MicroFast?金葡腸毒素快速檢測卡讓5種腸毒素?zé)o處匿身

申海鵬

本著“良心事業(yè)，潤澤民生”的宗旨和“以技術(shù)為引領(lǐng)，以人才為依托，專注食品安全，打造健康生活”的理念，北京良潤生物科技有限公司（以下簡稱“良潤生物”）一直致力于提升微生物快速檢測技術(shù)，研發(fā)多種優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。近日，良潤生物推出了檢測金黃色葡萄球菌腸毒素（簡稱“金葡腸毒素”）的新品——MicroFast?金葡腸毒素快速檢測卡，—款能夠檢測出5種腸毒素SEA/SEB/SEC/SED/SEE的國際領(lǐng)先產(chǎn)品，新產(chǎn)品的檢測原理是怎樣的？與傳統(tǒng)方法相比有哪些優(yōu)勢？帶著眾多疑問，本刊記者采訪了北京良潤生物科技有限公司總經(jīng)理劉磊先生。

記者：金葡腸毒素引起的食物中毒是一個世界性難題，能否介紹下該毒素的危害有哪些？主要存在于哪些食品中？

劉磊：金葡腸毒素是金黃色葡萄球菌分泌的一種具有超抗原活性的細菌毒素，易溶于水和鹽溶液，對熱很穩(wěn)定，在100℃條件下煮沸30min仍具有致病性，而且能夠抵抗胃腸液中蛋白酶的水解作用。依據(jù)腸毒素抗原性和等電點的不同，至今為止已發(fā)現(xiàn)金葡菌可產(chǎn)生A、B、C、D、E、F等多種腸毒素，其中以A型毒力最強，也最為常見約占75%，攝入1μg即能引起中毒。食物在受到金黃色葡萄球菌污染，并且菌落總數(shù)在達到一定數(shù)量之后，在20～30℃條件下經(jīng)2～4小時的繁殖就有可能產(chǎn)生金葡腸毒素，進食帶有此毒素的食物1～5小時后，會出現(xiàn)急性胃腸炎的癥狀，其表現(xiàn)為惡心、嘔吐和腹瀉等，對于小孩、孕婦等體質(zhì)相對比較弱的人群癥狀比較明顯。雖然金黃色葡萄球菌在100℃下加熱30min會被殺死，但金葡腸毒素卻不會，它非常穩(wěn)定，有時可能金黃色葡萄球菌沒有了但其腸毒素依然存在。金黃色葡萄球菌腸毒素的產(chǎn)生需要滿足兩個條件，首先只有高蛋白食物才會容易產(chǎn)生；其次，金黃色葡萄球菌達到一定的數(shù)量一般為103以上才可能產(chǎn)生毒素。所以像奶及奶制品、肉及肉制品中都容易產(chǎn)生金黃色葡萄球菌腸毒素。

記者：傳統(tǒng)檢測金葡腸毒素的方法有哪些？

劉磊：在食品衛(wèi)生檢驗工作中，有多種檢測金葡腸毒素的方法，最經(jīng)典是動物學(xué)試驗，一般是對幼貓或幼猴腹腔注射或喂食肉湯培養(yǎng)物或嘔吐物，然后觀察其可能出現(xiàn)的異常生理和形態(tài)變化，一般在4h內(nèi)發(fā)生嘔吐、腹瀉和體溫升高或死亡等現(xiàn)象，就表示有金葡腸毒素存在。該方法使用較早但容易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，因此受到極大限制。免疫法也是較為常見的手段，如國外的酶聯(lián)免疫試劑盒、96孔板等，但是這些方法的樣品前處理過程比較繁瑣，消耗時間長，整個檢測過程就需要1.5小時以上的時間才能完成，極大地影響了時效性。

記者：據(jù)了解，貴公司最近針對金葡萄腸毒素的檢測研發(fā)出了一種快檢產(chǎn)品——Microfast?金葡腸毒素快速檢測卡，該檢測卡的原理是什么？與傳統(tǒng)方法相比有哪些優(yōu)勢？

劉磊：Microfast?金葡腸毒素快速檢測卡應(yīng)用“雙抗體夾心法”的原理，納米金顆粒作為標記指示物，將一種抗體固定到NC膜上T線處，另外一種抗體標記了納米金顆粒。樣品中若有金葡腸毒素，就會與納米金顆粒標記的特異性單克隆抗體結(jié)合，并且同預(yù)包被于NC膜T線上的抗體結(jié)合，如此一來，就會形成一個“三明治”結(jié)構(gòu)的結(jié)合，檢測卡顯示明顯的紅線，證明其結(jié)果為陽性；樣品中若沒有金葡腸毒素，金顆粒則不會聚集，檢測卡也不會出現(xiàn)紅線。通過肉眼直接觀察T線處是否變紅，便可判斷樣品中是否含有金黃色葡萄球菌，其檢測靈敏度低至1ppb。

酶聯(lián)免疫試劑盒與此原理相同，只是將膠體金換成酶，酶可以催化“三明治”結(jié)構(gòu)的底物顯色。而酶聯(lián)免疫法要經(jīng)過加樣品、洗脫、加酶、再次洗脫、顯色等程序，因此操作步驟更多。相比而言，快速檢測卡操作簡單，耗時短，基本上是一步操作即可，所有的實驗在保證結(jié)果的情況下，步驟越少，效率越高。

國標規(guī)定某些食品中的致病菌不得檢出或限量檢出，但此限量值非常低。以沙門氏菌為例，假設(shè)其在某類食品中限量值為0.04cfu/g，但檢測方法靈敏度一般是103～104cfu/g，也就是說，當菌落數(shù)達到103～104cfu/g該檢測方法才能夠檢出，并得到比較穩(wěn)定的結(jié)果。限量值與檢測方法產(chǎn)生了矛盾，二者有100萬的差距，此時就要對目標菌通過增菌的方法來彌補靈敏度的不足，讓如此少的菌數(shù)擴增變多之后，再進行檢測，這種方法可以間接地判斷細菌危害。相較細菌檢測而言，檢測細菌毒素則更為快速直接，毒素是細菌危害中較為嚴重的一種，很多群體性的食品安全事件都由細菌毒素所引起。如某地方發(fā)生食物中毒，檢測部門可以帶著某毒素快速檢測卡到達現(xiàn)場，通過采集嘔吐物后使用檢測卡檢測的方式來判斷中毒事件是否由這類細菌所引起。而Microfast?金葡腸毒素快速檢測卡適用于產(chǎn)品原材料部門、產(chǎn)品監(jiān)控部門、疾控部門等。

總體而言，Microfast?金葡腸毒素快速檢測卡的優(yōu)勢有6點，一是時間短，使用方便快速，便于基層使用和現(xiàn)場使用，所有反應(yīng)能在15分鐘內(nèi)完成；二是成本相對比較低，不需要特殊的儀器設(shè)備；三是該方法應(yīng)用范圍廣，可適應(yīng)多種檢測條件；四是該方法準確，假陽性率低；五是該方法標記物穩(wěn)定，標記樣品在4℃貯存1年以上，無信號衰減現(xiàn)象；六是該方法膠體金本身為紅色，不需要加入發(fā)色試劑，省卻了酶標的致癌性底物及終止液的步驟，對人體無毒害。

記者：MicroFast?金葡腸毒素快速檢測卡的準確性是如何保證的？

劉磊：首先，是對標準物質(zhì)進行檢測，我們有非常多的金黃色葡萄球菌菌珠，并對它們進行產(chǎn)毒培養(yǎng)，然后進行相應(yīng)的鑒定，從菌種里篩選出可以產(chǎn)生腸毒素的菌株，再通過我們的檢測卡測試，也檢測出了產(chǎn)生腸毒素的菌株，與鑒定結(jié)果是一致的。其次，我們跟國外同類作用的檢測盒進行了對比，以保證準確性。另外，我們也和國乳中心進行積極的溝通，讓他們對我們的產(chǎn)品進行更系統(tǒng)詳細地評定。

記者：近期成立的中國食源性微生物檢測技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟中，貴公司成為第一屆理事會成員單位，您能否介紹下該聯(lián)盟成立的目的是什么嗎？

劉磊：該戰(zhàn)略聯(lián)盟由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所研究員楊瑞馥教授擔(dān)任理事長，國家食品安全風(fēng)險評估中心研究員劉秀梅教授擔(dān)任名譽理事長，連同檢測行業(yè)資深專家創(chuàng)辦的一個相對松散的學(xué)術(shù)性質(zhì)組織，其宗旨是推動國內(nèi)對微生物和檢測的重視。聯(lián)盟會對相關(guān)企業(yè)或用戶做一些微生物檢測方面的培訓(xùn)，給他們解釋一些在微生物檢測中較常見的關(guān)鍵問題。另外，國內(nèi)微生物檢測尤其是快檢領(lǐng)域目前實力依然較為薄弱，該組織定期有成員之間的交流活動，并且很多資深專家也會對聯(lián)盟之內(nèi)的企業(yè)進行技術(shù)性的指導(dǎo)，促進國內(nèi)企業(yè)快檢領(lǐng)域的發(fā)展。

記者：目前貴公司有哪些用于微生物檢測的產(chǎn)品？可以檢測哪些項目？

劉磊：良潤生物專注于食品中微生物快速檢測的研究，目前有4個產(chǎn)品系列，第一個是致病菌快速增菌培養(yǎng)基，目的是讓致病菌快速生長，縮短增菌時間，可大大縮短整個檢測過程的時間。以沙門氏菌為例，目前我們在24小時內(nèi)就可以得到陰性/陽性結(jié)果，比其他方法至少要縮短一天。第二是致病菌快速檢測卡，就是用免疫的方法來檢測致病菌。第三是微生物測試片，細菌在生長代謝的過程中，有一些酶參與，這些酶有可能是共性的也有可能是特異性的，對于共性酶，則檢測含有這些酶的菌落總數(shù)，對于特異性酶，只有一類細菌含有此酶，通過檢測該酶的存在即可判斷是否有該類細菌。第四個產(chǎn)品系列是細菌毒素系列，金葡腸毒素產(chǎn)品是該系列的第一個產(chǎn)品。良潤生物產(chǎn)品系列為數(shù)不多，但我們專注于把每個產(chǎn)品做精做細，并通過持續(xù)地不斷地改進，使每一個產(chǎn)品都有其獨特的價值。