降鈣素原乳膠增強(qiáng)免疫比濁法與免疫熒光法的相關(guān)性

楊澤權(quán)

(云南省曲靖市馬龍縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南曲靖 655199)

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降鈣素原乳膠增強(qiáng)免疫比濁法與免疫熒光法的相關(guān)性

楊澤權(quán)

(云南省曲靖市馬龍縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南曲靖 655199)

摘要:目的探討乳膠增強(qiáng)免疫比濁法與免疫熒光法定量檢測(cè)降鈣素原(PCT)的分析性能。方法乳膠增強(qiáng)免疫比濁法采用美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司AU5800全自動(dòng)生化分析儀，免疫熒光法采用mini VIDAS全自動(dòng)熒光免疫分析儀，檢測(cè)相應(yīng)配套高值、低值質(zhì)控品，計(jì)算日內(nèi)及日間的精密度，檢測(cè)相應(yīng)試劑非同批號(hào)定值標(biāo)準(zhǔn)品的偏倚程度，對(duì)2組檢測(cè)方法的相關(guān)性進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。結(jié)果乳膠增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)PCT高值質(zhì)控品日內(nèi)精密度及日間精密度分別為2.89%、3.84%，低值質(zhì)控品日內(nèi)精密度及日間精密度分別為1.81%、3.77%；免疫熒光法檢測(cè)PCT高值質(zhì)控品日內(nèi)精密度及日間精密度分別為2.42 %、3.83%，低值質(zhì)控品分別為2.03%、3.43%；乳膠增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)PCT高值定值標(biāo)準(zhǔn)品與低值定值標(biāo)準(zhǔn)品的偏倚分別為3.30%、-2.49%，免疫熒光法檢測(cè)PCT高值定值標(biāo)準(zhǔn)品與低值定值標(biāo)準(zhǔn)品的偏倚分別為2.88%、3.63%；乳膠增強(qiáng)免疫比濁法在檢測(cè)范圍內(nèi)線性良好(Y=1.028 1X-0.289 4，R2=0.994 7)，免疫熒光法在檢測(cè)范圍內(nèi)線性良好(Y=1.079 8X+0.179 4，R2=0.992 8)，2種方法相關(guān)性良好(Y=0.357 2X+0.284 5，R2=0.994 2)。結(jié)論乳膠增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)PCT性能良好，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，且由于其成本低，更值得臨床推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞:降鈣素原；乳膠增強(qiáng)免疫比濁法；免疫熒光法；相關(guān)性

降鈣素原(PCT)作為檢測(cè)感染性疾病的一項(xiàng)重要炎性標(biāo)志物，PCT與其他炎性指標(biāo)相比較，具有較高的特異度和靈敏度。因此，實(shí)現(xiàn)PCT的快速檢測(cè)具有重要意義。本研究按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)制定的EP15-A2和EP9-A2文件要求[1]，對(duì)本院所使用的兩個(gè)不同PCT檢測(cè)系統(tǒng)(乳膠增強(qiáng)免疫比濁法與免疫熒光法)的相關(guān)性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為合理選擇PCT檢測(cè)系統(tǒng)提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源選擇2014年12月至2015年2月本院門診、急診及住院患者的血清標(biāo)本300份，均無黃疸、脂血及溶血。其中來自男性患者176份，女性患者124份，患者年齡76～82歲，平均(51.75±17.88)歲；所選研究對(duì)象中包括輕、中、重度炎癥患者及一定數(shù)量的健康人。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)方法乳膠增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)選用寧波美康生物科技股份有限公司提供的PCT檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20040105)，采用美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司AU5800全自動(dòng)生化分析儀；免疫熒光法選用法國(guó)生物梅里埃股份有限公司提供的mini VIDAS全自動(dòng)熒光分析儀，以及配套試劑、定標(biāo)液；質(zhì)控品(批號(hào)173339-03)來自德國(guó)羅氏診斷有限公司。標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)083113)來自安徽大千生物工程有限公司。嚴(yán)格按照2種檢測(cè)方法的操作手冊(cè)進(jìn)行相關(guān)操作，并準(zhǔn)確記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.2.2日內(nèi)與日間精密度檢測(cè)日內(nèi)精密度的檢測(cè)：2 h內(nèi)對(duì)高值、低值質(zhì)控品連續(xù)檢測(cè)20次；日間精密度：連續(xù)20 d，每天一次檢測(cè)高值、低值質(zhì)控品；數(shù)據(jù)處理，計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)(CV)[2]。

1.2.3準(zhǔn)確度檢測(cè)2種檢測(cè)方法對(duì)不同批號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，將測(cè)得的結(jié)果導(dǎo)入線性范圍得出的公式中，求出檢測(cè)值，比較標(biāo)準(zhǔn)品定值與檢測(cè)值之間的偏倚。

1.2.4線性范圍檢測(cè)將高濃度和低濃度標(biāo)本按照等比關(guān)系配制成具有梯度濃度的血清，2種檢測(cè)方法每個(gè)標(biāo)本平行檢測(cè)3次，記錄結(jié)果，理論值為X，求得均值為Y。

1.2.5相關(guān)性分析選取檢測(cè)結(jié)果都在線性范圍的標(biāo)準(zhǔn)，以mini VIDAS檢測(cè)結(jié)果為Y，以AU5800檢測(cè)結(jié)果為X，進(jìn)行相關(guān)性分析[3]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件與Excel2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行描述統(tǒng)計(jì)；采用Bland-Altman法進(jìn)行偏倚計(jì)算；采用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性評(píng)價(jià)。

2結(jié)果

2.12種檢測(cè)方法日內(nèi)和日間精密度乳膠增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)PCT高值質(zhì)控品日內(nèi)精密度及日間精密度分別為2.89%、3.84%，低值質(zhì)控品分別為1.81%、3.77%；免疫熒光法檢測(cè)PCT高值質(zhì)控品日內(nèi)精密度及日間精密度分別為2.42%、3.83%，低值質(zhì)控品分別為2.03%、3.43%，見表1～2。

2.22種檢測(cè)方法準(zhǔn)確度檢測(cè)乳膠增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)PCT高值定值標(biāo)準(zhǔn)品與低值定值標(biāo)準(zhǔn)品的偏倚分別為3.30%、-2.49%，免疫熒光法檢測(cè)PCT高值定值標(biāo)準(zhǔn)品與低值定值標(biāo)準(zhǔn)品的偏倚分別為2.88%、3.63%，均小于±10%，2種檢測(cè)方法均在臨床檢驗(yàn)科可接受范圍，見表3。

表1　　乳膠增強(qiáng)免疫比濁法日內(nèi)精密度

表2　　免疫熒光法日內(nèi)精密度與日間精密度(n=20)

表3　　2種檢測(cè)方法準(zhǔn)確度的檢測(cè)

2.3相關(guān)分析7份梯度濃度血清的理論濃度由低到高依次為：0.052、0.64、3.02、15.02、29.85、44.82、60.24 ng/mL，生理鹽水為0 ng/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線選用這8個(gè)不同濃度的標(biāo)本，乳膠增強(qiáng)免疫比濁法得到線性回歸方程為Y=1.028 1X-0.289 4，R2=0.994 7，線性范圍0.05～60.00 ng/mL；免疫熒光法檢測(cè)的線性回歸方程為Y=1.079 8X+0.179 4，R2=0.992 8，線性范圍0.05～200.00 ng/mL。2種檢測(cè)方法相關(guān)良好(Y=0.357 2X+0.284 5，R2=0.994 2)。

3討論

PCT是一種無激素活性的糖蛋白，含有116個(gè)氨基酸的降鈣素前體，臨床上常被用來作為鑒別感染性疾病的標(biāo)志物。PCT的檢測(cè)有助于診斷敗血癥、菌血癥及血行感染，評(píng)價(jià)治療效果及預(yù)后，為抗菌藥物的用藥指導(dǎo)提供了重要的參考[4]。臨床上常用PCT的檢測(cè)方法有放射免疫法、雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、膠體金法、電化學(xué)發(fā)光法等。

乳膠增強(qiáng)免疫比濁法中，聚苯乙烯顆粒表面修飾有抗體，當(dāng)檢測(cè)樣品中有抗原存在時(shí)，基于免疫沉淀反應(yīng)原理形成不溶性免疫復(fù)合物。免疫熒光法是基于熒光標(biāo)簽修飾的單克隆抗體與樣品中存在的抗原結(jié)合形成復(fù)合物，待檢測(cè)的抗原量越多，熒光信號(hào)上升[5]。本研究結(jié)果顯示，2種檢測(cè)方法均有較好的精密度和準(zhǔn)確度，而且2種檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性(Y=0.357 2X+0.284 5，R2=0.994 2)。熒光免疫法雖然具有靈敏度高，特異度強(qiáng)的特點(diǎn)，但成本較高，限制了臨床使用。乳膠增強(qiáng)免疫比濁法操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)過程快速，可使用生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，成本較低，能較好地滿足臨床需求。

綜上所述，乳膠增強(qiáng)免疫比濁法和免疫熒光法檢測(cè)PCT均有較好的精密度和準(zhǔn)確度，相關(guān)性良好。然而，乳膠增強(qiáng)免疫比濁法成本低，性能良好，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，更適合臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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[2]戴婉茹，周歡，林燕輝，等.免疫投射比濁法在AU5800全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)降鈣素原的方法學(xué)評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015,12(10)：1447-1448.

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(收稿日期：2015-10-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.061

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1673-4130(2016)03-0416-02