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    熒光定量PCR在病原微生物檢測中的應(yīng)用

    2015-11-16 20:08:42李晶
    現(xiàn)代養(yǎng)生·下半月 2015年8期
    關(guān)鍵詞:病原微生物熒光定量PCR淋球菌

    李晶

    [摘要]目的:探討熒光定量PCR在病原微生物檢測中的應(yīng)用價值。方法:選取南陽市第一人民醫(yī)院收治的800例患者作為研究對象,其中淋球菌(NG)感染206例,沙眼衣原體(CT)感染358例,解脲支原體(UU)感染236例。使用熒光PCR檢測儀進(jìn)行檢測。結(jié)果:研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CT檢測,陽性例數(shù)為38例,陽性率為1 0.61%,NG陽性率為14.08%,陽性率最高,UU陽性檢測率為14.41%,僅次于NG。結(jié)論:采用熒光定量PCR對病原微生物進(jìn)行檢測,可以有效提高檢測的準(zhǔn)確度,值得推廣使用。

    [關(guān)鍵詞]熒光定量PCR;病原微生物;淋球菌;解脲支原體

    熒光定量PCR,是一種新的定量測驗(yàn)技術(shù),這種檢測技術(shù)有效保留了常規(guī)PCR的優(yōu)勢,具有較高的特異性和靈敏性,而且還可以有效降低檢測的假陽性率。對此,本院對熒光定量PCR在病原微生物檢測中的應(yīng)用價值進(jìn)行了研究,具體研究情況如下:

    1資料與方法

    1.1一般資料

    選取南陽市第一人民醫(yī)院門診科、泌尿科以及皮膚科收治的患者800例作為研究對象,其中男性390例,女性410例,其中淋球菌(NG)感染206例,解脲支原體(UU)感染236例,沙眼衣原體(CT)感染358例。取這些患者的宮頸、尿道分泌物進(jìn)行檢測。

    1.2檢測儀器及工具

    在本研究中,使用的檢測儀器為美國生產(chǎn)的型號為BIO-RAD iCylcer的熒光PCR檢測儀,檢測中所使用的試劑盒為核酸擴(kuò)增熒光檢測試劑盒。

    1.3檢測原理

    在進(jìn)行檢測時,在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上,添加了熒光雙標(biāo)記探針的使用,在該探針上會標(biāo)記2個熒光基團(tuán)。將其中的一個熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的5'端,同時將另一個熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的3'端。通過這兩個標(biāo)記可以構(gòu)成一個完整的能量傳遞結(jié)構(gòu)。也就是說5'端熒光基團(tuán)所發(fā)出的熒光,能夠被另外一端的熒光基團(tuán)所吸收或抑制。在檢測中,無特異性PCR發(fā)生時,探針的熒光信號不會發(fā)生任何的變化。但是如果有特異性PCR擴(kuò)增發(fā)生時,探針會在PCR檢測過程中,Taq酶的5'到3'外切酶活性作用會將5探針信號切斷,從而導(dǎo)致切下的3'端熒光基團(tuán)抑制作用會消失,而切下的5'端熒光基團(tuán)信號會增長。探針的3'端羥基已被去除或封閉,不具有延伸能力。熒光信號會隨著PCR產(chǎn)物的增長而不斷增長。

    1.4檢測方法

    首先使凍存的細(xì)胞完全溶解,加入樣品處理液,以13000r/min將標(biāo)本進(jìn)行離心,10分鐘后使用RNA去除掉上清液,完成上述操作后,采用常規(guī)堿裂解法將CT、NG、UU-DNA提取出來。提取完成后,就可以對其進(jìn)行熒光PCR檢測了。首先將各反應(yīng)管放入熒光PCR檢測儀上,在不同條件下對其進(jìn)行擴(kuò)增,共進(jìn)行42次該循環(huán)。等到所有反應(yīng)都結(jié)束后,使用電腦對所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,并計算出結(jié)果。每次檢驗(yàn)完成后均需要做陽性和陰性對照。

    2結(jié)果

    檢測完成后,嚴(yán)格按照試劑盒上的說明,對熒光定量PCR檢測的結(jié)果進(jìn)行分析,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CT檢測,陽性例數(shù)為38例,陽性率為10.61%,NG陽性率為14.08%,陽性率最高,UU陽性檢測率為14.41%,見表1。

    3討論

    病原微生物種類眾多,會對人的機(jī)體造成巨大影響,其中,淋球菌(NG)、解脲支原體(UU)、沙眼衣原體(CT)都是非常常見的病原微生物,患者一旦感染上這些病原微生物,會對患者的健康造成很大影響,因此,提高對病原微生物診斷的準(zhǔn)確性具有非常重要的臨床意義,可以為臨床的診斷和治療提供重要的參考作用。傳統(tǒng)對病原微生物的檢測主要是通過細(xì)菌培養(yǎng)、細(xì)菌涂片等方式進(jìn)行檢測,但是這些檢測方法的檢測率普遍較低,且所需周期較長,會影響患者的及時治療。

    PCR檢測技術(shù)的應(yīng)用在一定程度上提高了檢測的準(zhǔn)確率,早期的PCR檢測技術(shù)雖然彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測方式的不足,但是還是存在假陽性較高等問題,無法有效發(fā)揮對臨床治療的指導(dǎo)作用。隨著PCR檢測技術(shù)的不斷發(fā)展完善,熒光定量PCR的檢測能力更強(qiáng),靈敏性和特異性都較好,能夠正確指導(dǎo)臨床做出診斷,是臨床治療的重要參考,因此,應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)其在臨床診治中的應(yīng)用。

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