細(xì)穗紅三七的生藥學(xué)研究

岐琳??姜海??牛曉峰

[摘要] 目的 對(duì)細(xì)穗紅三七Polygonum suffultum var. pergracile進(jìn)行性狀鑒別、顯微鑒別和總蒽醌含量測(cè)定。 方法 性狀鑒別及顯微鑒別采用形態(tài)學(xué)和組織學(xué)鑒別方法，總蒽醌含量測(cè)定采用分光光度法。 結(jié)果 細(xì)穗紅三七根莖和葉薄壁細(xì)胞中含草酸鈣簇晶；粉末中可見纖維、不定式氣孔、非腺毛和草酸鈣簇晶。細(xì)穗紅三七總蒽醌含量為1.0%～1.5%。 結(jié)論 上述性狀及顯微特征和總蒽醌含量測(cè)定可用于細(xì)穗紅三七藥材的質(zhì)量鑒定。

[關(guān)鍵詞] 細(xì)穗紅三七；生藥學(xué)；總蒽醌；含量測(cè)定

[中圖分類號(hào)] R282.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）17-54-04

Study on the pharmacognosy of Polygonum suffultum var. pergracile

QI Lin JIANG Hai NIU Xiaofeng

School of Pharmacy， Xi'an Jiaotong University， Xi'an 710061，China

[Abstract] Objective To establish a microscope identification method and to determine total anthraquinones content of Polygonum suffultum var. pergracile. Methods Morphological and histological methods be used for microscope identification， Spectrophotometry be used for determination of total anthraquinones content. Results There are clusters crystals instems in rhizome and leaf of Polygonum suffultum var. pergracile； Anomocytic type stomas， fibers， non-glandular hairs and clusters crystals instems are visible in powder. The content of total anthraquinones was 1.0%-1.5%. Conclusion The microscopic character and the determination method of total anthraquinones content can be used for the quality determination of Polygonum suffultum var. pergracile.

[Key words] Polygonum suffultum var. pergracile； Pharmacognosy； Total Anthraquinones； Assaying

細(xì)穗紅三七Polygonum suffultum Maxim. var. pergracile （Hemsl.）G. Sam.為蓼科蓼屬植物，又稱螺絲七、趕山鞭和九節(jié)犁等，主要分布于我國(guó)陜西、四川、云南省[1]。藥用根莖或全草，為止痛、化瘀劑，主治胃痛，傷勞瘀血、紅白痢及脫肛等癥；又為收斂止血藥，主治月經(jīng)不凋、血崩、便血、淋癥及勞傷等[2-4]。目前，細(xì)穗紅三七目前研究報(bào)道很少，細(xì)穗紅三七的生藥學(xué)研究及有效部位總蒽醌的含量測(cè)定未見報(bào)道，為此我們對(duì)細(xì)穗紅三七進(jìn)行了生藥學(xué)研究，為細(xì)穗紅三七藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 試藥

2012年采于西安交通大學(xué)藥學(xué)院藥用植物園及陜西省戶縣，經(jīng)鑒定為細(xì)穗紅三七Polygonum suffultum Maxim. var. pergracile （Hemsl.）G. Sam.的全草。1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)： 110829-9702）。

1.2 方法

1.2.1 藥材顯微鑒別 采取新鮮藥材，利用徒手切片、石蠟切片、表面裝片以及粉末片進(jìn)行藥材顯微組織結(jié)構(gòu)觀察。顯微圖采用44XIV型顯微掃描

儀繪制。

1.2.2 總蒽醌含量測(cè)定 采用日本島津UV-260型紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行含量測(cè)定。

對(duì)照品溶液制備：取1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品約10mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得含1，8-二羥基蒽醌0.2mg/mL的對(duì)照品溶液。

供試品溶液制備：取細(xì)穗紅三七藥材粗粉約0.2g，精密稱定，加氯仿30mL及12.5moL/mL硫酸溶液15mL，沸水浴回流水解2h，收集氯仿層，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒎执无D(zhuǎn)移至10mL量瓶中，最終用甲醇稀釋至刻度，搖勻后精密量取1mL，移至10mL量瓶中，用0.8%醋酸鎂-甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

線性關(guān)系考察：精密吸取濃度為0.216mg/mL的1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8和2.0mL，分別移至25mL量瓶中，水浴蒸干甲醇，用0.8%醋酸鎂甲醇溶液溶解并稀釋至刻度。照紫外-可見分光光度法（中國(guó)藥典2010版一部，附錄ⅤA），以0.8%醋酸鎂甲醇溶液為空白，在516nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值。以1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品的濃度Y為橫坐標(biāo)，被測(cè)溶液吸光度值X為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

精密度實(shí)驗(yàn)：精密量取已配制好的1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液1.0mL，按線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法操作，然后在516nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值，連續(xù)6次。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：將同一批號(hào)已制備好的供試品溶液，立即在0，15，30，60，90和120min的時(shí)間點(diǎn)，在516nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：精密稱取同一批號(hào)藥材粉末約0.2g，分別制備6份供試品溶液，然后在516nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算出6份藥材的總蒽醌含量。

加樣回收率實(shí)驗(yàn)：分別精密稱取已測(cè)定含量的藥材粉末0.1g，精密加入一定濃度的1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液，水浴揮干甲醇，按照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法，共制備藥材供試品溶液6份，以0.8%醋酸鎂甲醇溶液為空白，照紫外-可見分光光度法，在516nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液吸光度值，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品含量，并計(jì)算回收率。

樣品測(cè)定：取西安交通大學(xué)藥學(xué)院藥用植物園及陜西省戶縣所采集的6個(gè)批次細(xì)穗紅三七藥材，按照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法，共制備藥材供試品溶液6份，按線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法操作，然后在516nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度值，計(jì)算藥材總蒽醌含量。

2 結(jié)果

2.1 植物形態(tài)

多年生草本植物，植株高10～35cm。根狀莖粗短，具殘留的老葉柄，生有須根。莖叢生或單生，細(xì)弱，直立，不分枝，無毛或在近節(jié)處被稀疏柔毛。基生葉和下部莖生葉具長(zhǎng)柄，葉片草質(zhì)，卵形或團(tuán)卵形，長(zhǎng)4～10cm，寬3～6cm，先端漸尖，基部心形，表面無毛或被稀疏毛，莖生葉3～5枚，具短葉柄至近于無柄，葉片漸小，托葉鞘膜質(zhì)，褐色，管狀；花序?yàn)橄∈璧乃霠罨ㄐ颍斏鸵干?，長(zhǎng)1～3cm，直徑約1cm，苞片褐色，膜質(zhì)，卵形或卵狀披針形，長(zhǎng)約2mm，光端漸尖，內(nèi)含1朵花，花被白色，或初期帶粉紅色，長(zhǎng)約3mm，5深裂，裂片橢圓狀倒卵形或長(zhǎng)圓形，先端鈍，雄蕊8枚，露出花被外；花柱3枚，線形，露出于花被外，桂頭小，頭狀。果實(shí)橢圓狀三棱形，長(zhǎng)約3mm，兩端尖，黑褐色。花期4～5月，果期5～7月。產(chǎn)于我國(guó)陜西、四川、云南省。

2.2 藥材性狀

根莖呈結(jié)節(jié)狀圓柱形，稍彎曲，長(zhǎng)2～8cm，直徑0.3～1.5cm。表面棕褐色至紫褐色，結(jié)節(jié)處被有葉柄殘基、須根或須根痕，有時(shí)可見細(xì)長(zhǎng)的節(jié)間。質(zhì)硬，易折斷，斷面淺粉紅色至棕紅色，近邊緣處有黃白色維管束小點(diǎn)9～30個(gè)，排列成斷續(xù)環(huán)狀。氣微、味澀。

2.3 顯微特征

2.3.1 根莖橫切面 最外層為木栓層，由4～5列扁長(zhǎng)方形細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞壁較薄且微栓化；皮層由大的薄壁細(xì)胞組成；韌皮部由數(shù)層小型扁平狀薄壁細(xì)胞構(gòu)成，在其外側(cè)存在有少量的單個(gè)纖維或纖維束，纖維壁略增厚；維管束為無限外韌型，形成層由3～4層長(zhǎng)方形狀薄壁細(xì)胞組成；木質(zhì)部可見導(dǎo)管多數(shù)多徑向排列，內(nèi)側(cè)偶見木纖維；根莖的薄壁細(xì)胞中含有草酸鈣簇晶及小型淀粉粒。結(jié)果見圖1。

2.3.2 莖橫切面 最外層為表皮，由2～3列排列緊密的類方形栓化細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞壁稍增厚。皮層由數(shù)列多角形的薄壁細(xì)胞組成，細(xì)胞排列較緊密。維管束為有限外韌型，環(huán)狀排列，約為16束，韌皮部較窄小，其外側(cè)有較多成群分布的韌皮纖維，形成層2～3列，不明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管呈不明顯的徑向排列，其內(nèi)側(cè)偶有木纖維；髓部由大型薄壁細(xì)胞構(gòu)成；莖的薄壁細(xì)胞中偶見草酸鈣簇晶。結(jié)果見圖2。

2.3.3 葉橫切面 葉的上下表皮均由1列橫向延長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞構(gòu)成。葉上表皮下具有1列短柱狀柵欄細(xì)胞，未通過主脈；葉主脈的維管束1～2束，為有限外韌型，木質(zhì)部由數(shù)個(gè)放射狀排列的導(dǎo)管和木薄壁細(xì)胞構(gòu)成；葉薄壁細(xì)胞中可見到草酸鈣簇晶；葉表皮上偶見1～5細(xì)胞構(gòu)成的非腺毛。結(jié)果見圖3。

1.木栓層；2.草酸鈣簇晶；3.皮層；4.韌皮部；

5.形成層；6.纖維；7.木質(zhì)部；8.髓部

圖1 細(xì)穗紅三七根莖橫切面圖（×200）

1.表皮；2.纖維；3.韌皮部；

4.木質(zhì)部；5.髓部

圖2 細(xì)穗紅三七莖橫切面圖（×300）

1.上表皮；2.柵欄組織；3.海綿組織；4.木質(zhì)部；

5.韌皮部；6.草酸鈣簇晶；7.下表皮

圖3 細(xì)穗紅三七葉橫切面圖（×300）

2.3.4 粉末 非腺毛1～5細(xì)胞，直徑6～21?m，長(zhǎng)26～151?m；葉表皮氣孔為不定式，其副衛(wèi)細(xì)胞3～4個(gè)；纖維壁稍增厚，細(xì)胞壁的紋孔及孔溝有時(shí)不明顯，直徑6～22?m，長(zhǎng)42～220?m；導(dǎo)管主為網(wǎng)紋和梯紋導(dǎo)管，少為具緣紋孔，直徑14～32?m；薄壁細(xì)胞中含有草酸鈣簇晶，直徑20～76?m，棱角明顯且較尖（圖4）。

1.非腺毛；2.氣孔；3.網(wǎng)紋導(dǎo)管；4.纖維；5.螺紋導(dǎo)管；

6.具緣紋導(dǎo)管；7.木栓細(xì)胞；8.草酸鈣簇晶

圖4 細(xì)穗紅三七粉末圖（×350）

2.4 總蒽醌含量測(cè)定

2.4.1 方法學(xué)考察 線性關(guān)系考察實(shí)驗(yàn)中，計(jì)算得回歸方程為Y=0.0343X+0.0362，r=0.9998。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照品濃度在1.728～17.280μg/mL范圍內(nèi)，1，8-二羥基蒽醌的對(duì)照品濃度與溶液的吸光度值之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系；精密度實(shí)驗(yàn)的RSD為0.55%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，所使用的儀器精密度良好；穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的RSD為0.92%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，制備的供試品溶液在120min內(nèi)，有著良好的穩(wěn)定性；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的RSD為1.83%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，所建立的含量測(cè)定方法的重復(fù)性良好；加樣回收率實(shí)驗(yàn)中，6份樣品的平均回收率為97.9%，其RSD為2.2%。

2.4.2 樣品測(cè)定 戶縣3批野生的細(xì)穗紅三七藥材總蒽醌含量分別為1.3%、1.5%和1.2%，藥圃栽培的3批細(xì)穗紅三七藥材總蒽醌含量分別為1.2%、1.1%和1.0%。

3 討論

細(xì)穗紅三七藥材顯微鑒別中可見，根莖及葉的薄壁細(xì)胞中含草酸鈣簇晶；粉末中可見到不定式氣孔、細(xì)胞壁稍增厚的纖維、1～5細(xì)胞的非腺毛和草酸鈣簇晶；以上顯微特征可作為細(xì)穗紅三七的鑒別要點(diǎn)。

蒽醌類化合物有多種藥理活性，如抗氧化[5]、抗菌消炎[6]、抗病毒[7-9]、抗癌[10-11]及利膽明目[12-13]等，細(xì)穗紅三七藥材中含有蒽醌類化合物，為了進(jìn)一步控制藥材質(zhì)量，我們參考文獻(xiàn)進(jìn)行了不同采集地點(diǎn)和不同批次藥材中總蒽醌的含量測(cè)定[14-17]。在測(cè)定過程中，對(duì)細(xì)穗紅三七總蒽醌的測(cè)定波長(zhǎng)選擇進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法為吸取1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液、細(xì)穗紅三七藥材供試品溶液適量，分別置于25mL量瓶中，水浴蒸干甲醇，用0.8%醋酸鎂甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，照紫外-可見分光光度法，以0.8%醋酸鎂甲醇溶液為空白，在300～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，分別得到對(duì)照品溶液和藥材樣品溶液的紫外吸收?qǐng)D譜。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照品溶液和藥材樣品溶液在516nm處均具有最大吸收，故實(shí)驗(yàn)中選用516nm為樣品測(cè)定波長(zhǎng)。

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（收稿日期：2015-04-07）