正交設(shè)計優(yōu)選黃芩梔子合煎工藝

黃　琪，劉　慧，陳建紅,3，吳德玲，顧雪竹，麻印蓮，張　村

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥　230012；2.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，

北京　100700；3.河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南 鄭州　450008)

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正交設(shè)計優(yōu)選黃芩梔子合煎工藝

黃琪1，2，劉慧2，陳建紅2,3，吳德玲1，顧雪竹2，麻印蓮2，張村2

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥230012；2.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，

北京100700；3.河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南 鄭州450008)

[摘要]目的正交設(shè)計優(yōu)選黃芩梔子合煎工藝。方法采用正交試驗法，考察加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)對黃芩、梔子合煎液中梔子苷含量、黃芩苷含量及干膏得率的影響。結(jié)果優(yōu)選出的最佳提取工藝為：加8倍量水，提取3次，每次0.5 h。結(jié)論所優(yōu)選的工藝穩(wěn)定、合理、可行，可為合理開發(fā)含有黃芩、梔子藥對的復(fù)方制劑提供理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]黃芩；梔子；正交試驗；提取工藝

黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi.的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效；梔子為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis.的干燥果實，具有清熱利濕、涼血解毒的功效。黃芩與梔子為臨床常用藥對，常配伍應(yīng)用于許多中藥復(fù)方中。二藥相須，黃芩得梔子之助，清肺中伏火之力倍增，梔子得黃芩之伍，利濕退黃、清肝止血之效更佳，二者降泄同施，氣血并治，不但能清三焦、寧肺火、止血熱、退黃疸，而且能清解肝經(jīng)郁火。黃芩、梔子常配伍使用以增強(qiáng)清熱祛濕的功效。經(jīng)典方劑黃芩清肺湯、黃芩梔子湯[1]、黃芩湯等都含有黃芩、梔子藥對，主治肺熱所致的咳喘、下焦熱結(jié)、小便不通等癥[2]。

現(xiàn)代研究表明，黃芩中主要成分黃酮類成分和梔子中主要成分環(huán)烯醚萜類成分大多具有較好的生理活性[3-4]。為更好地開發(fā)研究含有黃芩、梔子藥對的經(jīng)典方劑，本實驗采用正交試驗法優(yōu)化黃芩、梔子藥對合煎的提取工藝。

1儀器與試藥

1.1儀器島津高效液相色譜儀(LC-20AT泵，SPDM20A PDA檢測器，CTO-10AS柱溫箱)；FA2204B型萬分之一電子天平:上海賽德利斯精密儀器有限公司。

1.2試劑純凈水：杭州娃哈哈集團(tuán)公司；甲醇、乙腈：均為色譜純。黃芩苷對照品：中國食品藥品檢定研究院，批號 110715-201117；梔子苷對照品：中國食品藥品檢定研究院，批號 110749-201115。

1.3藥材黃芩產(chǎn)地為河北，梔子產(chǎn)地為江西。藥材均購于安徽亳州滬譙中藥飲片科技公司，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所張村研究員鑒定黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi.的干燥根，梔子為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis.的干燥果實。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗設(shè)計取黃芩20 g、梔子(粉碎成粗顆粒)10 g。通過預(yù)實驗結(jié)果，分別選定水提的3個因素加水量(A)、煎煮時間(B)、煎煮次數(shù)(C)，以黃芩苷濃度和梔子苷濃度及干膏得率為指標(biāo)，按L9(43)正交試驗表進(jìn)行實驗。見表1。

2.2煎煮液中黃芩苷和梔子苷的含量測定

2.2.1色譜條件①黃芩苷測定的色譜條件：按《中華人民共和國藥典》2010版(一部)黃芩項下要求，選用流動相為0.2%磷酸-水(47∶53)，進(jìn)樣量10 μL，檢測波長為278 nm，柱溫35 ℃，流速1.0 mL/min。②梔子苷測定的色譜條件：按《中華人民共和國藥典》2010版(一部)梔子苷含量測定項下要求，流動相為乙腈∶水(15∶85)，進(jìn)樣量10 μL，檢測波長為238 nm，柱溫35 ℃，流速1.0 mL/min。實驗結(jié)果見圖1、表2。

表1　黃芩、梔子配伍煎煮工藝優(yōu)選因素水平表

2.2.2溶液制備①對照品溶液的制備：分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥至恒質(zhì)量的黃芩苷和梔子苷對照品適量，精密稱定，用甲醇超聲溶解，分別制成含黃芩苷0.239 mg/mL、梔子苷0.030 2 mg/mL的對照品溶液。②供試品溶液的制備：取黃芩20 g、梔子(粉碎成粗顆粒)10 g，置于圓底燒瓶中，按正交試驗表，熱回流提取。紗布過濾提取液，將提取液減壓濃縮至約100 mL，轉(zhuǎn)移置100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。精密量取1 mL置10 mL容量瓶，加水至刻度，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.2.3黃芩苷和梔子苷的含量測定分別吸取黃芩苷對照品溶液、梔子苷對照品溶液及供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測定。高效液相色譜圖譜見圖1。

圖1黃芩苷對照品(280 nm)(A)、黃芩梔子合煎液(280 nm)(B)、梔子苷對照品(238 nm)(C)和黃芩梔子合煎液(238 nm)(D)高效液相色譜圖

2.3合煎液樣品中干膏得率的測定從各試驗樣品中精密移取合煎液5 mL，置干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，再置于105 ℃條件下干燥3 h，轉(zhuǎn)移至干燥器中放涼30 min，精密稱定質(zhì)量。實驗結(jié)果見表2。

2.4結(jié)果分析正交試驗結(jié)果原始數(shù)據(jù)見表2，正交試驗結(jié)果的描述性統(tǒng)計見表3。采用一般線性模型對3個因素的主效應(yīng)進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表4。由方差分析結(jié)果可知，以干膏得率和黃芩苷含量為指標(biāo)時，煎煮次數(shù)的主效應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義，且C>B>A；以梔子苷含量為指標(biāo)時，煎煮次數(shù)的主效應(yīng)也具有統(tǒng)計學(xué)意義，且C>A>B。綜合分析，只有煎煮次數(shù)對煎煮工藝產(chǎn)生顯著性影響，本著經(jīng)濟(jì)合理的原則，選擇最佳煎煮方案為A1B1C3，即加8倍量的水，加熱回流3次，每次0.5 h。

表2　正交試驗結(jié)果

2.5驗證試驗為考察上述優(yōu)選工藝的穩(wěn)定性，按該工藝條件進(jìn)行驗證試驗(n=3)，分別測定梔子苷濃度、黃芩苷濃度和干膏得率。實驗結(jié)果表明，該工藝合理，重現(xiàn)性較好。見表5。

表3　正交試驗結(jié)果的描述性統(tǒng)計

表4　正交試驗結(jié)果的方差分析

表5　驗證試驗結(jié)果

3討論

黃芩和梔子均為清熱燥濕類藥物，兩者常相須為用，以增強(qiáng)其清熱之功。本研究采用正交試驗法優(yōu)選黃芩、梔子藥對合煎工藝，為含有黃芩、梔子藥對復(fù)方藥物的制備工藝提供一定的實驗依據(jù)。梔子苷和黃芩苷的含量測定方法參照2010版《中華人民共和國藥典》[5]，該方法可直接用于測定樣品中兩種成分的含量。另外，經(jīng)驗證試驗表明，該工藝穩(wěn)定性好，提取率較高，所優(yōu)選的黃芩、梔子合煎工藝可為后續(xù)合理開發(fā)黃芩清肺湯等含有黃芩、梔子藥對的復(fù)方制劑提供一定理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]元·羅天益.衛(wèi)生寶鑒[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1987：271.

[2]周述華.常用相須藥對應(yīng)用探討[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1998，21(S1)：53-56.

[3]劉英學(xué)，劉中剛，蘇蘭，等.黃芩化學(xué)成分研究[J].中國藥物化學(xué)雜志，2009，19(1)：59-62.

[4]Yu Y，Xie ZL，Gao H，et al．Bioactive iridoid glucosides from the fruit ofGardeniajasminoides[J]．J Nat Prod，2009，72(8):1459-1464.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：282.

Optimization of Mixed Decoction Technology forScutellariabaicalensisandGardeniajasminoidesby Orthogonal Design

HUANGQi1,2,LIUHui2,CHENJian-hong2,3,WUDe-ling1,GUXue-zhu2,MAYin-lian2,ZHANGCun2

(1.SchoolofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China;2.InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;3.SchoolofPharmacy,HenanCollegeofTraditionalChineseMedicine,HenanZhengzhou450008,China)

[Abstract]ObjectiveTo optimize the mixed decoction technology for Scutellaria baicalensis and Gardenia jasminoides by orthogonal design. MethodsAn orthogonal test was performed to investigate the influences of the amount of water, decocting time, and times of decoction on the content of geniposide and baicalin and the yield of dry extract from the mixed decoction solution of Scutellaria baicalensis and Gardenia jasminoides. ResultsThe optimized extraction process was as follows: adding water (8 times), and extracting 3 times (0.5 h each time). ConclusionThe optimized process is stable, reasonable, and feasible. This study can provide a theoretical basis for the development of compound preparation of Scutellaria baicalensis and Gardenia jasminoides.

[Key words]Scutellaria baicalensis; Gardenia jasminoides; orthogonal test; extraction process

收稿日期：(2014-08-23；編輯：張倩)

通信作者：張村，zhc95@163.com

作者簡介：黃琪(1988-)，男，碩士，助教

[中圖分類號]R284[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.02.026

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目(81173553)