豬屎豆不同部位黃酮含量的測定及比較

郭艷峰， 黃 鈺， 劉 妍， 黃 冬　(中山火炬職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物醫(yī)藥系 ，廣東中山 528436)

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豬屎豆不同部位黃酮含量的測定及比較

郭艷峰， 黃 鈺， 劉 妍， 黃 冬*(中山火炬職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物醫(yī)藥系 ，廣東中山 528436)

摘要[目的]研究豬屎豆不同部位不同提取相的黃酮含量。[方法]采用乙醇回流提取作為豬屎豆黃酮的制備方法；以蘆丁為對照品，采用紫外-可見分光光度法作為黃酮的測定方法。[結(jié)果]葉片石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黃酮含量分別為14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，果實各萃取相黃酮含量分別為3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；豬屎豆葉片石油醚相、氯仿相和水相的黃酮含量顯著高于果實相應(yīng)的黃酮含量，果實乙酸乙酯相的黃酮含量顯著高于葉片乙酸乙酯相的黃酮含量。[結(jié)論]豬屎豆葉片和果實可作為黃酮開發(fā)利用的重要來源之一。

關(guān)鍵詞豬屎豆；黃酮；不同部位；乙醇回流提??；紫外分光光度法

黃酮類化合物的基本結(jié)構(gòu)構(gòu)成為C-G-C 方式，屬于植物次級代謝產(chǎn)物。黃酮類化合物具有來源廣、生物活性多、毒副作用小等特點，目前廣泛應(yīng)用于臨床，可影響心血管系統(tǒng)、抗炎調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗菌抗病毒、免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等[1]。近年來，植物源藥劑以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物更是以其光譜的藥理作用引人矚目，是當(dāng)前藥品、功能食品和保健品開發(fā)的重點活性物質(zhì)[2]。

黃酮類化合物廣泛存在于豆科植物中，但在豬屎豆屬植物中僅有少量分布，主要分布在該屬馬都拉豬屎豆(C.Madurensis)中[3]。豬屎豆(CrotalariapallidaAiton)是豆科(Leguminosae)豬屎豆屬(Crotalaria)多年生草本，是世界廣布種，原產(chǎn)于熱帶美洲，分布于大西洋海岸線、巴西、美洲、非洲及中國大部分地區(qū)，常見于路邊、河邊、沙地還有貧瘠的山坡[4-5]。豬屎豆具有較好的生物活性，全草有散結(jié)、清濕熱等作用，近年來試用于抗腫瘤效果較好，主要對鱗狀上皮癌、基底細胞癌有療效[5]。豬屎豆生長茂密、生長速度快、花期長、結(jié)實率高[4]，每年都能采集到大量的豬屎豆葉和莢果。已有研究顯示，豬屎豆葉片提取物總黃酮具有良好的抑菌活性[2]，能廣泛用于殺菌劑、保鮮劑等產(chǎn)品的開發(fā)，但至今對果實的研究及開發(fā)利用還很缺乏，造成了極大的資源浪費。該研究對豬屎豆不同部位不同提取相的黃酮進行了含量的測定，明確果實總黃酮含量的情況，以期為果實在黃酮類功能產(chǎn)品方面的開發(fā)以及豬屎豆植物的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料豬屎豆(CrotalariapallidaAit.)葉片和果實分別于2015年12月21日采自廣東省中山市陵崗村，經(jīng)中山市森林資源中心蔣謙才高級工程師鑒定為豆科(Leguminosae)豬屎豆屬(Crotalaria)豬屎豆的葉片和果實。采集后的葉片和果實經(jīng)80 ℃干燥后粉粹備用。

1.2儀器和試劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-30L)，紫外可見分光光度儀(北京譜析TU-1901)，粉碎機(LD-800，粉粹細度30～200目)。蘆丁(上海江萊生物科技有限公司，優(yōu)級純，規(guī)格100 mg)，乙醇、石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、氯仿試劑、氫氧化鈉、硝酸鋁均為分析純。

1.3試驗方法

1.3.1豬屎豆葉片提取物的制備。分別精密稱取豬屎豆葉片和果實粉末200 g，分別置于1 000 mL的圓底燒瓶中，加石油醚300 mL，回流提取2 h，直至溶劑無色，揮發(fā)完樣品中的石油醚，加80%乙醇300 mL進行回流提取2 h，過濾后濾渣繼續(xù)用80%的乙醇回流提取1 h，合并濾液，將乙醇旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)完，得浸膏。

1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。參考王芳等[2]、余文新等[6]方法配置蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，選擇合適的測定波長(500 nm)進行吸光度測定，每濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)測3次。繪制蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出吸光度A與蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度之間的線性回歸方程。

2結(jié)果與方法

2.1豬屎豆樣品不同提取部位的浸膏得率取干燥的豬屎豆葉片樣品200 g，分別利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取葉片得浸膏11 g，得率為2.75%；氯仿萃取葉片得浸膏13 g，得率為3.25%；乙酸乙酯萃取葉片得浸膏12 g，得率為3.00%；水相萃取葉片得浸膏13 g，得率為3.25%。

取干燥的豬屎豆果實樣品200 g，分別利用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水提取，石油醚萃取果實得浸膏17 g，得率為4.25%；氯仿萃取果實得浸膏18 g，得率為4.50%；乙酸乙酯萃取果實得浸膏15 g，得率為3.75%；水相萃取果實得浸膏11 g，得率為2.75%。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度值的回歸方程由圖1可見，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度之間的線性回歸方程為A=4.685 7x-0.010 5(R2=0.992 0)，表明蘆丁的質(zhì)量濃度在0.01～0.05 mg/mL與吸光度有良好的線性關(guān)系。

2.3各萃取相黃酮含量按照標(biāo)準(zhǔn)曲線及其換算關(guān)系，計算豬屎豆葉片及果實提取物各部分黃酮含量，結(jié)果表明(表1)，石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相葉片的黃酮含量分別為14.63、92.67、8.29、98.80 mg/g，各萃取相果實黃酮含量分別為3.24、30.54、52.15、59.72 mg/g；石油醚相、氯仿相和水相葉片的黃酮含量顯著高于果實的黃酮含量(P< 0.05)，乙酸乙酯相果實黃酮含量顯著高于葉片黃酮含量(P<0.05)。

3結(jié)論

該試驗采用體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇，70 ℃回流提取豬屎豆葉片和果實中的有效成分，分別得到了石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和水相的黃酮含量。結(jié)果顯示，葉片石油醚相黃酮含量為14.63 mg/g，氯仿相黃酮含量為92.67 mg/g，乙酸乙酯相黃酮含量為8.29 mg/g，水相黃酮含量為98.80 mg/g；果實石油醚相黃酮含量為3.24 mg/g，氯仿相黃酮含量為30.54 mg/g，乙酸乙酯相黃酮含量為52.15 mg/g，水相黃酮含量為59.72 mg/g。比較而言，豬屎豆葉片石油醚相、氯仿相和水相的黃酮含量顯著高于果實相應(yīng)的黃酮含量，果實乙酸乙酯相的黃酮含量顯著高于葉片乙酸乙酯相的黃酮含量。

參考文獻

[1] 王曉梅,曹穩(wěn)根.黃酮類化合物藥理作用的研究進展[J].宿州學(xué)院學(xué)報,2007,22(1): 105-107.

[2] 王芳,高瑾,毛宇，等.豬屎豆葉片提取物總黃酮含量及其抑菌活性研究[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2014,36(4): 861-867.

[3] YIN Z L.The study on distribution,pharmacology and analytical methods of isoflavone[J].Lishizhen Med Mat Medica Res,2003,14(3): 178.

[4] 郭艷峰,劉妍,蔣謙才，等.先鋒植物豬屎豆Crotalariapallida自花傳粉機制研究[J].廣西植物 (已接收).

[5] XU L R.Fabaceae (Leguminosae)[M]//Floral of China 10.Beijing：Science Press and St.Louis: Missouri Botanical Garden Press，2010：105-117.

[6] 余文新,鄧瑞云,林勵，等.檀香不同部位總黃酮含量比較[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,33(1): 3-4.

Comparison and Determination of Total Flavonoids in Different Parts ofCrotalariapallida

GUO Yan-feng, HUANG Yu, LIU Yan, HUANG Dong*

(Department of Biomedicine,Zhongshan Torch Polytechnic,Zhongshan,Guangdong 528436)

Key wordsCrotalariapallida; Flavonoids; Different parts; Ethanol reflux extraction; Ultraviolet spectrophotometry

Abstract[Objective] To research the flavonoids content in different parts ofCrotalariapallidaat different extraction phases.[Method] Flavonoids were prepared fromC.pallidaby ethanol reflux extraction.With rutin as the reference substances,UV-VIS spectrophotometry was used as the detection method of flavonoids.[Conclusion] Flavonoids contents inC.pallidaleaves in petroleum ether phase,chloroform phase,ethyl acetate phase and water phase were 14.63,92.67,8.29 and 98.80 mg/g,respectively.Flavonoids contents inC.pallidafruits were 3.24,30.54,52.15 and 59.72 mg/g,respectively.Flavonoids contents inC.pallidaleaves in petroleum ether phase,chloroform phase and water phase were significantly higher than those inC.pallidafruits.Flavonoids content inC.pallidafruits in ethyl acetate phase was significantly higher than that inC.pallidaleaves.[Conclusion]C.pallidaleaves and fruits were important sources for the development and utilization of flavonoids.

基金項目中山市公益研究項目(2015B2355)。

作者簡介郭艷峰(1984-)，女，山西汾西人，博士，從事植物功能產(chǎn)品開發(fā)研究。*通訊作者，教授，從事天然產(chǎn)物開發(fā)研究。

收稿日期2016-02-19

中圖分類號S 567.23+9

文獻標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611(2016)07-145-02