金黃色葡萄球菌β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法的應(yīng)用比較

劉敬王斌沈繼錄00中科院合肥物質(zhì)研究院腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科0000中國科技集團(tuán)公司第8研究所衛(wèi)生院0000安徽醫(yī)科大學(xué)

金黃色葡萄球菌β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法的應(yīng)用比較

劉敬1王斌2沈繼錄3
230031中科院合肥物質(zhì)研究院腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科1
230000中國科技集團(tuán)公司第38研究所衛(wèi)生院2
230000安徽醫(yī)科大學(xué)3

目的：比較頭孢硝噻吩液體（Cefinase）、頭孢硝噻吩紙片（Dryslide）、三葉草實(shí)驗(yàn)（Cloverleaf）、青霉素邊緣實(shí)驗(yàn)（Penicillin disk zone edge）檢測(cè)金黃色葡萄球菌β-內(nèi)酰胺酶的敏感性和特異性。方法：分別用Cefinase，Dryslide，Cloverleaf，Penicillin disk zone edge檢測(cè)金黃色葡萄球菌β-內(nèi)酰胺酶。結(jié)果：4種方法敏感度分別為83％、66％、91％、91％。特異度分別為100％、97％、100％、100％。結(jié)論：4種方法在檢測(cè)應(yīng)用上都能為臨床提供可靠的結(jié)果，但Cloverleaf和Penicillin disk zone edge檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試驗(yàn)較敏感，在操作上用頭孢硝噻吩紙片法更能被實(shí)驗(yàn)室所接受。關(guān)鍵詞 β-內(nèi)酰胺酶；金黃色葡萄球菌；頭孢硝噻吩液體；青霉素紙片

β-內(nèi)酰胺酶類抗生素因其抗菌活性高、毒性低的優(yōu)點(diǎn)屬現(xiàn)今臨床各種感染最常用的藥物[1]。隨著β-內(nèi)酰胺類抗生素的廣泛應(yīng)用甚至濫用以及致病菌的變遷，使得產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶的病原菌越來越多，是目前造成細(xì)菌高度耐藥的重要原因之一[2]。現(xiàn)對(duì)本院2013年1-12月臨床分離的12株對(duì)青霉素敏感的金黃色葡萄球菌和30株對(duì)青霉素耐藥的金黃色葡萄球菌用Cefinase液體法（A）、Dryslide干粉法（B）、Cloverleaf法（C）和Penicillin disk zone edge（D）同時(shí)進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)，比較4種方法檢測(cè)結(jié)果的敏感性和特異性。

資料與方法

材料：①菌株來源：臨床分離的對(duì)青霉素敏感的金黃色葡萄球菌12株和臨床分離的對(duì)青霉素耐藥的金黃色葡萄球菌30株，均來自本院2013年1-12月住院及門診患者送檢的標(biāo)本。質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 29213為產(chǎn)酶陽性對(duì)照菌，金黃色葡萄球菌ATCC 25923為產(chǎn)酶陰性對(duì)照菌。②儀器：使用德國西門子細(xì)菌分析儀做細(xì)菌鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)，青霉素紙片（10U）、試劑購自英國OXOID公司，頭孢硝噻吩紙片購自梅里埃診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，頭孢硝噻吩液體購自美國BD公司。

方法：①Cefinase液體法：Cefinase用梅里埃診斷產(chǎn)品，讓試劑放置于室溫條件中，用無菌去礦物水浸濕紙片，沾取少量待測(cè)菌菌落到紙片表面，出現(xiàn)紅色為陽性，1 h后無顏色改變?yōu)殛幮?。②Dryslide干粉法：Dryslide法用美國BD公司的頭孢硝噻吩干粉，以Nitrocefin Rehydration 2mL稀釋液將Nitrocefin 1mg稀釋，將頭孢硝噻吩液體滴在待測(cè)菌上，顏色由黃色變?yōu)榧t色為陽性，不變色為陰性。③Cloverleaf法：Cloverleaf用金葡菌標(biāo)準(zhǔn)菌株涂布，待測(cè)菌劃線，十字交界處帖青霉素紙片，培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。④Penicillin disk zone edge：青霉素邊緣試驗(yàn)用待測(cè)菌配成0.5濁度涂布，然后做青霉素紙片藥敏試驗(yàn)，培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果，抑菌圈＞19mm為陽性。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用χ2檢驗(yàn)分別做4種方法檢出結(jié)果的差異檢驗(yàn)和關(guān)聯(lián)性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

對(duì)青霉素敏感的金葡菌12株，對(duì)青霉素耐藥的金葡菌30株。結(jié)果見表1、表2。

討論

本文通過用4種方法同時(shí)對(duì)青霉素敏感的金黃色葡萄球菌12株和臨床分離的青霉素耐藥的金黃色葡萄球菌30株進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.50，P＞0.05），充分說明四種方法就本實(shí)驗(yàn)室的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)應(yīng)用中的可行價(jià)值。

2013CLSI以前曾經(jīng)推薦：假如青霉素的抑菌圈≥29mm或最小抑菌濃度≤0.12μg/mL時(shí)，在報(bào)告“S”時(shí)應(yīng)采用頭孢硝噻吩測(cè)定β-內(nèi)酰胺酶。繼續(xù)劃線分離后續(xù)菌株，可以考慮采用PCR測(cè)定BlaZ基因[3]。

當(dāng)有β-內(nèi)酰胺酶存在時(shí)，頭孢硝噻吩的β-內(nèi)酰胺環(huán)能被β-內(nèi)酰胺酶破壞，使其顏色由黃色變?yōu)榧t色，在操作方法上，頭孢硝噻吩紙片法是目前單底物中最敏感的，且廣譜，簡便易行，特異性高達(dá)100％，但其在某些條件下仍出現(xiàn)假陽性、假陰性，敏感性較低。頭孢硝噻吩液體法雖然較頭孢硝噻吩紙片法敏感度有所提高，但較紙片法操作復(fù)雜，在臨床不建議使用，適合科研，易保存[4]。Cloverleaf法敏感度91％，特異度100％，Cloverleaf法最大的優(yōu)勢(shì)在于將ATCC25923（β-內(nèi)酰胺酶誘導(dǎo)陰性的指示菌）質(zhì)控和待測(cè)菌同時(shí)涂抹于5％羊血平板上，待測(cè)菌劃線，貼10 U青霉素紙片，培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。結(jié)果較明顯。

尋求一種特異度好、敏感度高的檢測(cè)方法，正是檢驗(yàn)工作者的共同目標(biāo)，因?yàn)橹挥斜ＷC質(zhì)量，才能為臨床提供有價(jià)值的報(bào)告，也才能更好地為患者服務(wù)。常用的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法除以上4種外，還有微生物活性消失法、酸測(cè)量法、碘量法等[5]，但目前最常用的方法還是青霉素邊緣實(shí)驗(yàn)法，因其操作簡便，如無法開展淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌、莫拉菌等藥敏試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室，用此法替代就能給臨床診治帶來方便。因此，在對(duì)β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法的選擇上，青霉素邊緣實(shí)驗(yàn)法更能被廣大實(shí)驗(yàn)室所接受，而做好β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)工作更顯得極為重要。葡萄球菌的多重耐藥性除與產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶有關(guān)外，與抗生素的不合理使用也密切相關(guān)。因此，選擇一種特異度好、敏感度高的細(xì)菌鑒定藥敏方法，作為臨床醫(yī)生合理選藥的參考指標(biāo)，為臨床合理使用抗生素提供了有力的保障。

表1 4種方法檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶結(jié)果

表2 4種方法檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶敏感度和特異度（％）

[1] 陳艷清,賈建.頭孢硝噻吩紙片法檢測(cè)P-內(nèi)酰胺酶的評(píng)價(jià)[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2004,14（2）：25-27.

[2] 唐群力.兩種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法的應(yīng)用比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,5（7）：427-428.

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[4] 馬文杰,吳鏑,劉芳,等.醫(yī)院感染產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶金黃色葡萄球菌耐藥性研究分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,（20）：4958-4960.

[5] 袁紅萍,周文俊,朱奮勇,等.臨床常見病原菌的分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,（8）：1854-1856.

Com parison of the app lication o f detection m ethods on Staphylococcus aureusβ-lactam ase

Liu Jing1,Wang Bin2,Shen Jilu3
DepartmentofLaboratory,CancerHospitalofHefei Institute ofMaterial,Chinese Academy ofSciences2300311
The No.38Research Institute ofHealth,China Technology Group Corporation 2300002
AnhuiMedicalUniversity2300003

Objective：To compare the sensitivity and specificity of nitrocefin liquid（Cefinase）,nitrocefin paper（Dryslide）,clover experiment（Cloverleaf）,penicillin edge experiments（Penicillin disk zone edge）in the detection of Staphylococcus aureus β-lactamase.Methods：We detected Staphylococcus aureusβ-lactamase by Cefinase,Dryslide,Cloverleaf,Penicillin disk zone edge respectively.Results：The sensitivity of the 4methodswas 83％,66％,91％,91％.The specificitywas 100％,97％,100％,100％.Conclusion：The 4methods can provide reliable results for the clinicalapplication,but the Cloverleafand disk zoneedge Penicillin testing are sensitive to the test of theβ-lactamase.Themethod of the Nitrocefin paper can bemore accepted by the laboratory from the operation.

β-lactamase；Staphylococcusaureus；Nitrocefin liquid；Penicillin paper

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.27.76