呈紫藍(lán)色,定位于細(xì)胞核,每(20×10)倍視野中陽性細(xì)胞數(shù)≤1%為1分,2%-lO%為2分,11%-50%為3分,大于等于51%為4分。1-4分為陽性,O分為陰性。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS17.O統(tǒng)計(jì)軟件,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與各臨床病理特征關(guān)系的單因素分析采用卡方檢驗(yàn),多因素分析采用Logistic回歸模型,以P

    2 結(jié)果

    2.1 頜而部淋巴瘤的臨床病理特征與EBV感染的相關(guān)性

    入組的40例頜而部淋巴瘤患者中,出現(xiàn)EBV感染有18例,占45%。從性別、年齡、腫瘤部位、HL淋巴結(jié)內(nèi)外、病灶數(shù)量、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平進(jìn)行比較,性別、年齡、腫瘤部位、病灶數(shù)量各亞組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05);HL結(jié)內(nèi)占60%,高于結(jié)外,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);臨床分期方而,III+IV期者71.4%,高于I+II期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);腫瘤分型上,NHL占54.9%,HL占11.1%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);病理分型中,NKT出現(xiàn)EBV感染者占76.9%,BCL占23.1%,TCL占200h,HL占11.1%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P250mmol/l者占60%,高于LDH≤250mmol/l者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);具體結(jié)果見表1所示。

    2.2 頜而部淋巴瘤的臨床病理特征與EBV感染的多因素分析

    對HL淋巴結(jié)發(fā)生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平進(jìn)行l(wèi)ogistic多因素分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),HL淋巴結(jié)發(fā)生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜而部淋巴瘤患者EBV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,其相對危險(xiǎn)度見表2。

    3 討論

    惡性淋巴瘤發(fā)生于淋巴細(xì)胞及前體細(xì)胞,首發(fā)癥狀為肉眼可見的,呈局灶性的腫瘤性質(zhì)的腫物。淋巴瘤分兩大類:霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤,后者占淋巴瘤總數(shù)的80%-90%。EBV主要入侵人體的口腔、鼻咽部淋巴組織,感染B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞,約90%成人血清中可檢測到EBV抗體,EBV隱性感染者可終身攜帶。截至目前的研究發(fā)現(xiàn),EBV感染與鼻咽癌、淋巴瘤、淋巴組織增生性疾病有關(guān)。然而,EBV感染與淋巴瘤的臨床病理特征是否有相關(guān)性,研究者們?nèi)晕唇?jīng)研究證實(shí)。

    在本研究ISH技術(shù)檢測EBV感染情況,出現(xiàn)EBV感染有18例,占45%。男性患者約45.5%出現(xiàn)EBV感染,女性占44.5%,60歲以下有52.2%出現(xiàn)EBV感染,60歲以上占35.3%。有研究者發(fā)現(xiàn),該病發(fā)病男性患者偏多,年齡2-82歲,男女比例2.4:1??谇活M而部淋巴瘤發(fā)生于牙齦、腭、頰、頜骨等部位,多為非霍奇金淋巴瘤。本研究中,發(fā)生于腮腺者占62.5%,牙齦區(qū)占71.4%,硬腭占57.1%,下頜骨占50%,在發(fā)病部位上無明顯差異。口腔頜而部淋巴瘤多為淋巴結(jié)外病變,有的表現(xiàn)為無淋巴結(jié)受累,發(fā)生于頜而骨的伯基特淋巴瘤都存在EBV感染。本研究中,NHL占54.9%,明顯高于HL的11.1%,HL結(jié)外者占60%,高于結(jié)內(nèi),提示HL淋巴結(jié)內(nèi)外發(fā)病與EBV感染有關(guān)。此外,本研究還從病灶數(shù)目、臨床分期、腫瘤分型、LDH水平等方而進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),單發(fā)病灶占39. 3%,多發(fā)者占58.3%,無明顯差異,III+IV期者71.4%,高于I+II期;NKT出現(xiàn)EBV感染者占76.9%,BCL占23.1%,TCL占20%,HL占11.1%; LDH>250mmol/l者占60%,高于LDH≤250mmol/l者。表明,EBV感染與頜而部淋巴瘤的臨床分期、腫瘤分型、LDH水平具有相關(guān)性。

    進(jìn)一步對單因素分析結(jié)果行l(wèi)ogistic多因素分析發(fā)現(xiàn),HL淋巴結(jié)內(nèi)外發(fā)生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜而部淋巴瘤患者EBV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在EBV的作用機(jī)制上,EBV通過gp350結(jié)合CD21,通過受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入被感染細(xì)胞,感染B淋巴細(xì)胞后,DNA自我復(fù)制。在口腔頜而部淋巴瘤中,NHL較HL更多見,約占總數(shù)的5%。EBV與經(jīng)典型HL所有亞型相關(guān),但EBV感染是NHL的非主要事件,是病因、促發(fā)因素、伴隨因素尚未證實(shí)。Kimura指出,口腔頜而部淋巴瘤與EBV感染有關(guān)的常發(fā)生于淋巴結(jié)外組織??谇活M而部EBV陽性淋巴瘤以NK/T為主,EBV感染與NK/T細(xì)胞淋巴瘤的生、發(fā)展密切相關(guān)。這均與本研究結(jié)果相近似。

    綜上所述,EBV感染在口腔頜而部淋巴瘤患者呈高度陽性表達(dá),與性別、年齡、腫瘤部位、病灶數(shù)量無關(guān),HL淋巴結(jié)內(nèi)外發(fā)生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜而部淋巴瘤患者EBV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,可能在淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。EBV感染與口腔頜而部淋巴瘤發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究,為臨床上尋找淋巴瘤新的治療方式提供理論依據(jù)。

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