探究溶血標(biāo)本對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響

陳燕

(江蘇無錫江陰市人民醫(yī)院　江蘇　無錫　214400)

探究溶血標(biāo)本對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響

陳燕

(江蘇無錫江陰市人民醫(yī)院江蘇無錫214400)

摘要目的：探討溶血標(biāo)本對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響。方法：選取2013年12月-2015年3月來我院進(jìn)行治療的患者126例，其中陰性標(biāo)本51個，乙型肝炎患者標(biāo)本75個，進(jìn)行常規(guī)檢測后認(rèn)為造成溶血情況，使用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測，觀察HBsAg的具體情況。結(jié)果：經(jīng)過檢驗后發(fā)現(xiàn)，溶血情況的發(fā)生對測定結(jié)果有一定的干擾，從乙肝患者的血液標(biāo)本吸光度情況方面來看，受到的干擾較大，但是并不影響對疾病結(jié)果的判定，P>0.05，無顯著性差異和統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：溶血標(biāo)本對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響不大，在血紅蛋白小于10g/L的情況下并不會對異性肝炎病毒表面的抗原測定的結(jié)果產(chǎn)生影響，但是患者的標(biāo)本產(chǎn)生溶血情況依然不能忽視。

關(guān)鍵詞溶血標(biāo)本；酶聯(lián)免疫法；HBsAg的影響；吸光度情況；血紅蛋白

為了探討溶血標(biāo)本對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響，我院特進(jìn)行了一次研究，取得了較為良好的效果，現(xiàn)將具體情況報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年12月-2015年3月來我院進(jìn)行治療的患者126例，其中陰性標(biāo)本51個，乙型肝炎患者標(biāo)本75個。

1.2 方法

進(jìn)行常規(guī)檢測后認(rèn)為造成溶血情況，使用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測。酶聯(lián)免疫法使用的儀器有：sysmex kx-21N血球分析儀、RT-600酶標(biāo)分析儀、RT-300洗板機(jī)、振蕩器、乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑，乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑主要由萬泰生物藥業(yè)提供。

1.3 操作方式

收集所有患者標(biāo)本的紅細(xì)胞，將期分別放在冰箱中進(jìn)行冷凍，造成溶血情況。使用含量為0.9%的NaCl溶液對標(biāo)本的血紅蛋白含量進(jìn)行調(diào)整，將其控制在5g/L、10g/L。進(jìn)行酶聯(lián)免疫法檢測按照使用的說明書進(jìn)行即可，采用樣本吸光度值和臨界值進(jìn)行比較，對患者陰陽性情況進(jìn)行判定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

對上述患者各項記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行分類和匯總處理，采取統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0對上述匯總數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗，P<0.05，具有顯著性差異和統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

經(jīng)過檢驗后發(fā)現(xiàn)，血紅蛋白小于5g/L時陽性檢出的例數(shù)有3例，陰性檢出的例數(shù)有48例，檢出率為5.88%。血紅蛋白小于10g/L時陽性檢出的例數(shù)有3例，陰性檢出的例數(shù)有48例，檢出率為5.88%。

將上述情況與空白標(biāo)本的結(jié)果進(jìn)行對比，將相關(guān)結(jié)果輸入統(tǒng)計學(xué)軟件，X2=2.134，P<0.05，具有顯著性差異和統(tǒng)計學(xué)意義。

在HBsAg炎性標(biāo)本測定結(jié)果方面，所有患者的檢測結(jié)果均為陽性，P>0.05，無顯著性差異和統(tǒng)計學(xué)意義。在乙肝患者的標(biāo)本結(jié)果中，溶血情況的發(fā)生會使吸光度情況產(chǎn)生波動，在本次研究中，乙型肝炎患者血紅蛋白5g/L的標(biāo)本吸光度增加了13.04%；乙型肝炎患者血紅蛋白10g/L的標(biāo)本吸光度增加了15.08%。

3.討論

酶聯(lián)免疫檢測測定的方式主要是以抗原和抗體分子為測定靶標(biāo)的方法，亦是目前最為常用的實驗室診斷方法之一，屬于標(biāo)記免疫技術(shù)的一種。側(cè)重測定發(fā)生需要經(jīng)過采樣、保溫、洗滌、比色等步驟進(jìn)行性操作。如果在操作的過程中稍有差池就會出現(xiàn)溶血情況[1]。

溶血情況的發(fā)生會給檢驗的結(jié)果造成較為嚴(yán)重的影響，為了降低此種情況發(fā)生的幾率，在實驗的各個步驟中都需要特別注意：1、在加樣時需要直接將樣本加到反應(yīng)杯的底部，不能將其加到反應(yīng)杯的上部和邊緣，尤其是酶試劑[2]，這樣能夠減少非特異性吸附現(xiàn)象的發(fā)生；2、加樣步驟完成之后需要將其放置在振蕩器中，但是需要注意的是振蕩器的速度不能過快，放置發(fā)生液體飛濺的情況發(fā)生；3、在洗滌的過程中需要采用洗板機(jī)，并且需要將程序設(shè)置為雙吸，清洗液的劑量為350μl，將潛水泵的壓力調(diào)整到合適的范圍內(nèi)[3]。另外需要注意的是，清洗反應(yīng)杯之后需要確認(rèn)反應(yīng)杯之間是否發(fā)生污染現(xiàn)象，這樣才能夠減少非特異性吸附情況發(fā)生的幾率；4、酶標(biāo)分析儀比色過程中采用雙波長，雙波長的應(yīng)用能夠大大減少非特異性吸附對結(jié)果的影響，另外還能夠減少反應(yīng)杯外壁是否存在手印等不易察覺的贓物，降低了對結(jié)果的影響。

綜上所述，溶血標(biāo)本對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響不大，在血紅蛋白小于10g/L的情況下并不會對異性肝炎病毒表面的抗原測定的結(jié)果產(chǎn)生影響，但是患者的標(biāo)本產(chǎn)生溶血情況依然不能忽視，尤其是在比色結(jié)果處在臨界值的標(biāo)本，需要采取相應(yīng)的措施進(jìn)行補(bǔ)救，這樣才能夠在最大程度上提高疾病診斷的正確率，減少漏診、誤診情況的發(fā)生。上述觀點具有極強(qiáng)的臨床推廣價值，值得在臨床中大力推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張海軍. 類風(fēng)濕因子對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響[J]. 內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志,2013,03:295-297.

[2]張金鳳,劉春娃. 溶血標(biāo)本對酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的影響[J]. 中國當(dāng)代醫(yī)藥,2011,07:92.

[3]李建華,王萬倉. 溶血和帶血細(xì)胞標(biāo)本對HBsAg結(jié)果的影響[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2008,18:1122-1123.

【中圖分類號】R556.7

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B

【文章編號】1009-6019(2015)15-0043-02