HCV-c Ag和HCV-Ab聯(lián)合檢測(cè)對(duì)HCV感染診斷價(jià)值的研究

林俊填 ，余晉林 ，伍偉健 ，陳展?jié)?，龔道元

(1、佛山市中心血站，廣東 佛山 528000；2、佛山市第一人民醫(yī)院；3、佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院)

丙型肝炎是由HCV病毒感染所致，據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球感染率高達(dá)3%，我國(guó)一般人群HCV-Ab陽(yáng)性率為3.2%[1]。丙型肝炎癥狀較輕，發(fā)展慢，不易引起重視，但易可發(fā)展為慢性肝炎、肝硬化和肝癌，已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生安全問(wèn)題。目前尚無(wú)有效疫苗預(yù)防，臨床上也尚無(wú)特效的藥物和治療措施[2]。HCV能通過(guò)輸血傳播，因此，對(duì)獻(xiàn)血者嚴(yán)格篩查和臨床上早期檢出HCV感染是防止丙型肝炎傳播的有效措施。目前，絕大多數(shù)血站是通過(guò)檢測(cè)HCV-Ab來(lái)對(duì)血液進(jìn)行篩查，醫(yī)院尤其中小醫(yī)院也主要通過(guò)檢測(cè)HCV-Ab來(lái)進(jìn)行診斷，但對(duì)早期感染者HCV-Ab檢測(cè)容易漏診[3]。本文對(duì)門診和住院患者血液標(biāo)本進(jìn)行HCV-cAg、HCV-Ab及HCV-RNA聯(lián)合檢測(cè)，探討其對(duì)HCV感染的臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

1.1.1 丙型肝炎患者 選取佛山市第一人民醫(yī)院2013年9月至2014年9月間門診及住院患者121例，所有患者均通過(guò)HCV-RNA檢測(cè)確診，并排除其他病毒型肝炎病毒感染，符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病學(xué)與寄生蟲(chóng)學(xué)會(huì)制定的《丙型肝炎防治指南》確診標(biāo)準(zhǔn)[4]。

1.1.2 對(duì)照組 隨機(jī)選擇2014年5-7月HCV-RNA檢測(cè)陰性的120例體檢者作為對(duì)照組，且在半年后隨訪，HCV-RNA檢測(cè)均為陰性。

1.2主要儀器與試劑

1.2.1 儀器 全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀型號(hào)為MLFAME24/20（瑞士哈美頓公司）；PCR熒光定量分析儀型號(hào)為ABI-7500（美國(guó)ABI公司）。

1.2.2 試劑 ⑴HCV-Ab檢測(cè)試劑：采用上?？迫A公司的ELISA檢測(cè)試劑盒；⑵HCV-cAg檢測(cè)試劑：采用山東萊博生物科技有限公司生產(chǎn)試劑盒；⑶HCV-RNA檢測(cè)試劑：中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集及處理 靜脈采血、離心分離血清，-70℃冰凍保存。

1.3.2 HCV-RNA檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)，所有操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以HCV-RNA為金標(biāo)準(zhǔn)，確診患者121例血清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 HCV-cAg檢測(cè) 設(shè)空白對(duì)照1孔，陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2孔?？瞻讓?duì)照加入200μl樣本稀釋液，其他各孔加入100μl樣本稀釋液，陰性、陽(yáng)性對(duì)照及待測(cè)標(biāo)本 100μl，37℃孵育 90min，洗板 6 次，加酶結(jié)合物 200μl，37℃孵育 30min。再洗板 6次，加顯色劑200μl。 37℃避光 10min，加終止液 50μl終止顯色，10min內(nèi)450nm(參考波長(zhǎng)630nm)讀板，Cut off=NCx（陰性均值）+0.06。

1.3.4 HCV-Ab檢測(cè) ELISA法，嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)操作。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，配對(duì)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果 對(duì)121例HCV陽(yáng)性患者和對(duì)照組120例體檢者分別進(jìn)行HCV-Ab、HCV-cAg檢測(cè)，結(jié)果如表1、表2。

2.2 HCV-Ab和HCV-cAg的相關(guān)檢測(cè)參數(shù)計(jì)算和兩者間的檢測(cè)一致性檢驗(yàn) 經(jīng)計(jì)算HCV-Ab和HCV-cAg的檢測(cè)特異度分別為99.17%和100%，均具有良好的檢測(cè)特異度；HCV-Ab的檢測(cè)靈敏度為90.91%，而HCV-cAg的靈敏度為70.25%，但聯(lián)合檢測(cè)可使靈敏度得以提高 （具體見(jiàn)表3）；HCV-Ab和HCV-cAg的檢測(cè)敏感度存在顯著性差異（表4），而特異性兩者間無(wú)顯著性差異。另外，HCV-Ab和HCV-cAg兩指標(biāo)間檢驗(yàn)結(jié)果一致性經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，其Kappa系數(shù)為-0.013，說(shuō)明兩者之間的檢測(cè)結(jié)果無(wú)一致性。

表1 患者與對(duì)照組HCV標(biāo)志物檢查結(jié)果

表2 確診患者HCV標(biāo)志物檢查結(jié)果

表3 HCV-Ab、HCV-cAg單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)HCV感染的診斷價(jià)值

表4 HCV-Ab與HCV-c Ag的敏感度與特異度比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果

3 討論

RNA是HCV感染的直接證據(jù)，RNA在HCV感染后的16～15d即可出現(xiàn)，RNA檢測(cè)可使窗口期大大縮短到13d，HCV-RNA檢測(cè)具有早期、敏感和特異等優(yōu)點(diǎn)，但HCV感染后病毒血癥有持續(xù)、一過(guò)和間歇3種模式[5]，此時(shí)HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果為陰性，一些晚期肝病患者的表達(dá)載量太少也無(wú)法檢出[6，7]；如患者曾用干擾素治療，干擾抑制HCV-RNA復(fù)制，HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果陰性也不排除HCV感染的可能[8-10]，因此，HCV-RNA檢測(cè)也存在一定的漏診率[11，12]。還有，熒光定量PCR法檢測(cè)HCV-RNA，影響因素較多，如RNA酶污染或RNA降解等[13]，在樣品采集、儲(chǔ)存和檢測(cè)方面都有嚴(yán)格要求，技術(shù)上操作要求高，實(shí)驗(yàn)條件嚴(yán)格，成本高、設(shè)備貴，所以，難以在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室或基層醫(yī)院推廣、普及和應(yīng)用[14]。

目前，中心血站與中小醫(yī)院主要通過(guò)檢測(cè)HCV-Ab來(lái)對(duì)血液進(jìn)行篩查[15-17]。HCV-Ab是HCV感染的間接依據(jù)，第3代試劑檢測(cè)HCV-Ab窗口期為66d，窗口期長(zhǎng)，故HCV-Ab檢測(cè)時(shí)間需在感染大約70d后[18]，容易漏診早期感染患者，此外，如免疫缺陷患者、血液透析、免疫抑制劑以及其他嚴(yán)重疾病導(dǎo)致體內(nèi)免疫低下患者，均可致體內(nèi)HCV-Ab無(wú)法檢出，導(dǎo)致假陰性。還有，不同廠家包被的HCV抗原組成、來(lái)源和用量等不同，導(dǎo)致各廠家試劑靈敏度和特異度存在差異，導(dǎo)致檢查結(jié)果不一致，結(jié)果可能出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性，單憑HCV-Ab檢測(cè)容易漏檢。同時(shí)，HCV-Ab陽(yáng)性也無(wú)法分清是既往感染還是新近感染，無(wú)法說(shuō)明體內(nèi)HCV病毒復(fù)制的情況，給疾病的診斷和病情判斷帶來(lái)一定的困難。因此，HCV-Ab單獨(dú)作為診斷指標(biāo)還有較大的局限性。

HCV-cAg也是HCV早期感染或持續(xù)性感染的指標(biāo)，一般情況下，患者HCV-cAg陽(yáng)性僅比HCV-RNA在檢出時(shí)間上晚1~2d，且檢測(cè)方法易掌握，操作簡(jiǎn)便，不需要特殊設(shè)備，可常規(guī)檢測(cè)。由于HCV-cAg檢測(cè)可明顯縮短窗口期，可為HCV早期診斷提供依據(jù)。在血站對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行HCV-cAg檢測(cè)，可增加HCV的陽(yáng)性檢出率和減少HCV的傳播風(fēng)險(xiǎn)。

本文的研究結(jié)果顯示，單獨(dú)進(jìn)行HCV-Ab和HCV-cAg檢測(cè)時(shí)，121例 HCV-RNA確診患者HCV-Ab和HCV-cAg兩指標(biāo)的檢出陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)分別為110例和85例，檢測(cè)靈敏性分別為90.91%和70.25%，HCV-cAg的靈敏性要低于HCV-Ab，兩者間存在顯著性差異；兩指標(biāo)的檢測(cè)特異度分別為99.17%和100%，兩者的特異度相近，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩者間無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。HCV感染機(jī)體產(chǎn)生HCV-Ab后，發(fā)生相對(duì)應(yīng)的抗原抗體結(jié)合，可使HCV-cAg檢出率降低，本文研究結(jié)果也說(shuō)明HCV-cAg的檢出敏感度要低一些。因此，臨床上不可將HCV-cAg檢測(cè)完全取代HCV-Ab的檢測(cè)，將HCV-Ab和HCV-cAg兩種指標(biāo)結(jié)合起來(lái)檢測(cè)，對(duì)臨床上提高HCV感染的篩查和診斷具有重要的價(jià)值。

本文的研究結(jié)果顯示HCV-Ab和HCV-cAg兩檢驗(yàn)結(jié)果之間存在一定的交叉，說(shuō)明兩種實(shí)驗(yàn)方法之間無(wú)法相互替代。兩者聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，敏感度和陰性預(yù)測(cè)值等指標(biāo)較任一單項(xiàng)指標(biāo)都有了一定程度的提升，而特異度無(wú)顯著性改變。

綜上所述，我們認(rèn)為，對(duì)于患者進(jìn)行HCV的篩查，最好是將HCV-Ab和HCV-cAg兩種指標(biāo)結(jié)合起來(lái)檢測(cè)，這對(duì)臨床上診斷和預(yù)防HCV感染具有重要的價(jià)值。

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