罕見(jiàn)的B(A)亞型基因鑒定分析1例

·病例報(bào)道·

罕見(jiàn)的B(A)亞型基因鑒定分析1例*

**通信作者 E-mail:zengxiaojing@medmail.com.cn

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-10-13網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20151013.1256.032.html

祝麗麗1， 楊芳2， 曾小菁1**

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 輸血科, 貴州 貴陽(yáng)550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 檢驗(yàn)學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng)550004)

[關(guān)鍵詞]B(A)亞型； ABO血型； 序列分析； 基因

[基金項(xiàng)目]*貴州省科技廳

[中圖分類號(hào)]R446.6[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B

ABO亞型是導(dǎo)致血型鑒定正反定型不符、血型誤判及配血不合的主要原因,是正常ABO抗原以外的抗原性較弱的亞型或變異型，如A2、A3、Ax、Ael、B2、B3、和CisAB等，多由糖基轉(zhuǎn)移酶基因的突變或單堿基缺失導(dǎo)致A或B抗原表達(dá)減弱。B(A)亞型是ABO血型系統(tǒng)中比較罕見(jiàn)的ABO亞型[1-2]。筆者工作中遇見(jiàn)經(jīng)血型、血清學(xué)及分子生物學(xué)方法鑒定為B(A)亞型血型病例1例，報(bào)道如下。

1臨床資料

患者，男性，42歲，既往體健，因股骨頸骨折入院。查體：溫度36.5 ℃，血壓90/60 mmHg，無(wú)頸靜脈怒張，雙肺呼吸音清，未聞及干濕啰音，心率100次/min，肝肋下未及，雙下肢無(wú)水腫。心電圖正常，凝血功能正常，擬行股骨頸修復(fù)手術(shù)，進(jìn)行術(shù)前備血檢查，發(fā)現(xiàn)血型正反定型不一致，導(dǎo)致手術(shù)備血困難；隨后利用人源血清和病人紅細(xì)胞及H抗原再次鑒定其血型，提取受檢測(cè)人血中白細(xì)胞DNA，設(shè)計(jì)B(A)01、B(A)02、 B(A)03、 B(A)04、B(A)05亞型、O型和及B型特異性引物，進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳，進(jìn)一步鑒定該患者的基因型。

2結(jié)果

2.1　ABO正反定型

ABO血型鑒定發(fā)現(xiàn)患者血型正反定型不符合，疑似AB型，但僅正定型符合，而反定型B抗原

一二次離心鑒定結(jié)果均為陰性。見(jiàn)表1。

2．2　人源血清和病人紅細(xì)胞再次鑒定

采用抗-A、抗-B人源血清與病人紅細(xì)胞進(jìn)行鑒定，推測(cè)此例標(biāo)本為ABO亞型。見(jiàn)表2。

表1　ABO血型鑒定結(jié)果

表2　人源抗-A、抗-B血清與病人紅細(xì)胞反應(yīng)

2.3　H抗原鑒定

抗-H抗體與病人紅細(xì)胞反應(yīng)呈3+，與O型細(xì)胞反應(yīng)呈3+，B型細(xì)胞反應(yīng)呈1+，參照《ABO亞型對(duì)照表》，高度懷疑為B(A)亞型。

2.4　PCR結(jié)果

PCR結(jié)果顯示，在第5、7及8泳道出現(xiàn)目的條帶，說(shuō)明該患者的基因型為B(A)04/0 ，見(jiàn)圖1。

注：1為mark，2為B(A)01,3為B(A)02,4為B(A)03， 5為B(A)04,6為B(A)05，7為B(A)04,8為O，9為B 圖1　B(A)04基因型PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果 Fig.1　Electrophoresis chart of PCR amplification products of B(A)04 genotype

3討論

B(A)是罕見(jiàn)的AB0亞型，其表現(xiàn)型于1985年被發(fā)現(xiàn)[3]。B(A)是遺傳學(xué)上的B型，其紅細(xì)胞膜上有少量A抗原和基本正常的B抗原。其H抗原含量較為豐富，幾乎與O型細(xì)胞上的含量持平。B(A)血清中含有的抗-A抗體,可以跟A1細(xì)胞、部分A2細(xì)胞發(fā)生凝聚反應(yīng)，導(dǎo)致紅細(xì)胞抗原表型為AB型(A抗原較弱)，且血清中同時(shí)含有抗-A抗體[4]。文獻(xiàn)報(bào)道，B(A)亞型是B基因上的堿基發(fā)生突變,導(dǎo)致B基因產(chǎn)生變異，改變了部分功能活性酶的活性及效力[2]。所以，紅細(xì)胞膜血清學(xué)正定型除了有正常的B抗原以外,還會(huì)發(fā)現(xiàn)有少量A抗原，因而表現(xiàn)為紅細(xì)胞膜上H抗原增多[5]。本病例的血型經(jīng)人源血清和病人紅細(xì)胞和H抗原再次鑒定高度懷疑為B(A)亞型，最后利用PCR方法鑒定該病例血型為B(A)04/O基因型，即為一個(gè)正常的O基因和一個(gè)發(fā)生突變的B基因組成，因此血清學(xué)除表現(xiàn)B特異性，還表現(xiàn)少許A特異性，血清學(xué)表現(xiàn)為AB血型。AB型血的人與O型的人不可能生出AB型子代，但這種罕見(jiàn)的B(A)型與O型人，卻能生出血清表現(xiàn)為AB型的子代，檢測(cè)時(shí)需高度注意，條件允許的情況下，最好開(kāi)展家系調(diào)查。本病例ABO亞型為B(A)04/O,與李慧敏等[6]報(bào)道的B(A)亞型中絕大多數(shù)基因型為B(A)/O血型一致，目前國(guó)內(nèi)還報(bào)道了B(A)/A1型[7]， B/B純合型也有見(jiàn)到報(bào)道[2]。但四川地區(qū)報(bào)道最多的是B(A)02/O等位基因[8]，與此次報(bào)

道的04型有所差別。該類病人輸血時(shí)多采用O型或B型洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行輸血治療。在輸血血清學(xué)實(shí)驗(yàn)中要求嚴(yán)格正反定型，必要時(shí)借助對(duì)亞型分型更準(zhǔn)確的基因分型檢測(cè)法分析紅細(xì)胞亞型，使血清學(xué)亞型實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到基因?qū)W準(zhǔn)確驗(yàn)證，確保結(jié)果真實(shí)可靠。臨床中遇到的疑難血型鑒定時(shí)，在非急診的情況下，可以用更準(zhǔn)確的分子生物學(xué)技術(shù)來(lái)解決輸血治療問(wèn)題。

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(2015-08-25收稿，2015-09-30修回)

編輯： 吳昌學(xué)