實(shí)時(shí)熒光定量PCR在手足口病原體檢測中的應(yīng)用探討

錢福文

【摘 要】 目的：對(duì)手足口病患兒施行病原體檢測時(shí)運(yùn)用熒光定量PCR實(shí)時(shí)測定法（FQ-PCR法）的效果及有關(guān)情況探析。方法：以2016年5月-7月因疑似感染手足口病進(jìn)入本院施行病原體測定的患兒127例為評(píng)估對(duì)象，依據(jù)年齡段情況將其劃分成A組（年齡不超3歲者）77例、B組（年齡間于3-6歲間者）50例，運(yùn)用FQ-PCR法對(duì)疑似患兒的皰疹液、咽拭子實(shí)施相應(yīng)指標(biāo)值的測定；并以ELISA 法對(duì)患兒血清展開檢測，經(jīng)比對(duì)兩法的檢出率數(shù)據(jù)情況，系統(tǒng)評(píng)估FQ-PCR醫(yī)療檢測效果。結(jié)果：127例患兒咽拭子樣本、皰疹液樣本在FQ-PCR法測定下，EV檢測有101例顯陽性，占79.53%；當(dāng)中A組有67例，占87.01%，B組有34例，占68.00%。A組患兒陽性檢出率超出B組，差異明顯（P<0.05）。咽拭子樣本檢出陽性率是69.60%，皰疹液樣本檢出陽性率是81.97%。FQ-PCR法檢出EV71陽性病例超出ELISA法，差異顯著（P<0.05），檢出COXA16陽性病例和ELISA法較接近，沒有較大差異（P>0.05）。結(jié)論：FQ-PCR 法踐行于HFMD病原體測定及評(píng)估中，能強(qiáng)化病原學(xué)指標(biāo)監(jiān)控力度，以輔助當(dāng)?shù)豀FMD疫情預(yù)測、防范工作的有效進(jìn)行。

【關(guān)鍵詞】 熒光定量PCR 手足口病 實(shí)時(shí)檢測 病原體

臨床中將手足口病的英文名稱簡寫成“HFMD” [1]。此病發(fā)作主因是腸道內(nèi)受到EV病毒侵入，以誘發(fā)急性的傳播疾病，HFMD患病群體以不超6歲的幼兒居多[2]。為探索測定病原體的最優(yōu)方法，本文抽選2016年5月-7月因疑似感染手足口病進(jìn)入本院施行病原體測定的患兒127例，依據(jù)年齡段情況將其劃分成A組（年齡不超3歲者）77例、B組（年齡間于3-6歲間者）50例，運(yùn)用FQ-PCR法、ELISA法對(duì)上述患兒的皰疹液、咽拭子實(shí)施相應(yīng)指標(biāo)值的測定，經(jīng)比對(duì)兩法的檢出率數(shù)據(jù)情況，系統(tǒng)評(píng)估FQ-PCR醫(yī)療檢測效果，現(xiàn)將本調(diào)研內(nèi)容作以下陳述：

1 對(duì)象及方法

1.1 研究對(duì)象

以2016年5月-7月因疑似感染手足口病進(jìn)入本院施行病原體測定的患兒127例為評(píng)估對(duì)象，患兒入院初期都帶有HFMD疑似體征，包括手、足、口等處皮膚起皰疹或黏膜組織出現(xiàn)斑疹，體溫異常升高等，醫(yī)師將全部入選患兒初診患有HFMD。依據(jù)年齡段情況將其劃分成A組（年齡不超3歲者）77例、B組（年齡間于3-6歲間者）50例，A組：42例男性、35例女性，年齡間于6個(gè)月-3歲間，平均（2.1±0.37）歲；B組：28例男性、22例女性，年齡間于3.1歲-6歲間，平均（4.2±0.25）歲。上述疑似病例總共搜集到125份咽拭子樣本、61份皰疹液樣本。

1.2 方法

1.2.1 設(shè)備及試劑

FQ-PCR法以杭州博日LineK型熒光定量實(shí)時(shí)PCR檢測設(shè)備展開皰疹液、咽拭子樣本測定操作，按病毒類型（EV腸道病毒、71腸道病毒、柯薩奇A16腸道病毒等）選用適宜的試劑盒，所用試劑盒都產(chǎn)自廣州達(dá)安基因公司；ELISA（酶聯(lián)免疫性吸附實(shí)驗(yàn)）法測定血清樣本中的COXA16 IgG、EV71 IgG，試劑盒選用艾康公司所制產(chǎn)品。

1.2.2 檢測操作

搜集入選患兒的咽拭子樣本、皰疹液樣本，總共搜集到125份咽拭子樣本、61份皰疹液樣本，借助消毒棉拭子取樣本，將其迅速放置到病毒保養(yǎng)溶液當(dāng)中，經(jīng)冷凍存儲(chǔ)并留作待檢，冷凍存儲(chǔ)溫度約-20℃，如果放置超出1個(gè)月，冷凍存儲(chǔ)溫度約-70℃。

取出100μL樣本，滴入清液，分離出樣本RNA，將其放于PCR擴(kuò)增設(shè)備之上，依照指南說明書內(nèi)的有關(guān)內(nèi)容展開標(biāo)準(zhǔn)化操作，設(shè)定正確循環(huán)參數(shù)、反應(yīng)液配合指數(shù)、梯度模板和陽性、陰性比照值。ELISA法測定COXA16 IgG、EV71 IgG時(shí)，依照相應(yīng)試劑盒的科學(xué)化標(biāo)準(zhǔn)展開具體操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用SPSS21.0版統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本次所有相關(guān)的調(diào)查數(shù)據(jù)予以整合處理，當(dāng)中，（x±s）表示計(jì)量數(shù)據(jù)，（n/%）表示計(jì)數(shù)資料；運(yùn)用x2檢驗(yàn)組間計(jì)數(shù)資料的對(duì)比，計(jì)量資料比較通過t檢驗(yàn)，組間數(shù)據(jù)對(duì)比差異顯著時(shí)表示為P<0.05。

2 結(jié)果

經(jīng)測定后評(píng)估知，127例疑似患有HFMD的患兒，其咽拭子樣本、皰疹液樣本在FQ-PCR法測定下，EV檢測有101例顯陽性，占79.53%；當(dāng)中A組有67例，占87.01%（67/77），B組有34例，占68.00%（34/50）。比對(duì)評(píng)估發(fā)現(xiàn)，A組患兒陽性檢出率超出B組，差異明顯（P<0.05）。咽拭子樣本檢出陽性率是69.60%（87/125），皰疹液樣本檢出陽性率是81.97%（50/61）。127例患兒經(jīng)FQ-PCR法、ELISA法測定EV71、COXA16的陽性數(shù)據(jù)如表1所示，從表看出，F(xiàn)Q-PCR法檢出EV71陽性病例超出ELISA法，差異顯著（P<0.05），而檢出COXA16陽性病例和ELISA法較接近，沒有較大差異（P>0.05）。

3 討論

從傳統(tǒng)診療方法入手對(duì)HFMD病原體展開實(shí)時(shí)測定時(shí)，其依然以病癥表現(xiàn)作為主要根據(jù)[3]。待入院經(jīng)試驗(yàn)分析后再判別病毒的具體種類，這一階段需耗費(fèi)較長的時(shí)間（約7天），將會(huì)給診療工作帶來比較大的影響[4]。本次研究將FQ-PCR法列為評(píng)估對(duì)象，并和ELISA 法實(shí)時(shí)測定結(jié)果展開比對(duì)。有關(guān)實(shí)驗(yàn)材料指證，ELISA 法醫(yī)療運(yùn)用范圍有限，難以達(dá)到PCR試驗(yàn)的配合要求[5]。FQ-PCR 法除常規(guī)性檢測操作外，還能實(shí)時(shí)反饋腸道內(nèi)諸多類型的病毒，且和病毒學(xué)培育所得結(jié)果接近[6]。

本研討活動(dòng)數(shù)據(jù)結(jié)果指出，127例患兒樣本在FQ-PCR法測定下，咽拭子樣本檢出陽性率是69.60%（87/125），皰疹液樣本檢出陽性率是81.97%（50/61）；EV檢測有101例顯陽性，占79.53%；當(dāng)中A組有67例，占87.01%（67/77），B組有34例，占68.00%（34/50）。A組患兒陽性檢出率超出B組，差異明顯（P<0.05）。同時(shí)，F(xiàn)Q-PCR法檢出EV71陽性病例超出ELISA法，差異顯著（P<0.05），檢出COXA16陽性病例和ELISA法較接近，沒有較大差異（P>0.05）。

綜合以上所述，將FQ-PCR 法踐行于HFMD病原體實(shí)時(shí)測定當(dāng)中，能強(qiáng)化病原學(xué)指標(biāo)的監(jiān)控力度，有助提升當(dāng)?shù)豀FMD疫情預(yù)測工作的有序開展。

參考文獻(xiàn)

[1]唐智超，石瑋，朱紅霞，等.2012年順義區(qū)手足口病聚集性疫情病例及重癥病例病原學(xué)結(jié)果分析[J].海南醫(yī)學(xué)，2014，（20）：3097-3100.

[2]許玉玲，衛(wèi)海燕，陳豪敏，等.手足口病例中?？瞬《?1型河南株分子流行病學(xué)研究[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2013，（9）：688-691.

[3]李傳生，應(yīng)杰.不同病原體感染手足口病患兒炎性因子變化與病情轉(zhuǎn)歸臨床分析[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，（12）：890-892.