對(duì)葉百部中非生物堿化學(xué)成分的研究

張麗勤

[摘要] 目的 研究對(duì)葉百部中非生物堿的化學(xué)成分，并明確其結(jié)構(gòu)。 方法 采用滲漉、提取等操作，提取對(duì)葉百部中的非生物堿，經(jīng)核磁和薄層色譜對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。 結(jié)果 從對(duì)葉百部中提取出3個(gè)化合物，結(jié)構(gòu)確證為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。 結(jié)論 對(duì)葉百部中非生物堿的化學(xué)成分主要為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。

[關(guān)鍵詞] 對(duì)葉百部；非生物堿；化學(xué)成分

[中圖分類(lèi)號(hào)] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2015）08（c）-0091-04

[Abstract] Objective To study the chemical components of non-alkaloids in Stemonaceae Stemona tuberosa and clarify their structures. Methods By operations of percolation and extraction，non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa were extracted and their structures were confirmed by nuclear magnetism and thin-layer chromatography. Results There were 3 chemical compounds extracted from Stemonaceae Stemona tuberosa and their structures were confirmed as β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol. Conclusion The chemical components of non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa mainly include β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol.

[Key words] Stemonaceae Stemona tuberosa；Non-alkaloid；Chemical component

百部為常用中藥，又名百部貨、婆婦草、百條根、百部草、鬧虱藥等，性味甘、苦，微溫，歸肺經(jīng)，具有潤(rùn)肺止咳、殺蟲(chóng)滅虱的功效[1]，臨床應(yīng)用比較廣泛，具有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。百部的主要化學(xué)成分和主要活性成分是生物堿，其殺蟲(chóng)和止咳效果也是生物堿藥理活性的集中體現(xiàn)[2]。國(guó)內(nèi)外對(duì)于百部類(lèi)生物堿的化學(xué)成分研究較多，但是對(duì)非生物堿類(lèi)成分尚無(wú)系統(tǒng)的研究[3-4]。百部的藥理作用研究也較多，但大都限于百部不同濃度水提物和醇提物制劑[5]?；瘜W(xué)成分的系統(tǒng)研究對(duì)于百部藥理作用機(jī)制的闡明是必需的，同時(shí)也是發(fā)現(xiàn)有生物活性的新化合物的基礎(chǔ)和前提。本研究中就對(duì)葉百部中非生化堿的化學(xué)成分進(jìn)行研究。

1材料與方法

1.1 材料

核磁共振光譜儀為Bruker DRX-300/600型核磁共振儀測(cè)定型（TMS為內(nèi)標(biāo)）；恒溫水浴鍋為國(guó)華電器有限公司生產(chǎn)。

薄層硅膠GF254、薄層硅膠H、100～200目及200～300目柱硅膠均購(gòu)自青島海洋化工廠；常規(guī)用試劑均為AR級(jí)，水為重蒸水；10%硫酸乙醇溶液、溴甲酚綠乙醇溶液等顯色劑均按《中草藥有效成分提取分離》參考書(shū)中方法配制[6]。

百部藥材購(gòu)自河北安國(guó)（大百部）Stemona Tuberosa Lour.。

1.2 方法

1.2.1 藥材的提取與分離 對(duì)葉百部藥材52 kg經(jīng)95%乙醇滲漉提取，滲漉液經(jīng)濃縮后，加入5%稀鹽酸，將pH調(diào)解至1～2，過(guò)濾，濾液用濃氨水堿化至pH=10，用氯仿萃取至濾液無(wú)碘化鉍鉀反應(yīng)，回收氯仿，得總生物堿部分。將氯仿萃取后堿液（約50 L）用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋干，用pH試紙檢測(cè)，基本為中性。稠膏用水稀釋后，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取物420 g，正丁醇萃取物600 g。將乙酸乙酯萃取物420 g進(jìn)行硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫。薄層色譜檢測(cè)，合并相同流分，共分成11組分（Ⅰ～Ⅺ）。組分Ⅰ經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（100∶1）梯度洗脫，其中從石油醚-醋酸乙酯流份中得到化合物1。組分Ⅲ經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-乙酸乙酯（100∶1）梯度洗脫，其中從二氯甲烷-乙酸乙酯流份中得到化合物3。另外組分Ⅲ的二氯甲烷-乙酸乙酯（50∶1和25∶1）流份合并后再經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（50∶1）梯度洗脫，從二氯甲烷-甲醇流份中得到化合物2。提取分離流程見(jiàn)圖1。

1.2.2 成分的提取 為進(jìn)一步明確對(duì)葉百部的化學(xué)成分和今后探討對(duì)葉百部治療疾病的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及更好地控制該藥的質(zhì)量，本研究開(kāi)展對(duì)葉百部的生物堿化學(xué)成分研究的同時(shí)開(kāi)展了非生物堿部分的化學(xué)成分研究。通過(guò)硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和重結(jié)晶等方法從中分離。

2 結(jié)果

2.1 成分提取的結(jié)果

通過(guò)硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和重結(jié)晶等方法從中分離得到了3個(gè)化合物，根據(jù)其波譜數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)，確定這3個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)分別鑒定為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇（表1）。

2.2 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物1 白色粉末，易溶于二氯甲烷、氯仿，10%H2SO4顯紫色，初步推測(cè)該化合物為甾醇或三萜類(lèi)成分。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）譜顯示δH5.3（1H，d，J=4.4 Hz）為典型的烯氫信號(hào)，δH 4.61（1H，m）為連氧次甲基質(zhì)子信號(hào)，δH1.25[brs，（CH2）n]為一組長(zhǎng)鏈脂肪烴的強(qiáng)強(qiáng)偶合峰，δH1.02（3H，s）、δH 0.78～0.94（m，5×CH3）和δH0.68（3H，s）顯示有7個(gè)甲基氫信號(hào)，這些信號(hào)進(jìn)一步證明了該化合物為一甾醇類(lèi)成分。將該化合物的譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)β-谷甾醇棕櫚酸酯數(shù)據(jù)[7]對(duì)照一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇棕櫚酸酯（圖2）。

2.2.2 化合物2 白色針晶，易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇，溴甲酚綠反應(yīng)和三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)均為陽(yáng)性，表示結(jié)構(gòu)中含有羧基和酚羥基。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）譜顯示芳香區(qū)存在兩組氫信號(hào)δH6.83（1H，d，J=9.0Hz），δH7.43～7.45（2H，m），說(shuō)明該化合物可能存在三取代苯環(huán)，且存在鄰位取代氫；δH12.43（1H，s）為羧基質(zhì)子信號(hào)，δH9.78（1H，s）為酚羥基質(zhì)子信號(hào)，δH3.80（3H，s）為甲氧基上的氫信號(hào)。經(jīng)與文獻(xiàn)[8]3-羥基-4-甲氧基苯甲酸數(shù)據(jù)對(duì)照一致，故鑒定該化合物為3-羥基-4-甲氧基苯甲酸（圖3）。

2.2.3 化合物3 無(wú)色針晶，10%硫酸乙醇顯紫紅色，與對(duì)照品β-谷甾醇共薄層，經(jīng)3種不同的溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，Rf值均一致，故鑒定化合物3為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

3 討論

百部作為我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，具有很好的止咳、殺蟲(chóng)效果，在臨床上一直有著廣泛的應(yīng)用。在對(duì)葉百部的有效成分中，對(duì)葉百部中的生物堿是發(fā)揮殺蟲(chóng)和止咳效果的核心成分，也是既往研究的重點(diǎn)[9]。目前國(guó)內(nèi)已有大量文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)葉百部中生物堿的殺蟲(chóng)效果是市面上最強(qiáng)效殺蟲(chóng)劑的10倍左右，其止咳效果也遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于常規(guī)藥物[10-11]。鑒于對(duì)葉百部的藥用價(jià)值，近年來(lái)關(guān)于其化學(xué)成分的研究不斷增多，其藥理作用也從傳統(tǒng)的止咳、殺蟲(chóng)逐漸擴(kuò)展至抗菌、鎮(zhèn)痛、止咳、殺蟲(chóng)等諸多方面，針對(duì)對(duì)葉百部藥理活性成分的研究也不斷豐富。目前學(xué)者對(duì)百部化學(xué)成分的研究報(bào)道主要集中在生物堿類(lèi)和二苯乙烯類(lèi)成分，而其他成分較少報(bào)道[12-13]。隨著百部藥理作用、臨床應(yīng)用研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)百部除具有殺蟲(chóng)、鎮(zhèn)咳祛痰作用外，尚具有抗菌和抗病毒、松弛支氣管平滑肌、中樞鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等多方面的作用，這是生物堿類(lèi)成分遠(yuǎn)不能包羅的[14]。根據(jù)中藥整體作用的特點(diǎn)，百部這些功效可能是其在生物體內(nèi)通過(guò)多種類(lèi)型的化學(xué)成分發(fā)揮協(xié)同作用而表現(xiàn)出的綜合效應(yīng)[10]。鑒于此，有必要對(duì)百部的非生物堿類(lèi)化學(xué)成分也進(jìn)行深入研究，為百部進(jìn)一步研究、開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。在本次研究中，筆者通過(guò)反復(fù)硅膠柱色譜，從對(duì)葉百部的85%乙醇提取物中共分離得到3個(gè)化合物。通過(guò)光譜數(shù)據(jù)分析等手段，鑒定其結(jié)構(gòu)分別為：β-谷甾醇棕櫚酸酯（化合物1）、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸（化合物2）、β-谷甾醇（化合物3）。在既往的臨床研究中，對(duì)葉百部的生物堿成分一直被認(rèn)為是該中藥材活性成分研究的重點(diǎn)，截至到目前，約有11個(gè)藥理活性較好生物堿完成了結(jié)構(gòu)確證和藥理活性評(píng)價(jià)[15]。但是關(guān)于對(duì)葉百部中非生物堿的研究，僅在近幾年內(nèi)才逐漸得到重視，越來(lái)越多的非生物堿化合物被發(fā)現(xiàn)。王珺等[16]對(duì)對(duì)葉百部中的非生物堿進(jìn)行了研究，提取出的11個(gè)化合物中9個(gè)為新型化合物，大大豐富了對(duì)葉百部非生物堿成分研究的內(nèi)容。在本次研究中發(fā)現(xiàn)的3個(gè)化合物，均為對(duì)葉百部中含量較高的非生物堿，與既往的相關(guān)研究有著諸多相互佐證之處，提取和結(jié)構(gòu)確證手段也較為可靠。通過(guò)本次的研究，使我們對(duì)對(duì)葉百部的非生物堿成分有了更為清晰的認(rèn)識(shí)，為將來(lái)實(shí)現(xiàn)這些化合物的合成和分子水平的結(jié)構(gòu)研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2015-02-02 本文編輯：衛(wèi) 軻）