當(dāng)歸芍藥散及其拆方對(duì)肝硬化腹水大鼠電解質(zhì)的影響

姚　瑤，王成業(yè)，岳曉莉，潘永福，王運(yùn)來(lái)，許　釩

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽 合肥　230012)

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當(dāng)歸芍藥散及其拆方對(duì)肝硬化腹水大鼠電解質(zhì)的影響

姚瑤，王成業(yè)，岳曉莉，潘永福，王運(yùn)來(lái)，許釩

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽 合肥230012)

[摘要]目的觀察當(dāng)歸芍藥散及其拆方對(duì)肝硬化腹水大鼠電解質(zhì)紊亂的糾正作用。方法將雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，甘利欣組，當(dāng)歸芍藥散低、中、高劑量組，拆方活血藥組和利水藥組。采用苯巴比妥聯(lián)合四氯化碳腹腔注射復(fù)制肝硬化腹水大鼠模型，用代謝籠收集大鼠24 h尿液，采用冰點(diǎn)法測(cè)定大鼠尿滲透壓，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清及尿K+、Na+、Cl-濃度。結(jié)果與模型組比較，當(dāng)歸芍藥散各劑量組大鼠尿滲透壓顯著降低(P<0.05)，血清K+、Na+、Cl-水平顯著升高(P<0.05)，尿K+、Na+水平顯著降低(P<0.05)；當(dāng)歸芍藥散各劑量組與甘利欣組、活血藥組、利水藥組血清和尿電解質(zhì)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論當(dāng)歸芍藥散可糾正肝硬化腹水大鼠電解質(zhì)紊亂，無(wú)明顯劑量依賴(lài)性，全方和拆方的效應(yīng)無(wú)明顯差異。

[關(guān)鍵詞]肝硬化腹水；電解質(zhì)紊亂；當(dāng)歸芍藥散；活血利水

肝硬化是一種常見(jiàn)的慢性進(jìn)行性疾病，是各種肝臟疾病(肝炎、脂肪肝、肝纖維化)的終末性病變。其具有一定的病理組織形態(tài)特點(diǎn)，且常伴有肝功能不全。腹水是肝硬化進(jìn)入失代償期的重要臨床表現(xiàn)之一，多發(fā)生在肝硬化的中晚期。肝硬化失代償期患者易并發(fā)低鈉、低鉀、低氯血癥[1]，而腹水患者的電解質(zhì)紊亂又可使病情加重，影響預(yù)后。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肝硬化腹水是肝硬化病變的晚期階段，屬“臌脹”范疇[2]?！督饏T要略·水氣病脈證并治》云：“趺陽(yáng)脈伏，水谷不化，脾氣衰則鶩溏，胃氣衰則身腫。少陽(yáng)脈卑，少陰脈細(xì)，男子則小便不利，婦人則經(jīng)水不通，經(jīng)為血，血不利則為水，名曰血分?！碑?dāng)歸芍藥散作為活血利水的代表方劑，最初用于婦科痛證的治療，療效顯著。該方當(dāng)歸、白芍、川芎養(yǎng)血活血，柔肝息風(fēng)；白術(shù)、茯苓、澤瀉通陽(yáng)利水，健脾化濕。六藥合用，活血促進(jìn)利水，利水益于活血。該方經(jīng)歷代醫(yī)家不斷研究與拓展，現(xiàn)開(kāi)始逐漸用于肝硬化腹水、腎病綜合征等疾病的治療。

近年來(lái)，學(xué)者對(duì)當(dāng)歸芍藥散展開(kāi)了深入的探索，但多見(jiàn)于臨床療效的評(píng)價(jià)，而當(dāng)歸芍藥散對(duì)肝硬化腹水的實(shí)驗(yàn)研究卻少見(jiàn)。本課題組在前期的研究中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸芍藥散可以明顯減少肝硬化腹水大鼠24 h尿量和腹腔積液量[3]。為進(jìn)一步研究其作用機(jī)制，本研究采用苯巴比妥聯(lián)合CCl4腹腔注射復(fù)制肝硬化腹水大鼠模型，研究當(dāng)歸芍藥散全方及其拆方組(活血藥組：當(dāng)歸、芍藥、川芎；利水藥組：茯苓、澤瀉、白術(shù))對(duì)肝硬化腹水大鼠尿液滲透壓及電解質(zhì)的影響，以期為臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

1.1藥物及試劑當(dāng)歸、芍藥、川芎、白術(shù)、茯苓、澤瀉，購(gòu)自安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，并經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院金傳山教授鑒定，均符合《中華人民共和國(guó)藥典》(2010年版)項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)。按原方比例(當(dāng)歸3 g，芍藥16 g，川芎、澤瀉各8 g，白術(shù)、茯苓各4 g)稱(chēng)量藥材，加10倍量50%乙醇，浸泡1 h，水浴回流1.5 h，冷卻后收集濾液；再加10倍量50%乙醇水浴回流1.5 h，冷卻后收集濾液。合并兩次濾液，過(guò)濾，水浴濃縮至所需濃度藥液。分別制備生藥濃度為0.43、0.86、1.72 g/mL的當(dāng)歸芍藥散低、中、高劑量全方藥液；濃度為1.08 g/mL的活血藥組藥液；濃度為0.64 g/mL的利水藥組藥液。甘利欣：江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào) 100702。CCl4(分析純)：江蘇強(qiáng)盛化工有限公司，批號(hào) 2008121。福臨門(mén)一級(jí)菜籽油：中糧東海糧油工業(yè)有限公司，批號(hào) 20111010。甲醛(分析純)：上海中試化工總公司，批號(hào) 20100130。苯巴比妥片：上海信宜藥廠(chǎng)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31022038。無(wú)水乙醚(分析純)：上海中試化工總公司，批號(hào) 20101010。

[Key words]lumbar disc herniation; acupuncture therapy;round-sharp needle; muscle contraction;muscle tension; JOA score cirrhotic ascites; electrolyte disturbance; Danggui Shaoyao Powder; blood-activating and diuresis-promoting

1.2儀器MP6001電子天平：上海恒平科學(xué)儀器有限公司；TGL-16B高速臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)；光學(xué)顯微鏡：日本Olympus；移液器：德國(guó)Eppendorf；AF-10型自動(dòng)制冰機(jī)：意大利SCOTSMAN；TGL-20M高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)：長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；島津全自動(dòng)生化分析儀：日本Olympus。

1.3動(dòng)物SD大鼠80只，雄性，SPF級(jí)，體質(zhì)量(220±20)g，由江蘇南京青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2009-0001。

2方法

2.1分組、復(fù)制模型及給藥將80只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，甘利欣組，當(dāng)歸芍藥散低、中、高劑量組，活血藥組，利水藥組，每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，除正常組外，其余組給予35%苯巴比妥作為飲用水誘導(dǎo)1周。第2~3周腹腔注射10% CCl4油溶液，第4~5周給予12% CCl4油溶液，第6~7周給予14% CCl4油溶液，第8~9周給予16% CCl4油溶液，第10~11周給予18% CCl4油溶液，第12~14周給予20% CCl4油溶液，每周2次，給藥劑量為1 mL/kg，首次劑量加倍。治療組自模型復(fù)制同時(shí)分別灌胃給予低劑量(4.3 g/kg)、中劑量(8.6 g/kg)、高劑量(17.2 g/kg)當(dāng)歸芍藥散，活血藥(10.8 g/kg)，利水藥(6.4 g/kg)藥液，給藥容積為10 mL/kg。甘利欣組給予甘利欣藥液，0.052 5 g/kg，每日1次。正常組給予等容積蒸餾水。均連續(xù)給藥13周。末次給藥12 h后，所有大鼠禁食不禁水，于次日麻醉，取材。

2.2尿滲透壓檢測(cè)第13周，將大鼠置代謝籠內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d后，觀察飲水及尿排泄情況。收集尿液，測(cè)量24 h尿量，取適量尿液于4 ℃條件下，3 500 r/min離心10 min，分離上清液，冰點(diǎn)法測(cè)定尿滲透壓。

2.3電解質(zhì)檢測(cè)第13周，將各組大鼠編號(hào)，置代謝籠內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d后，收集24 h尿液。取適量于4 ℃條件下，3 500 r/min離心10 min，分離上清液置于5 mL EP管內(nèi)，全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)尿電解質(zhì)K+、Na+、Cl-濃度。

第14周末，大鼠乙醚麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，加入非抗凝管，室溫放置30 min，3 500 r/min離心10 min，分離血清。全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清電解質(zhì)K+、Na+、Cl-濃度。

3結(jié)果

3.1大鼠一般狀態(tài)正常組大鼠較活潑、被毛光澤、正常飲食飲水，大小便正常，整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期體質(zhì)量穩(wěn)步增長(zhǎng)。模型組大鼠在模型復(fù)制期被毛疏松無(wú)光澤且易脫落，性情暴躁，精神不振，尿量減少，肝、脾、腎等器官腫大。給藥組大鼠皮毛較順，性情較模型組溫和，尿量明顯增多。

3.2各組尿滲透壓比較模型組大鼠尿滲透壓較正常組顯著升高(P<0.05)；各治療組尿滲透壓均較模型組顯著降低(P<0.05)；各治療組之間尿滲透壓相比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　當(dāng)歸芍藥散及其拆方對(duì)肝硬化腹水

注：含有相同右上標(biāo)符號(hào)的組別相比較，P>0.05；不含相同右上標(biāo)符號(hào)的組別相比較，P<0.05。

3.3各組血清和尿電解質(zhì)水平比較模型組血清K+、Na+、Cl-濃度較正常組顯著降低(P<0.05)，尿K+、Na+濃度顯著升高(P<0.05)；各組尿Cl-濃度相比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；當(dāng)歸芍藥散各劑量組均可明顯升高血清K+、Na+、Cl-水平，顯著降低尿K+、Na+水平；當(dāng)歸芍藥散各劑量組血清K+、Na+、Cl-水平和尿K+、Na+水平相比較，以及當(dāng)歸芍藥散各劑量組與活血組、利水組和甘利欣組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果提示當(dāng)歸芍藥散對(duì)肝硬化腹水大鼠血清和尿電解質(zhì)水平的影響無(wú)劑量依賴(lài)性，全方與拆方的效應(yīng)近似。結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

表2　當(dāng)歸芍藥散對(duì)肝硬化腹水大鼠血清電解質(zhì)的影響±s)

注：含有相同右上標(biāo)符號(hào)的組別相比較，P>0.05；不含相同右上標(biāo)符號(hào)的組別相比較，P<0.05。

表3　當(dāng)歸芍藥散對(duì)肝硬化腹水大鼠尿電解質(zhì)的影響±s)

注：含有相同右上標(biāo)符號(hào)的組別相比較，P>0.05；不含相同右上標(biāo)符號(hào)的組別相比較，P<0.05。

4討論

當(dāng)歸芍藥散由當(dāng)歸、芍藥、川芎、茯苓、澤瀉、白術(shù)組成。方中重用芍藥以柔肝血、緩急止痛；佐以川芎疏肝理氣；與當(dāng)歸配合又能行血活血；以茯苓、澤瀉淡滲利濕，白術(shù)健脾燥濕，三藥通過(guò)祛濕而使脾得健運(yùn)。六藥合用則肝血足而氣調(diào)達(dá)，脾運(yùn)健而濕邪除，肝調(diào)和則諸證愈。

肝硬化失代償期患者多伴有不同程度的血鈉、血鉀、血氯降低等電解質(zhì)紊亂現(xiàn)象，尤以肝硬化腹水患者更為常見(jiàn)。肝硬化腹水患者血清電解質(zhì)紊亂與其腹水嚴(yán)重程度相關(guān)，且電解質(zhì)紊亂若不及時(shí)糾正，可加重病情、增加并發(fā)癥的發(fā)生率[4]，特別是失代償期患者常常伴有低鈉血癥，臨床上多用精氨酸加壓素拮抗劑進(jìn)行治療[1]。肝硬化患者在形成腹水之前已出現(xiàn)電解質(zhì)紊亂，出現(xiàn)腹水后，病情加重，常伴有代謝性堿中毒。因此，電解質(zhì)水平可作為評(píng)價(jià)肝硬化腹水患者病情的重要指標(biāo)[5]。在肝硬化腹水發(fā)病過(guò)程中，引起肝硬化患者電解質(zhì)紊亂的根本原因是肝功能異常，高能磷酸鍵減少，鈉泵活性降低，細(xì)胞內(nèi)Na+不能主動(dòng)轉(zhuǎn)向細(xì)胞外，胞外K+不易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞外液Na+含量減少。甘利欣是甘草有效成分的第三代提取物，通過(guò)抗炎、抗纖維化、抗內(nèi)皮素分泌以及解毒作用達(dá)到對(duì)肝臟的保護(hù)作用。前期實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)記載表明，甘利欣對(duì)肝硬化腹水具有一定的改善作用。

本研究通過(guò)定期監(jiān)測(cè)肝硬化腹水大鼠尿K+、Na+、Cl-濃度，考察其是否出現(xiàn)電解質(zhì)紊亂，及藥物干預(yù)后大鼠電解質(zhì)紊亂是否得到糾正。實(shí)驗(yàn)13周，收集24 h尿液，檢測(cè)尿K+、Na+、Cl-，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠尿K+、Na+較正常組顯著升高，而當(dāng)歸芍藥散各劑量組尿K+、Na+濃度均表現(xiàn)明顯下降。通過(guò)檢測(cè)血清K+、Na+、Cl-，發(fā)現(xiàn)模型組電解質(zhì)水平較正常組顯著降低，出現(xiàn)低鈉、低鉀、低氯血癥，其中血清Na+水平降低最為明顯，這與尿電解質(zhì)水平變化趨勢(shì)正好相反。拆方中活血藥組養(yǎng)血活血，利水藥組通陽(yáng)利水，對(duì)血清及尿K+、Na+、Cl-水平都有一定的改善作用，且利水組較活血組稍好。當(dāng)歸芍藥散可能通過(guò)改善肝功能，提高離子泵活性，改善細(xì)胞膜的通透性，減少電解質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，以提高血清K+、Na+、Cl-濃度，達(dá)到糾正肝硬化腹水大鼠電解質(zhì)紊亂的作用。本實(shí)驗(yàn)中，甘利欣雖然對(duì)肝硬化腹水大鼠尿滲透壓有顯著的降低作用，但其升高血清K+、Na+的效應(yīng)與各劑量當(dāng)歸芍藥散及其活血藥拆方、利水藥拆方比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

另外，血漿滲透壓降低及抗利尿激素、醛固酮的激活，可使水潴留超過(guò)鈉潴留，也會(huì)引起稀釋性低鈉血癥。通常肝功能異常易誘發(fā)低鈉血癥，血鈉降低的程度也可反映肝功能的狀況，二者互為因果，進(jìn)而造成惡性循環(huán)，正如中醫(yī)所說(shuō)的“血不利則為水”[6]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)歸芍藥散各劑量組及拆方組對(duì)血清和尿中K+、Na+、Cl-水平都有一定的改善作用，尤以改善Na+水平最為顯著，說(shuō)明當(dāng)歸芍藥散對(duì)肝病引發(fā)的低鈉血癥具有一定的治療作用。

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Effect of Danggui Shaoyao Powder and Its Separated Prescription on Electrolytes in Rats with Cirrhotic Ascites

YAOYao,WANGCheng-ye,YUEXiao-li,PANYong-fu,WANGYun-lai,XUFan

(SchoolofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of Danggui Shaoyao Powder and its separated prescription on the electrolyte disturbance in rats with cirrhotic ascites. MethodsMale Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal group, model group, Ganlixin group, low-, middle-, and high-dose Danggui Shaoyao Powder groups, blood-activating separated prescription group, and diuresis-promoting drug group. A rat model of cirrhotic ascites was established by intraperitoneal injection of phenobarbital combined with carbon tetrachloride. Metabolic cages were used to collect rat urine within 24 hours; urine osmotic pressure was measured by cryoscopy, and the levels of K+, Na+, and Cl-in serum and urine were determined by the automatic biochemical analyzer. ResultsCompared with the model group, all Danggui Shaoyao Powder groups had significantly reduced urine osmotic pressure (P<0.05), significantly increased serum levels of K+, Na+, and Cl-(P<0.05), and significantly reduced urine levels of K+and Na+(P<0.05). There were no significant differences in serum and urine levels of electrolytes between the Danggui Shaoyao Powder group and the Ganlixin group, blood-activating separated prescription group, or diuresis-promoting drug group (P>0.05).ConclusionFor rats with cirrhotic ascites, Danggui Shaoyao Powder can correct electrolyte disturbance with little dose dependence, and its effect shows no significant difference between the whole prescription and the separated prescription.

收稿日期：(2014-09-15；編輯：張倩)

通信作者：許釩，13505514407@163.com

作者簡(jiǎn)介：姚瑤(1989-)，女，碩士研究生

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81173368)

[中圖分類(lèi)號(hào)]R285.5[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.02.018

ficant difference in JOA scores between the two groups (F=2.317,P=0.133). At the end of the first course of treatment, the treatment group had a significantly better clinical outcome than the control group (P=0.037); at the end of the second course of treatment, no significant difference in clinical outcome was observed between the two groups (P=0.259). ConclusionCompared with conventional acupuncture, round-sharp needle therapy has better short-term efficacy and comparable long-term efficacy.