• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶中的頭孢尼西

    2016-03-21 07:21:01周一平袁明美馮雪松
    化學(xué)研究 2016年1期
    關(guān)鍵詞:高效液相色譜質(zhì)譜牛奶

    周 昱,張 元,周一平,袁明美,馮雪松

    (中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,遼寧沈陽(yáng)110013)

    ?

    高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶中的頭孢尼西

    周昱,張?jiān)?,周一平,袁明美,馮雪松*

    (中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,遼寧沈陽(yáng)110013)

    摘要:建立了牛奶中頭孢尼西的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜( HPLC-MS/MS)快速測(cè)定方法.樣品采用乙腈提取,離心( 10 000 rmp,10 min),上清液加入乙腈飽和的正己烷,振蕩,取乙腈層,進(jìn)行分析.采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱為分析柱,以5 mmol/L乙酸銨和乙腈為流動(dòng)相,梯度洗脫分離,流速0.8 mL/min,溫度35℃,進(jìn)樣量5 μL,采用電噴霧負(fù)離子模式進(jìn)行電離,選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè),外標(biāo)法定量分析.頭孢尼西在1.0~100 μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好( r2=0.997),檢出限( LOD)為0.04 μg/L,定量限( LOQ)為0.15 μg/L,采用低、中、高3個(gè)添加水平,平行測(cè)定6次,所得平均回收率分別為90.3%、87.4%、93.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差( RSD)分別為4.5%、2.3%、2.1%.

    關(guān)鍵詞:牛奶;頭孢尼西;高效液相色譜;質(zhì)譜

    β-內(nèi)酰胺類抗生素是歷史最悠久的抗微生物藥物,同時(shí)也是使用量最大和最重要的一類抗生素[1],主要用于抑制革蘭氏菌[2],如葡萄球菌、肺炎球菌、鏈球菌、大腸桿菌、嗜血桿菌、沙門氏菌等.β-內(nèi)酰胺類抗生素作為奶牛飼養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)常使用的一類抗生素,其在牛奶中的殘留將會(huì)對(duì)人體健康帶來(lái)重要影響[3-5].如引起過(guò)敏反應(yīng)、造成泌尿系統(tǒng)損害和引起血液系統(tǒng)的反應(yīng),甚至偶爾引發(fā)肝炎[6]等.為了避免消費(fèi)者受到食品中抗生素殘留的危害,保護(hù)人民的身體健康,各國(guó)都對(duì)各種抗生素制定了嚴(yán)格的最高殘留限量( MRL)[7].如歐盟規(guī)定動(dòng)物組織和牛奶中各類頭孢菌素的MRL在20~100 μg/kg之間,其中牛奶中頭孢喹諾的MRL為20 μg/kg,而頭孢噻呋的MRL為100 μg/kg.頭孢尼西作為第二代注射用廣譜長(zhǎng)效頭孢菌素,其抗菌譜與頭孢孟多類似,主要用于敏感菌所致的下呼吸道感染、尿路感染以及敗血癥等,殘留在牛奶中的頭孢尼西可造成消費(fèi)者抽搐、頭痛、精神緊張等健康問(wèn)題.

    目前,β-內(nèi)酰胺類抗生素的檢測(cè)方法主要有微生物法、免疫測(cè)定法、氣相色譜法、液相色譜法以及液相色譜-質(zhì)譜法等[8-15].液相色譜-質(zhì)譜法作為一種高靈敏度和高選擇性的檢測(cè)方法,其檢出限越來(lái)越低,提供的碎片信息越來(lái)越多,在食品獸藥殘留中的應(yīng)用也日趨廣泛[16-17].然而由于文獻(xiàn)中所見(jiàn)報(bào)道的前處理繁瑣,耗時(shí)較長(zhǎng),并且頭孢尼西在常溫條件下極不穩(wěn)定.預(yù)實(shí)驗(yàn)證明頭孢尼西鈉1 000μg/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液在室溫下放置一天將分解10%,因此關(guān)于頭孢尼西的液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)方法尚未見(jiàn)報(bào)道.本研究采用乙腈提取牛奶中的頭孢尼西,而后采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立了牛奶中頭孢尼西含量的測(cè)定方法,該方法具有前處理簡(jiǎn)單、檢出限低、靈敏度高、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點(diǎn),可用于日常食品樣品中頭孢尼西含量的測(cè)定.

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1儀器與試劑

    液相色譜儀1260 (美國(guó)Agilent公司)串聯(lián)API5500三重四極桿質(zhì)譜儀(美國(guó)Applied Biosystem公司) ; Avanti J-30I離心機(jī)(美國(guó)Beckman Coulter公司) ; Milli-Q超純水處理系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司) ; SA-31振蕩器(日本Yamato公司) ;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BUCHI公司).

    頭孢尼西鈉(純度≥99%),購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司;乙腈、正己烷、乙酸銨為色譜純,購(gòu)自美國(guó)J&K公司;實(shí)驗(yàn)用水由Millipore純水儀制備.

    1.2溶液配制

    乙腈飽和正己烷:取100 mL正己烷和50 mL乙腈加入250 mL分液漏斗中,振搖1 min,靜置分層后棄掉乙腈.

    5 mmol/L乙酸銨:取385.4 mg乙酸銨加入1 L溶劑瓶?jī)?nèi),去離子水定容.

    1.3實(shí)驗(yàn)步驟

    稱取5 g試樣(精確至0.01 g)置于50 mL離心管中,加入20 mL乙腈,均質(zhì)器均質(zhì)2 min,提取液使用高速冷凍離心機(jī)在10℃,10 000 r/min離心10 min,然后加入10 mL乙腈飽和正己烷,震蕩1 min,棄掉正己烷,過(guò)膜,上機(jī).

    1.4實(shí)驗(yàn)條件

    液相色譜條件:色譜柱ZORBAX Eclipse XDBC18 column ( 150 mm×4.6 mm,5 μm) ;柱溫35℃;樣品室溫度4℃;進(jìn)樣體積5 μL;流動(dòng)相A為5 mmol/L乙酸銨溶液,流動(dòng)相B為乙腈.梯度洗脫程序: 0~3.0 min,5%~50% B; 3.1~4.0 min,95% B; 4.1 ~5.0 min,5% B,流速為0.8 mL/min.

    質(zhì)譜條件:電噴霧電離源5 500℃,負(fù)離子模式,多反應(yīng)監(jiān)測(cè)( MRM) ;實(shí)驗(yàn)中所用的氣體均為高純氮?dú)?,碰撞? CAD)壓力為7 kPa,氣簾氣( CUR)壓力為30 kPa,霧化氣( GS1)壓力為55 kPa,輔助氣( GS2)壓力為65 kPa.電噴霧電壓( IS)為-4.5 kV,去溶劑溫度( TEM)為600℃,碰撞室出口電壓( CXP)為-21 V.分析物的定性/定量離子對(duì),去簇電壓( DP)及碰撞電壓( CE)見(jiàn)表1.

    表1 頭孢尼西的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Mass spectrometer parameters of Cefonicid

    2 結(jié)果與討論

    2.1樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

    多數(shù)乳制品樣品中含有大量的蛋白質(zhì)和脂肪,這會(huì)給后續(xù)的檢測(cè)帶來(lái)極大的干擾,所以在樣品前處理中需要使用酸或有機(jī)溶劑將其中大部分的蛋白成分進(jìn)行變性和沉淀.考慮到頭孢尼西含有的四元環(huán)結(jié)構(gòu)在強(qiáng)酸條件下不穩(wěn)定,因此樣品提取及沉淀蛋白應(yīng)避免強(qiáng)酸的使用.本研究對(duì)比了有機(jī)溶劑甲醇和乙腈的提取效果,發(fā)現(xiàn)乙腈的提取效率優(yōu)于甲醇的,結(jié)果見(jiàn)圖1.乙腈提取物經(jīng)過(guò)離心取上清液,用乙腈飽和的正己烷對(duì)上清液進(jìn)行液液萃取,以有效去除牛奶中的脂肪.此方法離心后可以直接上機(jī)檢測(cè),不需采用SPE柱凈化處理,大大縮短了前處理時(shí)間,并且節(jié)省了SPE柱耗材費(fèi)用.

    圖1 不同試劑的提取效率對(duì)比Fig.1 Comparison of extract efficiency of different solvent

    2.2色譜條件優(yōu)化

    液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)用于頭孢尼西的檢測(cè)尚未見(jiàn)報(bào)道,因此本研究考察了甲醇-水和乙腈-水作為流動(dòng)相時(shí)檢測(cè)頭孢尼西的靈敏度(圖2).采用乙腈-水作為流動(dòng)相,100 ppb頭孢尼西的響應(yīng)強(qiáng)度是甲醇-水作為流動(dòng)相時(shí)的2倍,并且甲醇-水作為流動(dòng)相的噪音較高,本研究選擇乙腈-水為流動(dòng)相.

    圖2 不同流動(dòng)相頭孢尼西標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)圖Fig.2 Comparison of different mobile phase for cefonicid

    2.3質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    在ESI+和ESI-離子化模式下,考察了頭孢尼西的電離效果.實(shí)驗(yàn)表明,頭孢尼西在ESI-電離方式下響應(yīng)較好,這可能與頭孢尼西呈弱酸性相關(guān).頭孢尼西的分子結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖3.頭孢尼西的定量離子對(duì)提取離子色譜圖見(jiàn)圖4.

    圖3 頭孢尼西分子結(jié)構(gòu)圖Fig.3 Molecular structure of Cefonicid

    圖4 定量離子對(duì)提取離子色譜圖Fig.4 Extracted ion chromatograph of Cefonicid

    使用陰性牛奶提取液逐級(jí)稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液至濃度為1、5、10、25、100 μg/L,在優(yōu)化的色譜和質(zhì)譜條件下測(cè)定,根據(jù)待測(cè)物濃度和定量離子峰面積關(guān)系進(jìn)行線性回歸.對(duì)陰性空白樣品提取液進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn),根據(jù)各定量離子3和10倍信噪比( S/N)對(duì)應(yīng)樣品中目標(biāo)化合物的濃度,得到檢出限和定量限(表2).

    表2 頭孢尼西線性關(guān)系、檢出限( LOD)和定量限( LOQ)Table 2 Quadratic relationships,limits of detection ( LOD) and limits of quantification ( LOQ) of Cefonicid

    2.4回收率和精密度

    在空白牛奶樣品中添加3個(gè)濃度水平( 0.15、0.3、0.6 μg/L)的標(biāo)準(zhǔn)溶液,每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本方法的回收率在87.4%~93.5%范圍內(nèi),精密度( RSD)小于5%,這表明本方法可以應(yīng)用于實(shí)際樣品的測(cè)定.

    表3 頭孢尼西平均回收率和精密度Table 3 Recoveries and precisions of Cefonicid

    2.5實(shí)際樣品的測(cè)定

    應(yīng)用本方法對(duì)30份采集自超市的牛奶樣品進(jìn)行測(cè)定,均未檢出頭孢尼西.下一步將擴(kuò)大樣品范圍、對(duì)集貿(mào)市場(chǎng)等地的樣品也進(jìn)行檢測(cè)和分析,以摸清我國(guó)目前的牛奶中頭孢尼西使用情況.

    3 結(jié)論

    通過(guò)對(duì)牛奶樣品前處理方法的優(yōu)化,建立了牛奶中頭孢尼西的LC-MS/MS檢測(cè)方法.該方法具有快速簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、檢出限低的特點(diǎn),能夠滿足牛奶中頭孢尼西的檢測(cè)需求,其儀器條件也適用于其他類基質(zhì)中頭孢尼西的檢測(cè).

    參考文獻(xiàn):

    [1]劉榮森,趙文善.鄰菲啰啉-Fe(Ⅱ)分光光度法測(cè)定頭孢唑啉鈉[J].化學(xué)研究,2015,26( 1) : 54-57.

    [2]中國(guó)獸藥典委員會(huì).中國(guó)獸藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005: 78-94.

    [3]張琦,葉能勝,谷學(xué)新,等.β-內(nèi)酰胺類抗生素分析檢測(cè)技術(shù)及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J].化學(xué)通報(bào),2009,72( 5) : 394 -400.

    [4]孟靜,王銳,祝建華.生鮮牛乳中抗生素檢測(cè)方法的新問(wèn)題[J].中國(guó)乳品工業(yè),2010,38( 9) : 42-44.

    [5]VAN HOLTHOON F,MULDER P P,VAN BENNEKOM E O,et al.Quantitative analysis of penicillins in porcine tissues,milk and animal feed using derivatisation with piperidine and stable isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry [J].Anal Bioanal Chem,2010,396( 8) : 3027 -3040.

    [6]CHIEN J Y,HSUEH P R,YU C J,et al.The evolution of drug-resistant microorganisms in patients with prolonged mechanical ventilation [J].Am J Infect Control,2010,37( 3) : 231-236.

    [7]BOGIALLI S,CAPITOLINO V,CURINI R,et al.Simple and rapid liquid chromatography-tandem mass spectrometry confirmatory assay for determining amoxicillin and ampicillin in bovine tissues and milk [J].J Agric Food Chem,2004,52( 11) : 3286-3291.

    [8]TSANG M W,SO P K,LIU S Y,et al.Catalytically impaired fluorescent class C β-lactamase enables rapid and sensitive cephalosporin detection by stabilizing fluorescence signals: implications for biosensor design [J].Biotechnol J,2015,10( 1) : 126-135.

    [9]JUNZA A,DORIVAL-GARCíA N,ZAFRA-GóMEZ A,et al.Multiclass method for the determination of quinolones and β-lactams,in raw cow milk using dispersive liquid-liquid microextraction and ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].J Chromatogr A,2014,1356: 10-22.

    [10]LIU X,YU Y,ZHAO M,et al.Solid phase extraction using magnetic core mesoporous shell microspheres with C18-modified interior pore-walls for residue analysis of cephalosporins in milk by LC-MS/MS [J].Food Chem,2014,150: 206-212.

    [11]QUESADA-MOLINA C,GARCíA-CAMPA?A A M,DEL OLMO-IRUELA M.Ion-paired extraction of cephalosporins in acetone prior to their analysis by capillary liquid chromatography in environmental water and meat samples [J].Talanta,2013,115: 943-949.

    [12]HOU X L,WU Y L,LV Y,et al.Development and validation of an ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method for determination of 10 cephalosporins and desacetylcefapirin in milk [J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2013,931: 6-11.

    [13]KARAGEORGOU E,MYRIDAKIS A,STEPHANOU E G,et al.Multiresidue LC-MS/MS analysis of cephalosporins and quinolones in milk following ultrasound-assisted matrix solidphase dispersive extraction combined with the quick,easy,cheap,effective,rugged,and safe methodology[J].J Sep Sci,2013,36( 12) : 2020-2027.

    [14]CAPRIOTTI A L,CAVALIERE C,PIOVESANA S,et al.Multiclass screening method based on solvent extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of antimicrobials and mycotoxins in egg [J ].J Chromatogr A,2012,1268: 84-90.

    [15]BERENDSEN B J,STOLKER L A,NIELEN M W.Assessment of liquid chromatography-tandem mass spectrometry approaches for the analysis of ceftiofur metabolites in poultry muscle [J].Food Addit Contam Part A,2012,29( 2) : 197 -207.

    [16]BALIZA G,HEWITT A.Determination of veterinary drug residues by liquid chromatography and tandem mass spectrometry [J].Anal Chim Acta,2003,492: 105-131.

    [17]錢永軍,鞏軍,李云松.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)乳中β-內(nèi)酰胺類抗生素研究進(jìn)展[J].中國(guó)乳品工業(yè),2005,33 ( 2) : 41-43.

    [責(zé)任編輯:任鐵鋼]

    Determination of cefonicid in milk by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

    ZHOU Yu,ZHANG Yuan,ZHOU Yiping,YUAN Mingmei,F(xiàn)ENG Xuesong*

    ( School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110013,Liaoning,China)

    Abstract:A method based on high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry ( HPLC-MS) was established for the determination of cefonicid in milk.The milk sample was extracted with acetonitrile.Then,samples were centrifuged ( 10 000 r/min,10 min) to obtain the supernatant.After that the supernatant was added into acetonitrile-saturated hexane solutions and shaken to obtain the acetonitrile-soluble substances which were directly determined by HPLC-MS.The separation was performed on an ZORBAX Eclipse XDB-C18 column ( 150 mm×4.6 mm,5 μm) with 5 mmol/L ammonium acetate and acetonitrile gradient solution as the mobile phase at a flow rate of 0.8 mL/min and 35℃.The sample injection volume was 5 μL.The electrospray source was operated in the negative ion mode,and monitored in the selective reaction monitoring ( SRM) mode.The concentration of cefonicid in the range of 1.0-100 μg/kg was linearly correlated to the peak area,with correlation coefficients 0.997.The limit of detection ( LOD) and limit of quantitation ( LOQ) were determined to be 0.04 μg/ L and 0.15 μg/L,respectively the recoveries of cefonicid were from 87.4% to 93.5% with the relative standard deviations ( RSD) of 2.1% to 4.5%( n = 6).

    Keywords:milk; cefonicid; high performance liquid chromatography; mass spectrometry

    作者簡(jiǎn)介:周昱( 1989-),女,碩士生,從事藥劑學(xué)及藥物分析研究.*通訊聯(lián)系人,E-mail: voncedar@ 126.com.

    基金項(xiàng)目:遼寧省科學(xué)技術(shù)廳自然科學(xué)基金( 201202252).

    收稿日期:2015-11-09.

    中圖分類號(hào):R917

    文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1008-1011( 2016) 01-0077-04

    猜你喜歡
    高效液相色譜質(zhì)譜牛奶
    送牛奶
    氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀在農(nóng)殘檢測(cè)中的應(yīng)用及維護(hù)
    炫彩牛奶畫
    樹(shù)上也能擠出“牛奶”嗎?
    高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定檳榔中9種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留
    高效液相色譜—二極管陣列檢測(cè)器法測(cè)定膠囊殼中20種禁用工業(yè)染料
    高效液相色譜技術(shù)在石油化工中的應(yīng)用分析
    高效液相色譜概述及其在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用
    神奇的牛奶樹(shù)
    吹掃捕集-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水中18種揮發(fā)性有機(jī)物
    鹤岗市| 抚州市| 饶河县| 宁夏| 太谷县| 上虞市| 宝坻区| 铜川市| 景宁| 屏山县| 汉中市| 荔浦县| 尼玛县| 来宾市| 丰都县| 台东县| 格尔木市| 宁河县| 濉溪县| 龙陵县| 闽清县| 武邑县| 甘泉县| 延长县| 昆山市| 韩城市| 灵宝市| 浙江省| 工布江达县| 嘉禾县| 鹿邑县| 新营市| 苗栗县| 罗城| 忻城县| 庆元县| 池州市| 湛江市| 徐汇区| 阜城县| 杭锦后旗|