HPLC法測定復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷的含量

楊玲霞朱旭江葉艷芬.甘肅省食品藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅　蘭州　730000; .甘肅省天水市岐黃藥業(yè)有限責(zé)任公司，甘肅　天水　74000

HPLC法測定復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷的含量

楊玲霞1朱旭江1葉艷芬2
1.甘肅省食品藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅蘭州730000; 2.甘肅省天水市岐黃藥業(yè)有限責(zé)任公司，甘肅天水741000

【摘要】目的:測定復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量.方法:采用HPLC法，以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑，流動相為乙腈－0. 2%磷酸(15∶75)，檢測波長為256 nm，流速為1. 0 ml/min.結(jié)果:金絲桃苷進(jìn)樣量在3. 56～71. 2 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系(r =0. 999);平均加樣回收率為98. 93%，RSD =1. 98%(n =6).結(jié)論:該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量測定.

【關(guān)鍵詞】復(fù)方羅布麻片Ⅰ;金絲桃苷;高效液相色譜法

Determination of Hyperoside in Compound luobuma tablets I by HPLC

YANG Ling－xia，ZHU Xu－jiang，YE Yan－fen

Institute for Food and Drug Control of Gansu Province，Lanzhou 730000，China; Tianshui City，Gansu Province Qihuang Pharmaceutical Co，Ltd．Tiunshui 741000，China

Abstract:ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of Hyperoside in Compound luobuma tablets I．MethodsThe HPLC method was used with a mixture of accetonitrile－0. 2% phosphate(15∶75)as the mobile phase．The determination wavelength was set at 256nm with the flow rate of 1. 0ml/min．ResultsThere was a good linearrelationship between the sample volume and the peak area in the range of 35. 6μg～71. 2μg(r =0. 999)．The average recovery rate was 98. 93%，RSD =1. 98%(n =6)．ConclusionsThe method is stable and accurate．It can be used for the content determination of Hyperoside in Compound luobuma tablets I．

Key words:Compound luobuman tablets I; Hyperoside; HPLC

復(fù)方羅布麻片Ⅰ收載于《化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)(第十一冊)》，由羅布麻葉、野菊花、防己、硫酸雙肼嗪等組成，為中西藥復(fù)方制劑.方中羅布麻葉具有平肝安神、清熱利水之功，對本方發(fā)揮臨床療效有重要作用.原標(biāo)準(zhǔn)中未對羅布麻葉進(jìn)行質(zhì)量控制.現(xiàn)代藥理研究表明，羅布麻葉降血壓、降血脂主要活性成分為黃酮類化合物，其中以金絲桃苷含量最高[1].為有效控制復(fù)方羅布麻片Ⅰ的質(zhì)量，促進(jìn)臨床用藥安全，本試驗(yàn)建立了以反相高效液相色譜法測定復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量的方法.

圖1　金絲桃苷對照品高效液相色譜圖

1　儀器與試藥

1. 1儀器島津LC－2010A高效液相色譜儀; AE－240型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司).

1. 2試藥金絲桃苷對照品(批號: 111521－200303，中國藥品生物制品檢定所);復(fù)方羅布麻片Ⅰ(批號: 120802，山西津華暉星制藥有限公司;批號: 0130201，山西云鵬制藥有限公司;批號: 121202，山西亨瑞達(dá)制藥有限公司);甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純.

2　方法與結(jié)果

2. 1色譜條件色譜柱: Kromasil C18(250×4. 6mm，5μm);流動相:乙腈－0. 2%磷酸(15∶75);柱溫: 30℃;流速: 1. 0ml/min;檢測波長: 256nm.在此色譜條件下，供試品色譜圖中，以金絲桃苷峰計算，理論板數(shù)為10126.

2. 2對照品溶液的制備精密稱取金絲桃苷對照品適量，加甲醇溶解，制成30μg/ml的溶液，作為對照品溶液.

2. 3供試品溶液的制備取復(fù)方羅布麻片Ⅰ適量，研細(xì)，精密稱取約3g，至錐形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得.

2. 4陰性對照溶液的制備按處方比例及制備工藝，配制不含羅布麻葉的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液.

2. 5系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液各10μl，按照上述色譜條件測定，結(jié)果表明陰性對照溶液在對照品溶液的相同保留時間處無雜質(zhì)峰干擾.對照品色譜圖、供試品色譜圖、陰性對照色譜圖見圖1～3.

圖2　樣品高效液相色譜圖

圖3　陰性對照高效液相色譜圖

2. 6線性關(guān)系精密吸取對照品溶液(濃度μg/ml)1、5、10、15、20μl，依法進(jìn)樣，以峰面積積分值為橫坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為: C =4×10－7A－0. 0234，r =0. 999.試驗(yàn)結(jié)果表明，金絲桃苷在3. 56～71. 2μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10μl，分別于0、3、6、9、18h注入液相色譜儀，測得待測成分峰面積積分值的

RSD為2.02%，結(jié)果表明供試品溶液在18h內(nèi)基本穩(wěn)定.

2. 8精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取金絲桃苷對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，計算得峰面積積分值的RSD為1. 82%，表明本法精密度良好.

2. 9重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一樣品(批號: 121202)6份，按樣品測定法測定，結(jié)果每g含金絲桃苷分別為0. 36、0. 35、0. 36、0. 34、0. 36、0. 35mg(RSD = 2. 3%，n = 6)，表明本法重現(xiàn)性良好.

2. 10加樣回收率試驗(yàn)取復(fù)方羅布麻片Ⅰ(批號: 121202，金絲桃苷含量為0. 35mg/g)6份，精密稱定，分別精密加入一定量的金絲桃苷對照品(35. 6μg/ml)，照供試品測定方法進(jìn)樣測定，計算回收率.結(jié)果表明，本方法具有較好的準(zhǔn)確度.見表1.

表1　加樣回收率試驗(yàn)

2. 11樣品的含量測定取復(fù)方羅布麻片Ⅰ按“2. 3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，進(jìn)樣10 μl記錄色譜圖峰面積，以峰面積計算樣品中金絲桃苷的含量.結(jié)果見表2.

表2　樣品含量測定結(jié)果(n =2)

3　討論

本試驗(yàn)比較了用50%甲醇與甲醇加熱回流提取的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)用50%的甲醇加熱回流法提取效率高于甲醇加熱回流提取法.因此，選用50%甲醇作為提取溶媒.

復(fù)方羅布麻片Ⅰ為中西藥復(fù)方制劑.由于其價格便宜，療效可靠，在高血壓病人中得到廣泛應(yīng)用.通過對3批復(fù)方羅布麻片Ⅰ樣品的測定，發(fā)現(xiàn)其中所含金絲桃苷的含量存在較明顯的差異.由此可見，對復(fù)方羅布麻片Ⅰ中羅布麻葉進(jìn)行質(zhì)量控制，很有必要.

參考文獻(xiàn)

[1]許虎，劉訓(xùn)紅，王媚，等．羅布麻葉研究現(xiàn)狀及設(shè)想[J]．現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2012，26(3): 85－87．

收稿日期:( 2014. 12. 30)

作者簡介:楊玲霞，副主任藥師，從事食品藥品檢驗(yàn)工作.E－mail: aluo009@ sina. com

【文章編號】1007－8517(2015)06－0014－02

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號】R284. 1