孫 莉
(安徽省蕪湖市食品藥品檢驗(yàn)所,安徽蕪湖 241001)
甲硫酸新斯的明是一種抗膽堿酯酶藥,常用于重癥肌無力、手術(shù)后功能性腸脹氣及尿潴留等病的治療,也能發(fā)揮改善眼睛調(diào)節(jié)功能,減輕眼結(jié)膜充血的作用。對于其制劑甲硫酸新斯的明注射液的含量測定,《中國藥典》則采用半微量定氮法[1],該方法取樣量,操作繁瑣,結(jié)果誤差大。經(jīng)過系統(tǒng)的試驗(yàn),筆者采用HPLC法測定甲硫酸新斯的明注射液中甲硫酸新斯的明的含量,方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng),獲得了滿意的結(jié)果。
Agilent 1260型高效液相色譜儀;紫外檢測器(美國安捷倫公司);梅特勒-托利多AB265-S電子分析天平(德國梅特勒-托利多公司);UV-3900紫外可見分光光度計(jì)(日本日立公司)。甲硫酸新斯的明對照品(批號(hào):100550-200401,中國藥品生物制品檢定所);甲硫酸新斯的明注射液4批(上海信誼金朱藥業(yè)有限公司,批號(hào)120412;上海信誼金朱藥業(yè)有限公司,批號(hào)120706;河南潤弘制藥股份有限公司,批號(hào)1208171;河南潤弘制藥股份有限公司,批號(hào)1302011);乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純,水為二次去離子水。
2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:0.05 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié) pH 為 3.0)—乙腈(90∶10),流速為 1.0 mL·min-1,檢測波長為215 nm,進(jìn)樣量:10 μL,柱溫:室溫。理論塔板數(shù)按甲硫酸新斯的明峰計(jì)算應(yīng)不小于2 000,甲硫酸新斯的明與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求,2.2項(xiàng)下溶液的色譜圖見圖1(a~b)。
2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取甲硫酸新斯的明對照品10.20 mg,置20 mL量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備 取本品,用水稀釋制成每1 mL中含甲硫酸新斯的明0.5 mg的溶液,作為供試品溶液。
2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取甲硫酸新斯的明對照品51.00 mg,置50 mL量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品儲(chǔ)備液。精密量取對照品儲(chǔ)備液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL 分別置10 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,按擬定的色譜條件進(jìn)行檢測,記錄色譜圖,以甲硫酸新斯的明濃度(g·L-1)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)作線性回歸,得回歸方程 Y=171.75+18 694X,r=0.999 9。表明甲硫酸新斯的明在0.102 ~1.02 g·L-1濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
2.4 精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取同一種對照品溶液(0.51 g·L-1),在上述色譜條件下,重復(fù)測定6次,每次10μL,甲硫酸新斯的明峰面積的RSD為0.049%(n=6),表明精密度良好。
分別取同一批甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)共6份,在上述色譜條件下進(jìn)樣,記錄色譜圖,甲硫酸新斯的明含量測定的RSD為0.046%,表明本法重復(fù)性好。
分別取同一種對照品溶液(0.51 g·L-1),在室溫下放置,分別于 0、2、4、6、8 h 進(jìn)樣,記錄色譜圖。甲硫酸新斯的明峰面積的RSD為0.17%,表明溶液的穩(wěn)定性良好。
2.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的供試品溶液(120706)2 mL各9份,置10 mL容量瓶中,分別加入對照品溶液(1.02 g·L-1)0.8、1.0、1.2 mL 各 3份,用水稀釋至刻度,搖勻,按2.1項(xiàng)下色譜條件,分別進(jìn)樣。記錄色譜圖與峰面積,本方法的平均回收率為99.57%,RSD為0.95%符合要求。
2.6.1 酸降解溶液的配制 精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)1 mL,置10 mL量瓶中,加5 mol·L-1鹽酸溶液 100 μL,放置 30 min,加 5 mol·L-1氫氧化鈉溶液100μL,加水稀釋至刻度,搖勻。
第三,企業(yè)所得稅。抵債資產(chǎn)的公允數(shù)據(jù)以及繳納的其他稅收金額是企業(yè)所得稅的計(jì)稅基礎(chǔ)。重組債權(quán)的計(jì)稅成本是貸款資產(chǎn)以及表內(nèi)所需收取的利息,另外還需要對收到的抵債資產(chǎn)的公允價(jià)值與計(jì)稅成本之間的差異,明確當(dāng)期的利潤或損失,并對所需繳納得稅款進(jìn)行計(jì)算。抵債資產(chǎn)在持有環(huán)節(jié)獲取的收益(如抵債資產(chǎn)用于租賃所發(fā)生的其他業(yè)務(wù)收入扣除其他業(yè)務(wù)支出后的差額)需按照規(guī)定申報(bào)繳納企業(yè)所得稅;商業(yè)銀行抵債資產(chǎn)處置收入,應(yīng)當(dāng)按照抵債資產(chǎn)在處置環(huán)節(jié)的收入和支出申報(bào)繳納企業(yè)所得稅。
2.6.2 堿降解溶液的配制 精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)1 mL,置10 mL量瓶中,加5 mol·L-1氫氧化鈉溶液 100 μL,放置 30 min,加5 mol·L-1鹽酸溶液100μL,加水稀釋至刻度,搖勻。
2.6.3 光降解溶液的配制 將甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706),置太陽光下放置24 h后,即得。
2.6.4 熱降解溶液的配制 將甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706),置100℃水浴中加熱3 h后,即得。
按上述色譜條件進(jìn)樣,記錄色譜圖(圖1 c~f)。結(jié)果顯示,本品在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿破壞條件下,在保留時(shí)間為3.5 min附近降解物峰面積增大明顯,雜質(zhì)個(gè)數(shù)無明顯增加,而在加熱和光照條件下,樣品降解不明顯,在此色譜條件下,主峰的分離度約為8.5,表明該方法專屬性良好。
2.7 檢測限和定量限 取對照品溶液(0.102 g·L-1)用水稀釋若干倍,在上述色譜條件下測定,以信噪比S/N=3計(jì)算檢測限,甲硫酸新斯的明檢測限約為1.0 ng。以信噪比S/N=10估算定量下限,約為4.0 ng。實(shí)配4.0 ng稀溶液,經(jīng)檢測通過。
2.8 樣品含量測定 精密量取本品適量,加水稀釋制成每1 mL中約含0.5 mg的溶液,作為供試品溶液。精密量取10μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。另取甲硫酸新斯的明對照品,同法操作,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,即得,結(jié)果見表1。
表1 樣品含量測定結(jié)果
參照《中國藥典》有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下,筆者將流動(dòng)相0.05 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH 為 3.0)—乙腈(90∶10)和 0.05 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié) pH為 3.0)—乙腈(90∶10)(含0.001 5 moL·L-1庚烷磺酸鈉)進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)0.001 5 moL·L-1庚烷磺酸鈉對主峰的峰形及塔板無明顯改善,故選擇了相對簡單的前者作為流動(dòng)相。
從表1數(shù)據(jù)可以看出,藥典采用的半微量定氮法所測得結(jié)果相對于液相方法均高出3% ~6%,可見藥典方法的誤差因素較多,而本文所采用的HPLC法檢測甲硫酸新斯的明的含量結(jié)果可靠,可用于甲硫酸新斯的明注射液的質(zhì)量控制。
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