微柱凝膠卡式法和試管抗人球蛋白法在新生兒ABO溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中的效果觀察

黃會(huì)金

[摘要] 目的 比較微柱凝膠卡式法和試管抗人球蛋白法在新生兒ABO溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中的效果。 方法 選取本院2013年1月～2014年12月收治的臨床擬診的108例ABO母嬰血型不合新生兒溶血病患者作為研究對(duì)象，分別采用微柱凝膠卡式法和傳統(tǒng)試管法進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、間接抗人球蛋白試驗(yàn)、放散試驗(yàn)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。 結(jié)果 108例患者中，確診102例，其中微柱凝膠卡式法所測(cè)得的抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性率、直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率、符合ABO-HDN者所占比例顯著高于傳統(tǒng)試管法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 微柱凝膠卡式法在新生兒溶血病診斷中的應(yīng)用價(jià)值顯著，且操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)較短，值得臨床推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 微柱凝膠卡式法；抗人球蛋白；新生兒ABO溶血；臨床檢驗(yàn)

[中圖分類號(hào)] R722.18 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2015）06（c）-0129-03

[Abstract] Objective To compare the effect of micro-column gel cards assay and anti-human globulin test in tube on three tests of neonatal ABO hemolysis. Methods 108 cases with neonatal hemolysis due to ABO blood group incompatibility of mom & infant from January 2013 to December 2014 in our hospital were selected as research object.The direct anti-human globulin test，indirect anti-human globulin test and elution test were carried out by micro-column gel cards assay and traditional tubing，the tested outcomes was compared and analyzed. Results Among 108 cases，102 cases were definitely diagnosed.The positive rate of antibody free test，direct anti-human globulin test，antibody elution test and the proportion of patients meeting the diagnosis of ABO-HDN by micro-column gel cards assay was higher than that by the traditional tubing method，with significant difference（P<0.05）. Conclusion Application vaule of microcolumn gel card method in the diagnosis of hemolytic disease of newborn is significant，and the operation is simple，time is short，it is worthy of clinical promotion and application.

[Key words] Micro-column gel cards assay；Anti-human globulin；Neonatal ABO hemolysis；Clinical inspection

新生兒溶血?。╤emolytic disease of the newborn，HDN）是母嬰血型不合導(dǎo)致的一種胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病。引起HDN的危險(xiǎn)因素較多，其中母嬰ABO血型不合為主要因素。早期診斷、早期治療對(duì)于降低本病的嚴(yán)重不良后果具有重要意義。本研究選取本院擬診的ABO母嬰血型不合HDN患者作為研究對(duì)象，分別采用微柱凝膠卡式法和試管抗人球蛋白法兩種方法進(jìn)行檢測(cè)，探討其在新生兒ABO溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2013年1月～2014年12月收治的臨床擬診的108例ABO母嬰血型不合HDN患者作為研究對(duì)象，其中男56例，女52例；出生時(shí)間為0.5～8 d，平均（4.7±1.9） d。所有患兒在出生1～7 d內(nèi)有黃疸、血紅蛋白降低、貧血、高膽紅素血癥等癥狀出現(xiàn)，部分患兒同時(shí)伴有HDN。所有患兒家屬均自愿參加臨床研究并簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑

微柱凝膠檢測(cè)卡、試劑，標(biāo)準(zhǔn)A、B、O紅細(xì)胞，37℃免疫微柱孵育器由長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)提供；單特異性抗-IgG、多特異性抗人球蛋白試劑、單特異性抗-C3購(gòu)于上海血液中心。

1.3 方法

采集入選患者標(biāo)本，分別應(yīng)用傳統(tǒng)試管法和微柱凝膠卡式法進(jìn)行檢測(cè)，具體方法如下。

1.3.1 傳統(tǒng)試管法 分為直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)3個(gè)部分進(jìn)行，具體操作步驟為：將接受檢查的紅細(xì)胞采用生理鹽水進(jìn)行洗滌，共計(jì)3次，將其配制成濃度為3%～5%的紅細(xì)胞懸液，然后選取1滴紅細(xì)胞懸液，加入2～3滴廣譜抗人球蛋白，在經(jīng)過(guò)離心處理后，對(duì)檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行觀察；另取3支同樣規(guī)格的試管，分別標(biāo)記為A、B、O，每管加入2滴患兒血清/放散液，按標(biāo)記分別加入A、B、O試劑紅細(xì)胞1滴，將完成上述操作的3個(gè)試管置于37℃條件下進(jìn)行孵育，時(shí)間控制在1 h左右，孵育處理完成后，采用生理鹽水進(jìn)行反復(fù)徹底的清洗，一般3次左右，此時(shí)再加入2滴抗人球蛋白試劑，在經(jīng)過(guò)離心處理后觀察結(jié)果[4]。

1.3.2 微柱凝膠卡式法 ①直接抗球蛋白試驗(yàn)：采集靜脈血并離心處理，對(duì)壓積紅細(xì)胞實(shí)施分離，采用生理鹽水進(jìn)行多次徹底洗滌之后，配制成0.5%紅細(xì)胞懸液，并取50 μl加入微柱凝膠孔，在2000 r/min條件下離心5 min，對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察、判斷，紅細(xì)胞聚集在凝膠帶的上部或中部位置可認(rèn)定為檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性；②血清游離抗體試驗(yàn)：在微柱凝膠卡所顯示的相應(yīng)位置，分別加入50 μl的A、B、O紅細(xì)胞和50 μl患兒血清，將上述標(biāo)本置于37℃條件下進(jìn)行孵育處理15 min左右，而后在2000 r/min條件下離心10 min，對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察，陽(yáng)性結(jié)果判斷與直接抗球蛋白試驗(yàn)相同；③釋放試驗(yàn)：取500 μl經(jīng)過(guò)4次洗滌的壓積紅細(xì)胞，置試管中加等量生理鹽水，將上述試管置于56℃水浴中進(jìn)行孵育處理10 min左右，然后在2000 r/min條件下進(jìn)行5 min離心處理，將上清液作為放散液，在微柱凝膠孔上加入劑量為50 μl的標(biāo)準(zhǔn)A、B、O紅細(xì)胞，然后加入50 μl放散液，在37℃條件下孵育15 min，在1500 r/min條件下離心3 min，對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷，陽(yáng)性結(jié)果判斷同上[5-6]。

1.4 觀察指標(biāo)

選擇抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性率、直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率、符合ABO-HDN者所占比例等作為觀察指標(biāo)進(jìn)行比較[7]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

108例患者中，確診102例，其中微柱凝膠卡式法所測(cè)得的抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性率、直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率、符合ABO-HDN者所占比例顯著高于傳統(tǒng)試管法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

3 討論

直接抗人球蛋白試驗(yàn)、間接抗人球蛋白試驗(yàn)、放散試驗(yàn)?zāi)軌驅(qū)π律鷥貉逯惺欠褚呀?jīng)含有紅細(xì)胞抗體或紅細(xì)胞是否已經(jīng)被致敏進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。臨床研究顯示，誘發(fā)新生兒ABO溶血的病因相對(duì)較多，早期診斷和治療對(duì)于降低本病不良后果具有重要意義[8-9]，因此如何提高診斷的敏感性和特異性就顯得尤為關(guān)鍵。目前臨床上對(duì)新生兒ABO溶血的診斷多采用傳統(tǒng)試管酶試驗(yàn)法，該操作步驟繁多，時(shí)間較長(zhǎng)，重復(fù)性相對(duì)較差，易出現(xiàn)假陰性。相關(guān)研究顯示，微柱凝膠卡式法在新生兒ABO溶血診斷中可發(fā)揮重要作用[10-12]。微柱凝膠卡式法是以傳統(tǒng)血清學(xué)為基礎(chǔ)，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步研究建立起來(lái)的一項(xiàng)免疫學(xué)血型檢測(cè)技術(shù)，主要包括抗凝膠柱過(guò)濾、抗原抗體反應(yīng)、離心3部分。

本研究結(jié)果顯示，在108例抽樣患者中，確診102例，其中微柱凝膠卡式法所測(cè)得的抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性率、直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率以及符合ABO-HDN者所占比例顯著高于臨床傳統(tǒng)試管法，這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果基本一致[13-15]，提示微柱凝膠卡式法的準(zhǔn)確性高于傳統(tǒng)試管法。

綜上所述，微柱凝膠卡式法在HDN診斷中的應(yīng)用價(jià)值顯著，且操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)較短，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2015-01-13 本文編輯：祁海文）