桑芪首烏片提取工藝的實驗研究

張韶湘　余曉玲　魏丹霞等

摘要：目的采用正交試驗法優(yōu)選桑芪首烏片的提取工藝。方法鉤藤用乙醇超生提取，以乙醇濃度，提取時間，液料比為三因素L9（33），干膏得率為指標(biāo)，優(yōu)選鉤藤最佳提取工藝；剩余藥味與鉤藤藥渣一并進(jìn)行水煎煮，以液料比、煎煮次數(shù)、煎煮時間為三因素L9（33），總黃酮含量和干膏得率為指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝。結(jié)果該處方提取最佳工藝條件為：6倍量60%的乙醇超聲提取鉤藤60 min，藥渣與其余藥味用8倍量水，提取2次，每次1 h。結(jié)論該工藝操作簡便易行，適用于桑芪首烏片的提取。

關(guān)鍵詞：桑芪首烏片；提取工藝；鉤藤超聲提?。豢傸S酮UV測定

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1007-2349（2015）06-0086-03

云南省榮譽(yù)名中醫(yī)陸家龍主任醫(yī)師潛心研究的經(jīng)驗方“桑芪首烏湯”以中醫(yī)基礎(chǔ)理論為依據(jù)，主要由桑寄生、黃芪、制首烏、鉤藤、天麻、三七須根等十余味天然藥物組成。在中醫(yī)治療高血壓及相關(guān)心腦血管疾病時，對于改善患者臨床癥狀及提高生活質(zhì)量方面是具有較好的療效。西醫(yī)對于控制高血壓有很多類藥物，但其癥狀改善效果并不盡人意，部分血壓雖已控制正常但上述癥狀仍然持續(xù)存在，且大部分藥物價格昂貴，長期服用病人負(fù)擔(dān)過重，甚至存在或這或那的副反應(yīng)。該處方經(jīng)過了二十余年的臨床觀察，具有改善癥狀快、療效持續(xù)平穩(wěn)，安全、價低等優(yōu)點(diǎn)，倍受廣大患者的認(rèn)可?，F(xiàn)將原有湯劑改為片，以便于患者攜帶、服用。本實驗為片劑提取工藝的研究，為該劑型進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1儀器和試藥

1.1儀器BJ-II崩解時限儀，SHB-III 循環(huán)水式多用真空表，電熱恒溫水浴鍋，F(xiàn)N202-2A型 電熱干燥箱，KS-3000ULTRASSONIC CLEANER.

1.2試藥藥品購于云南白藥集團(tuán)股份有限公司中藥飲片分公司

2提取

2.1鉤藤的提取根據(jù)文獻(xiàn)[1～2]，鉤藤屬茜草科植物，為中醫(yī)傳統(tǒng)臨床中草藥，其性涼，味甘苦，具有清熱平肝，息風(fēng)定驚的功效，臨床用于高血壓病頭暈等。中醫(yī)學(xué)理論中明確提及“鉤藤后下”，現(xiàn)代藥學(xué)研究表明鉤藤中所含有效成分鉤藤堿，異鉤藤堿等受熱易破壞，所以在提取過程中，應(yīng)控制其溫度不高于81℃[3]。因此，我們以乙醇濃度，提取時間，液料比為三因素L9（33），干膏得率為指標(biāo)，優(yōu)選鉤藤超聲提取的最佳工藝。因素水平表見表1。

從3個因素的極差來看，影響提取效果的因素順序A>B>C，即醇濃度是影響最大的因素，其次為提取時間，液料比的影響最小。正交試驗結(jié)果顯示，最佳的提取工藝條件是6倍量60%的乙醇，提取時間為 1 h。

2.2其余藥材的提取

2.2.1正交設(shè)計有文獻(xiàn)報道[4]首烏的乙醇提取物具有肝細(xì)胞毒性，且其余藥味的有效成分多為皂苷、黃酮等水溶性物質(zhì)，同時，考慮到乙醇提取在今后大規(guī)模生產(chǎn)中對設(shè)備等硬件設(shè)施的高要求，將剩余藥味與鉤藤藥渣一并進(jìn)行水煎煮，以液料比、煎煮次數(shù)、煎煮時間為三因素L9（33），總黃酮含量和干膏得率為指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝。因素水平表見表3。

2.2.2總黃酮含量測定（UV法）

2.2.2.1儀器與試藥儀器：UV-7502PC（上海尖銳光電科技有限公司）；對照品：蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為：100080–201309）；供試品：桑芪首烏片干膏，昆明市中醫(yī)醫(yī)院提供；試劑：蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2.2.2.2對照品溶液的制備精密稱取經(jīng) 108 ℃ 干燥至恒重的蘆丁對照品約10.7 mg，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移入 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，得蘆丁對照品溶液濃度為0.107 mg/mL，備用。

2.2.2.3供試品溶液的制備取干膏5 g研細(xì)，加入 25 mL甲醇稱重，超聲30 min，補(bǔ)足重量，過濾，濾液揮干后用水溶解至10 mL，取用等體積乙酸乙酯萃取4次后，回收乙酸乙酯的殘渣用甲醇定容至25 mL容量瓶中，即得供試品溶液。

2.2.2.4測定方法量取1 mL供試品溶液置25 mL量瓶中，加5% NaNO2溶液1mL，混勻，放置6 min，加10% Al（NO3）3溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%NaOH溶液10 mL，放置15 min，甲醇稀釋至刻度，搖勻。以相應(yīng)的溶液為空白，在500 nm處測定吸光度。連續(xù)測定3次，取平均值，以蘆丁為對照品，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定總黃酮含量。

從3個因素的極差來看，影響提取效果的因素順序A>B>C，即提取次數(shù)是影響最大的因素，其次為提取時間，液料比的影響最小。就A因素來說，2，3水平對結(jié)果的影響較為接近，且明顯優(yōu)于1水平；出于降低成本考慮，我們選擇了較為經(jīng)濟(jì)的工藝，即：8倍量水，提取2次，每次1 h。

3結(jié)果與討論

3.1根據(jù)實驗結(jié)果得到鉤藤超聲提取的最佳的提取工藝條件是6倍量60%的乙醇，提取 1 h；鉤藤醇提后的藥渣與其余藥味一并用8倍量水，提取2次，每次1 h。該工藝操作簡便易行，適用于桑芪首烏片的提取。

3.2根據(jù)處方藥味組成，方中天麻及鉤藤為中藥降壓之藥對，而鉤藤中的主要活性成分為鉤藤堿和異鉤藤堿，但是此類生物堿遇熱容易改變。而傳統(tǒng)的水煎煮涉及較多高溫環(huán)節(jié)，對其藥效影響明顯。根據(jù)文獻(xiàn)報道以乙醇提取為主，但醇提的大生產(chǎn)對設(shè)備和環(huán)境的限制頗多；也有文獻(xiàn)[5]采用超聲提取加酵解的方法對鉤藤中活性成分提取，得率較高。因此，結(jié)合實際，對鉤藤采用了超聲提取的方法。由于（異）鉤藤堿的標(biāo)準(zhǔn)品（含量測定用）無法從中國生物制品檢定所購得?；谄錈崦粜蕴攸c(diǎn)，我們在嚴(yán)格控制提取溫度的前提下對其收膏率進(jìn)行量化，在一定程度上極大的保證了其藥效學(xué)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.3基于原處方為湯劑入藥，為不改變其原有物質(zhì)基礎(chǔ)，故選用水作為提取溶媒。

參考文獻(xiàn)：

[1]李晶晶.鉤藤總堿提取工藝優(yōu)化及其抗焦慮作用藥效學(xué)和作用機(jī)制的初步研究[D].第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2013.

[2]王瑞儉.鉤藤堿提取工藝研究[J].吉林林學(xué)院學(xué)報，1998，14（2）.

[3]李雅臣.鉤藤中鉤藤總生物堿提取溶劑的選擇探討[J].天津中醫(yī)藥，2003，20（4）：67.

[4]呂旸，王伽伯等.提取溶劑對何首烏肝細(xì)胞毒性的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（20）.

[5]彭國平.應(yīng)用微生物發(fā)酵與超聲波聯(lián)合處理高效提取鉤藤[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，9（3）：497.