母豬飼糧中添加L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬脂肪酸組成及抗氧化功能的影響

■王 娜 田美麗 張曦文 劉 濤 石寶明 單安山

（東北農(nóng)業(yè)大學動物營養(yǎng)研究所，黑龍江哈爾濱150030）

魚油中富含n-3多不飽和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acid，n-3PUFA)，尤其是二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA[C20∶5n-3])和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA[C22∶6n-3])，對促進幼齡動物的生長發(fā)育和增強免疫功能等具有重要的作用。初乳和常乳中的脂肪酸的組成易受到日糧中脂肪的種類和含量的影響[1-2]，而通過母乳傳遞給仔豬可能是仔豬獲取n-3PUFA的有效途徑[3]。研究發(fā)現(xiàn)，在妊娠后期和哺乳期母豬日糧中添加3.5%魚油能夠促進新生仔豬的生長，并提高仔豬的斷奶平均重[4-5]，通過向日糧中添加富含n-3PUFA的動植物油脂，可以改變豬肉的脂肪酸組成，提高豬肉中n-3多不飽和脂肪酸的含量，生產(chǎn)出有益于人類身體健康的豬肉制品[6]。

L-肉堿作為一種具有生理活性的營養(yǎng)添加劑，母豬飼糧中添加L-肉堿可以提高其繁殖性能[7]，研究最早發(fā)現(xiàn)，肉堿在哺乳動物脂肪代謝中起主導作用[8]。本試驗主要研究在哺乳母豬飼糧中添加L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬生長性能、脂質(zhì)代謝和抗氧化功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

L-肉堿：購自廣州南沙龍沙有限公司，其濃度為（50±2）%。

試驗動物由哈爾濱谷實豬場提供。

1.2 試驗動物與設(shè)計

選取健康狀況、體重相近的經(jīng)產(chǎn)妊娠母豬(3～5胎)48頭，在妊娠的第107 d隨機分為四個處理組：每組12個重復，每個重復一頭母豬。分別是豆油組（3.5%豆油）；豆油肉堿組（3.5%豆油+100 mg/kg L-肉堿）；魚油組（3.5%魚油）；魚油肉堿組（3.5%魚油+100 mg/kg L-肉堿），試驗從母豬妊娠第107 d開始，到仔豬21 d斷奶，試驗期為28 d。妊娠后期和哺乳期基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在哈爾濱谷實豬場進行，分娩床面積為4 m2，內(nèi)設(shè)保溫箱、電熱板、保溫燈加熱。母豬及仔豬自由飲水，母豬產(chǎn)后3 d逐漸恢復食欲并自由采食，仔豬自由采乳，整個試驗在同一棟豬舍內(nèi)進行，按照豬場常規(guī)程序進行飼養(yǎng)管理，試驗基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2012)妊娠后期和哺乳期母豬營養(yǎng)需要進行配制。

1.4 樣品的采集與分析

在母豬分娩當天采集乳樣，分別從前、中、后乳頭均勻采乳樣10 ml左右,迅速于-20℃下保存待分析；仔豬斷奶的第21 d，前腔靜脈用肝素鈉抗凝管采集仔豬血液，-4℃離心，采集血清-80℃保存待測。

1.4.1 生長性能

仔豬產(chǎn)后24 h內(nèi)和斷奶當天，稱量每頭仔豬的重量，記錄出生重和斷奶重，計算平均日增重。

1.4.2 脂肪酸測定

取0.5 ml乳樣或者血清，加入到15 ml帶有聚四氟乙烯冒的螺口管中，加水到1 ml。然后加入2.5 ml甲醇、1.25 ml氯仿，渦旋。室溫放置1 h，每隔10 min渦旋一次。1 h后，加入1.25 ml氯仿、1.15 ml水、0.1 ml 3 mol/l的HCl，室溫下1 200×g離心3 min(注：加入鹽酸的作用是保證管中的酸性環(huán)境)。氯仿層（底層）含有脂肪，用2個巴斯德吸管移去，一個插在另一個中。甲醇-水層加入1.25 ml氯仿萃取，在無水Na2SO4上干燥，過濾，然后轉(zhuǎn)移到4 ml的小瓶中。氮吹去小瓶中的氯仿，加入3滴苯，渦旋。小瓶中加入200 μl NaOH-CH3OH（0.2 mg NaOH溶解到甲醇中）使脂肪甲基化。小瓶室溫靜置25 min，加入1 ml甲醇化的硫酸（2.8 ml 96%的硫酸加入到100 ml甲醇中）。渦旋后，小瓶50℃加熱15 min，-20℃保存3 min。加入1.0 ml水和1.0 ml己烷，渦旋，室溫下1 200×g離心3 min。上層（己烷層）含有甲基脂肪酸酯轉(zhuǎn)移到另一個小瓶用于氣液色譜測定。

色譜條件：島津GC-2010氣相色譜儀；SP-2560色譜柱（100 m×0.25 mm×0.2 m）；載氣為高純氮氣（N2）；燃氣為混合空氣（O2，20.8%）、高純氫氣 (H2)；檢測器為 FID檢測器，進樣口溫度：240℃，分留比為50∶1升溫程序：初始溫度 165℃，維持 30 min，以1.5℃/min速率升至200℃，再以5℃/min升至230℃，維持5 min壓力：266.9 kPa柱流量：1.04 ml/min線速度：20 cm/s。

定性與定量分析：樣品脂肪酸的定性分析采用與標準物質(zhì)保留時間值定性對各脂肪酸組分的百分含量的定量分析采用面積歸一化法，依據(jù)峰面積進行定量。

1.4.3 抗氧化指標的測定

當仔豬飼養(yǎng)至21 d時，每窩隨機選擇一頭健康狀況相近的仔豬，高壓電極擊暈后放血致死，迅速解剖，取同一側(cè)肝臟5 g，置于-20℃冰箱保存，留作后期試驗分析。測定肝臟抗氧化指標T-SOD、MDA、TAOC，具體測定方法均按照試劑盒說明進行，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)先用Microsoft Excel進行整理和初步計算，然后采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件的一般線性模型（GLM）程序?qū)υ囼灁?shù)據(jù)進行兩因素方差分析（Two-Way ANOVA），并用Duncan's法進行多重比較，以各組“平均值±標準誤（SEM）”表示。統(tǒng)計模型包括：脂肪類型效應(yīng)、L-肉堿效應(yīng)及二者的互作效應(yīng)，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬生長性能的影響

多不飽和脂肪酸與L-肉堿對仔豬生長性能的影響見表2。從表2中可以看出，油脂對仔豬的斷奶重和平均日增重的提高有趨勢但不顯著（P＞0.05），然而，L-肉堿可以顯著提高仔豬的斷奶重和平均日增重（P＜0.05），本試驗中L-肉堿與不同脂肪類型對仔豬的生長性能并沒有互作效應(yīng)（P＞0.05）。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

表2 L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬生長性能的影響

2.2 L-肉堿與不同類型脂肪對母豬初乳中脂肪酸組成的影響

母豬飼糧中添加L-肉堿與不同類型脂肪對母豬初乳中脂肪酸組成的影響見表3。從表3中可以看出，飼糧中添加魚油可以顯著降低C18∶2n-6和n-6∶n-3（P＜0.05），顯著增加C20∶5n-3、C22∶6n-3及n-3 PUFA含量（P＜0.05），L-肉堿對脂肪酸的組成并沒有顯著影響，與油脂也沒有互作效應(yīng)（P＞0.05）。

2.3 L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬血清中脂肪酸組成的影響（見表4）

表3 L-肉堿與不同類型脂肪對母豬初乳中脂肪酸組成的影響

表4 L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬血清中脂肪酸組成的影響

表4中可以看出，仔豬血清中脂肪酸組成受到初乳中脂肪酸組成的影響，并且與母豬初乳中脂肪酸組成基本相似，飼糧中添加豆油可以顯著降低n-3 PUFA含量（P＜0.05），然而，n-6 PUFA顯著升高（P＜0.05）。L-肉堿對仔豬血清中脂肪酸的組成并沒有顯著影響與油脂也沒有互作效應(yīng)（P＞0.05）。

2.4 L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬肝臟抗氧化能力的影響

母豬飼糧中添加L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬肝臟抗氧化能力的影響見表5。

表5 L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬肝臟抗氧化功能的影響

L-肉堿可以顯著提高仔豬的T-SOD活性(P＜0.05)，降低MDA含量（P＜0.05），然而，脂肪類型對肝臟的抗氧化功能沒有顯著影響（P＞0.05）。

3 討論

3.1 日糧中添加L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬生長性能的影響

研究證明，在妊娠后期108 d添加魚油對仔豬的平均日增重沒有顯著影響[2]，這與本試驗結(jié)果相一致，母豬妊娠后期添加3.5%的油脂沒有顯著影響仔豬的生長性能，然而，研究報道，在母豬妊娠的第92 d飼喂魚油，試驗組的仔豬斷奶重明顯高于照組的[4]。這可能與添加油脂的時間長短有關(guān)，哺乳母豬飼喂L-肉堿可以提高仔豬的斷奶重[9-10]，這與本試驗的結(jié)果相一致，但是本試驗中并沒有證實L-肉堿與不同脂肪類型對仔豬生長性能的互作效應(yīng)。

3.2 日糧中添加L-肉堿與不同類型脂肪對母豬初乳、仔豬血清中脂肪酸組成的影響

試驗表明，哺乳母豬飼糧中添加油脂可以影響乳中脂肪酸的組成[11-12]，在哺乳母豬日糧中添加魚油顯著提高了乳中DHA和EPA的含量[2]，本試驗中，初乳脂肪酸的組成明顯受到日糧中添加魚油或豆油的影響，特別是對初乳中長鏈脂肪酸的影響更為顯著，魚油組的20∶5n-3、C22∶6n-3及n-3 PUFA含量明顯高于豆油組的含量，反之豆油組18∶2n-6及n-6 PUFA的含量顯著高于魚油組。母豬妊娠期和哺乳期飼糧中添加多不飽和脂肪酸可以通過母乳影響胎兒的脂肪酸組成[13]，也就是說母豬日糧的脂肪酸組成可以通過哺乳間接影響胎兒的脂肪酸組成，本試驗中仔豬血清的脂肪酸組成反應(yīng)了母豬飼糧中脂肪酸組成。很多研究表明，在母豬妊娠后期添加不同油脂影響仔豬組織的脂肪酸組成，在母豬妊娠的第107 d到仔豬斷奶期間日糧中添加鯡魚油，試驗得到的仔豬血清中脂肪酸組成與本試驗的試驗結(jié)果一致[14-15]。L-肉堿可以促進脂肪的氧化，但是在本試驗中并沒有證實哺乳母豬飼糧中添加L-肉堿可以改善仔豬的脂肪酸組成。

3.3 日糧中添加L-肉堿與不同類型脂肪對仔豬肝臟抗氧化功能的影響

多不飽和脂肪酸不穩(wěn)定，易受自由基攻擊發(fā)生脂質(zhì)過氧化，豆油組的仔豬和魚油組仔豬相比抗氧化功能差異不顯著，但是豆油組的超氧化物歧化酶活性活性有比魚油組的高的趨勢（P＞0.1）,推測是新生仔豬對EPA和DHA吸收量大，有造成仔豬的抗氧化壓力大的趨勢。

L-肉堿的添加可以顯著降低仔豬血清中MDA濃度，并且可以顯著提高T-SOD的濃度,研究表明，在L-肉堿在健康女性上添加可以顯著降低MDA的濃度[16]，L-肉堿的添加可以顯著增加抗氧化酶的活性[17]，增加人體的抗氧化功能。

4 結(jié)論

①在母豬妊娠后期飼糧中添加3.5%魚油或L-肉堿有利于提高斷奶仔豬的生長性能。

②在母豬妊娠后期飼糧中添加3.5%魚油提高了母豬乳中DHA、EPA和n-3PUFA的含量，降低了n-6 PUFA的含量。

③在母豬妊娠后期飼糧中添加L-肉堿有利于提高斷奶仔豬的抗氧化功能。